• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    微生物在炎性關(guān)節(jié)病及人類風(fēng)濕性疾病中的作用

    2016-01-20 02:55:37黃林芳肖欣悅
    關(guān)鍵詞:牙菌斑菌群基因組

    黃林芳,肖欣悅,張 烜

    (中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科 風(fēng)濕免疫病學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100730)

    背景及研究進(jìn)展

    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種致殘率較高的自身免疫性疾病,全球患者超過5 000萬,它以滑膜炎為病理基礎(chǔ),目前與其發(fā)病相關(guān)的基因被不斷發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證,如HLA-DRB1、TNFAIP3、PTPN22和PADI4等,更發(fā)現(xiàn)環(huán)境因素也參與了其發(fā)病[1- 4],一項(xiàng)針對雙胞胎RA的研究表明,基因遺傳在其發(fā)病中所發(fā)揮的作用僅占60%[5],個體需具備RA遺傳背景、環(huán)境等綜合因素,才能最終導(dǎo)致RA的發(fā)生[6],近期越來越多的研究顯示,環(huán)境因素中的微生物菌群被認(rèn)為與RA發(fā)病密切相關(guān)。國際學(xué)術(shù)界也發(fā)現(xiàn)了腸道菌群和眾多疾病密切相關(guān)[7],包括消化道疾病(如腸炎[8])、代謝類疾病(如2型糖尿病[9])、傳染性疾病(如肝硬化[10]),還有心腦血管疾病(如動脈粥樣硬化[11])和免疫性疾病,個體想要維持健康狀態(tài),須在兼容有益微生物群的同時識別及對抗入侵物[12]??梢哉f,腸道菌群研究給諸多疾病的研究提供了一個非常好的切入點(diǎn),然而目前對有關(guān)參與RA發(fā)病機(jī)制的微生物的研究還不夠深入,從而阻礙了對RA更具有效性及特異性的治療方法的探索。因此,全面了解RA相關(guān)的微生物菌群有助推動對RA病理生理的深入探索及早期診斷和精準(zhǔn)醫(yī)療的實(shí)現(xiàn)。

    隨著大規(guī)模測序技術(shù)的出現(xiàn),組學(xué)方法使我們更好地理解人類微生物組的組成和功能[13]。幾十年來,科學(xué)家在實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)可培養(yǎng)的人體腸道內(nèi)細(xì)菌種類為1 000~1 150種,而每個個體至少有160種細(xì)菌,表明細(xì)菌在個體中是具有多樣性的,這或許與適應(yīng)環(huán)境改變和受到宿主基因遺傳性的影響有關(guān)[14],研究發(fā)現(xiàn),在任何時間,個體攜帶含有大約300萬個蛋白編碼基因的1~3 kg細(xì)菌[15],同時,居住在不同生物領(lǐng)域獨(dú)特的微生物菌團(tuán),也只能在特定的營養(yǎng)條件下生存[16]。人體的腸道微生物(通過1 000多個不同的物種代表)以一個成熟并對個體有益的方式進(jìn)化著,并且提供酶來幫助我們從飲食中提取所需的基本維生素和氨基酸,在這一進(jìn)化過程中逐漸形成了腸道微生物和宿主免疫反應(yīng)之間的相互適應(yīng)性。良好的腸道微生物群形成的免疫系統(tǒng),能維持體內(nèi)的平衡健康狀態(tài),菌群紊亂時則可導(dǎo)致炎癥的發(fā)生[17],包括肥胖、糖尿病、胃腸道癌癥和動脈粥樣硬化等,其中在自身免疫病領(lǐng)域最先報(bào)道的是炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)[8],其生態(tài)失調(diào)的過程以腸道有益微生物群種類的減少及腸道菌總量的增加為特征。

    微生物在疾病發(fā)病過程中的潛在決定作用一直未被重視,隨著現(xiàn)代微生物學(xué)的發(fā)展,微生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步推動了微生物群的許多研究。17世紀(jì),荷蘭顯微鏡學(xué)家列文虎克通過對自己牙菌斑的研究,開拓了微生物學(xué)的研究道路。紐約大學(xué)免疫學(xué)家Dan Littman的研究也發(fā)現(xiàn),腸道細(xì)菌對于Th17細(xì)胞的發(fā)育至關(guān)重要,正常無菌條件下飼養(yǎng)的小鼠生成的Th17細(xì)胞極少,但在實(shí)驗(yàn)過程中,他的研究小組發(fā)現(xiàn)購自一個供應(yīng)商的小鼠相比于來自另一個不同供應(yīng)商的小鼠具有更多的Th17細(xì)胞,結(jié)果表明,這一差異是由于小鼠的腸道微生物不同所導(dǎo)致的[18-19]。

    腸道微生物是一個影響新陳代謝及免疫穩(wěn)態(tài)的環(huán)境因素,每個個體腸道微生物的組成是相對穩(wěn)定的[20-21],但個體之間差異卻很大[22],它們覆蓋在腸道上皮細(xì)胞,維持著機(jī)體的正常免疫、清除致病性微生物等功能。隨著時間的推移,越來越多的研究開始關(guān)注疾病與特定的細(xì)菌和病毒的發(fā)病關(guān)系,包括RA、IBD、脊柱關(guān)節(jié)病(強(qiáng)直性脊柱炎和反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎)。微生物在自身免疫和其他風(fēng)濕性疾病的作用已慢慢滲入我們的研究中,現(xiàn)代微生物學(xué)的報(bào)道進(jìn)一步證實(shí)了腸道細(xì)菌感染可以引起關(guān)節(jié)炎這一假說,因此,人們也試圖通過改變腸道細(xì)菌成分來治療炎癥性關(guān)節(jié)炎。一個典型的例子是柳氮磺胺吡啶,這一藥物最終被視為改善病情的抗風(fēng)濕藥(disease-modifying anti-rheumatic drugs,DMARDs),并被美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)用于治療RA和IBD,其他一些具有抗菌特性的藥物也被用于RA的治療。RA與菌群相關(guān)的研究逐漸開始被報(bào)道,研究證明初診RA患者普氏菌增加而有益微生物減少,而普氏菌屬的相對含量與表位共享基因的存在呈負(fù)相關(guān),這表明人類腸道微生物的組成也可以部分地依賴于宿主基因組[23]。同類宏基因組之間也存在顯著差異,雖然這尚未得到充分的研究,但這些變化可能與治療反應(yīng)的預(yù)測存在某些相關(guān)性,二氫葉酸還原酶水平豐富的宏基因組樣本擬桿菌,可能與宿主二氫葉酸還原酶競爭甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)的結(jié)合和新陳代謝,因此RA患者微生物區(qū)高二氫葉酸還原酶含量的增加可能有助于解釋為什么只有部分RA患者口服MTX有效。

    綜上所述,這些研究提示腸道微生物在RA發(fā)病機(jī)制中存在很大的作用。針對腸道細(xì)菌的治療在最近幾十年已被納入治療風(fēng)濕病戰(zhàn)略的一部分,許多組織正在試圖通過調(diào)節(jié)菌群的組成成分以減輕炎癥反應(yīng),目前正在使用從生態(tài)系統(tǒng)水平干預(yù)到針對單一靶目標(biāo)的方法,采用親密捐贈者的完整細(xì)菌菌落,試圖用糞便微生物移植來恢復(fù)受者的“健康”腸道微生物[24]。糞便微生物移植在抗感染性結(jié)腸炎梭狀芽胞桿菌已被證明是非常有效的,盡管取得了引人注目的結(jié)果,但這種技術(shù)的使用尚存在一系列挑戰(zhàn)性,包括如何定義一個健康的微生物組、如何考慮一個合適的捐贈者等[25]。目前關(guān)于RA與腸道菌群的研究尚處于初始階段。

    重大研究結(jié)果

    人類腸道微生物在自身免疫性疾病中的作用越來越被認(rèn)可,對其認(rèn)識的加深可能改變我們現(xiàn)在認(rèn)為的生理和疾病狀態(tài)。越來越多的研究表明,為了充分利用微生物的功能,人類通過保持低度的炎癥狀態(tài)來維持與腸道菌群的共生關(guān)系,然而,某些對共生微生物群相對組成的干擾可以改變腸道固有層內(nèi)的免疫穩(wěn)態(tài),引起異常的免疫反應(yīng),隨著越來越多的人類微生物組研究的應(yīng)用,許多問題亟需更進(jìn)一步的探索。

    國內(nèi)研究團(tuán)隊(duì)通過元基因組關(guān)聯(lián)分析法,揭示了口腔和腸道微生物菌群或與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的致病和保護(hù)機(jī)制相關(guān)[26]。

    研究通過收集未經(jīng)治療及少數(shù)經(jīng)DMARDs治療的RA患者的糞便、牙菌斑和唾液樣本,以健康人群(包括直系親屬和共同生活無血緣關(guān)系親屬)作為對照進(jìn)行對比研究,并對治療前后RA患者的口腔和腸道微生物菌群的變化進(jìn)行對比研究,運(yùn)用元基因組鳥槍法測序技術(shù)檢測微生物組DNA[27]。研究共檢測了212份糞便標(biāo)本:77例初治RA患者、80例健康對照、17例初治RA及與其相應(yīng)的17例健康親屬、21例DMARDs治療過的RA患者,通過整合數(shù)據(jù)入已有的腸道微生物基因組數(shù)據(jù)庫目錄[28],結(jié)果發(fā)現(xiàn)77例初治RA患者和80例健康對照腸道微生物的組成都具有多樣性的特征,為了進(jìn)一步明確RA相關(guān)腸道菌群組成結(jié)構(gòu)的差異性,我們辨認(rèn)了117 219個高表達(dá)于RA患者的基因標(biāo)記,并且根據(jù)其變異豐度將這些基因整合入宏基因組關(guān)聯(lián)組群(MLGs)[29],形成了至少包含100個基因的88個MLGs,其中包括RA患者高表達(dá)的MLGs、對照組高表達(dá)的MLGs。結(jié)果發(fā)現(xiàn),RA腸道高表達(dá)革蘭陽性菌、低表達(dá)革蘭陰性菌,同時脂多糖的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌能力也低于健康對照,而還原性乙酰輔酶A通路的產(chǎn)生乙酸鹽的細(xì)菌(如某些梭菌屬)的表達(dá)是增加的,這些結(jié)果表明RA患者腸道微生物群不同于健康對照。

    為進(jìn)一步分析口腔微生物是否也與RA相關(guān),該研究通過運(yùn)用鳥槍法測序檢測了105個牙菌斑標(biāo)本:54例初治RA患者、51例健康對照;98例唾液標(biāo)本:51例初治RA患者、47例健康對照,然后將這些序列重新整合入一個包含320萬基因的基因數(shù)據(jù)庫,通過牙菌斑和唾液標(biāo)本,分別辨認(rèn)了371 990和258 055個基因標(biāo)記,采取同樣的方法構(gòu)建了MLGs,就目前所知,這是口腔腸道菌群的第一個宏基因組關(guān)聯(lián)分析,同樣,結(jié)果發(fā)現(xiàn),RA患者口腔微生物群也是失調(diào)的。統(tǒng)一得出以下結(jié)論:與健康人群相比,RA患者的口腔與腸道菌群在氧化還原條件下,鐵、硫、鋅和精氨酸的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝以及RA相關(guān)抗原如瓜氨酸環(huán)化的分子擬態(tài)等方面均表現(xiàn)出明顯異常,RA患者可檢測到失調(diào)的腸道微生物群,包括升高的革蘭陽性菌和降低的革蘭陰性菌等,并且與其臨床癥狀具有相關(guān)性,如自身免疫病相關(guān)抗體滴度,同時口腔微生物群也是失調(diào)的。

    RA患者身體不同部位微生物菌群是否具有一致性或差異性的特點(diǎn)?研究者通過全基因組及代謝途徑數(shù)據(jù)庫(KEGG數(shù)據(jù)庫)功能模塊分析,發(fā)現(xiàn)腸道和口腔微生物菌群功能具有一致性特點(diǎn),存在于口腔、腸道中的某種嗜血桿菌(Haemophilussp)在RA患者中呈現(xiàn)相對缺失的狀態(tài),并且與血清抗環(huán)瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptides,CCP)、類風(fēng)濕因子(rheumatoidfactor,RF)和C反應(yīng)蛋白(C-reactionprotein,CRP)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)在RA患者的牙菌斑、唾液和糞便中均明顯增加,并且與IgG水平呈正相關(guān),與低中度病情活動患者相比,病情高度活動的RA患者中表達(dá)更高,而在經(jīng)過治療之后的患者能部分恢復(fù)。揭示某些菌群異常在RA的主要病理生理機(jī)制如瓜氨酸環(huán)化異常中具有重要的作用,可能直接參與疾病發(fā)生。

    為了驗(yàn)證與RA相關(guān)的腸道菌群的診斷價(jià)值,研究者通過腸道宏基因組關(guān)聯(lián)方法構(gòu)建了疾病隨機(jī)森林分類器,通過對牙菌斑、唾液和糞便樣本的元基因檢測,形成的微生物菌群分類診斷模型對RA診斷的準(zhǔn)確率可顯著提高,其診斷準(zhǔn)確率接近100%。該分類診斷模型還可幫助判斷抗風(fēng)濕藥的療效,并區(qū)分RA的不同疾病病程,從而進(jìn)行疾病分層和藥物療效預(yù)警,同時研究者也對DMARDs治療前后RA患者的口腔和腸道微生物菌群的變化進(jìn)行了對比研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過治療之后的患者能部分恢復(fù)失調(diào)的腸道菌群,尤其是口腔樣本的結(jié)果。

    理論意義和應(yīng)用價(jià)值

    該宏基因組關(guān)聯(lián)分析定義了RA相關(guān)的腸道和口腔微生物的組成、功能的改變及DMARDs藥物治療后菌群部分恢復(fù),口腔和腸道微生物之間具有一致性,并且與臨床指標(biāo)(如CRP、抗CCP、RF)相關(guān),能初步地將RA患者分類,且糞便、牙菌斑和唾液標(biāo)本都容易取得。這一綜合性的調(diào)查表明,RA處于一個慢性炎癥的階段,致病性細(xì)菌過度生長或免疫調(diào)節(jié)性的共生體細(xì)菌缺乏將會促進(jìn)或加重其發(fā)病。

    這一研究結(jié)果被NatMed[30]和NatRewRheumatol[31]熱點(diǎn)評價(jià)。NatMed熱評:中國學(xué)者的這一發(fā)現(xiàn)不僅對RA的研究有重要作用,也提示我們健康微生物群的破壞導(dǎo)致異常的免疫調(diào)節(jié)可能是許多特發(fā)性炎癥性疾病的潛在共性,包括:代謝綜合征、2型糖尿病、動脈粥樣硬化[32]和IBD[33]等,這些情況的形成可能是一個常見的生態(tài)失調(diào)的表現(xiàn),可能是類似環(huán)境驅(qū)動、遺傳傾向等共同導(dǎo)致的,這樣一個模型可以解釋常見的RA合并某些潛在炎癥成分共存的疾病,最值得注意的是心臟病和抑郁癥[34]。宏基因組關(guān)聯(lián)分析研究的發(fā)展,提供了一個有利的條件,通過這些條件識別腸道微生物群的共性,并且進(jìn)一步分析身體其他部位的失調(diào)及炎癥紊亂之間的關(guān)系,從鳥槍法測序到元轉(zhuǎn)錄組分析的擴(kuò)展,使細(xì)菌的潛在功能及不同基因的表達(dá)都得到了特征性描述,也可以讓我們更進(jìn)一步了解微生物群。

    結(jié)  論

    這一研究是國際上首次同時進(jìn)行的口腔和腸道微生物菌群元基因組關(guān)聯(lián)分析,揭示腸道菌群異常在人類重大慢性非感染性疾病中的機(jī)制和臨床意義,對此開展進(jìn)一步的臨床驗(yàn)證將有利于深入了解RA發(fā)病機(jī)制,并有望對RA疾病分層、藥物療效預(yù)警及尋求新型治療靶點(diǎn)從而達(dá)到對疾病的精準(zhǔn)診療起到積極推動作用,并為元基因組學(xué)輔助的RA個性化診療方案提供基礎(chǔ)。哈佛醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)家Diane Mathis說:“多年來一直懷疑,在人類和動物模型中像關(guān)節(jié)炎一類的自身免疫疾病的形成依賴于腸道微生物群?,F(xiàn)在,這些懷疑開始在人體中得到證實(shí),這是一個非常驚人的研究發(fā)現(xiàn)。”我們目前還在繼續(xù)這方面的研究,進(jìn)一步觀察這一部分患者在治療2年后臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與腸道及口腔微生物的相關(guān)性。

    [1]Raychaudhuri S,Sandor C,Stahl EA,et al.Five amino acids in three HLA proteins explain most of the association between MHC and seropositive rheumatoid arthritis[J].Nat Genet,2012,44:291-296.

    [2]Viatte S,Plant D,Raychaudhuri S.Genetics and epigenetics of rheumatoid arthritis[J].Nat Rev Rheumatol,2013,9:141-153.

    [3]Okada Y,Wu D,Trynka G,et al.Genetics of rheumatoid arthritis contributes to biology and drug discovery[J].Nature,2014,506:376-381.

    [4]Jiang L,Yin J,Ye L,et al.Novel risk loci for rheumatoid arthritis in Han Chinese and congruence with risk variants in Europeans[J].Arthritis Rheumatol,2014,66:1121-1132.

    [5]MacGregor AJ,Snieder H,Rigby AS,et al.Characterizing the quantitative genetic contribution to rheumatoid arthritis using data from twins[J].Arthritis Rheum,2000,43:30-37.

    [6]McInnes IB,Schett G.The pathogenesis of rheumatoid arthritis[J].N Engl J Med,2011,365:2205-2219.

    [7]Tilg H,Moschen AR.Food,immunity,and the microbiome[J].Gastroenterology,2015,148:1107-1119.

    [8]Huang H,Vangay P,McKinlay CE,et al.Multi-omics analysis of inflammatory bowel disease[J].Immunol Lett,2014,162:62- 68.

    [9]Forslund K,Hildebrand F,Nielsen T,et al.Disentangling type 2 diabetes and metformin treatment signatures in the human gut microbiota[J].Nature,2015,528:262-266.

    [10] Qin N,Yang F,Li A,et al.Alterations of the human gut microbiome in liver cirrhosis[J].Nature,2014,513:59- 64.

    [11] Vinjé S,Stroes E,Nieuwdorp M,et al.The gut microbiome as novel cardio-metabolic target:the time has come[J].Eur Heart J,2014,35:883- 887.

    [12] Lee YK,Mazmanian SK.Has the microbiota played a critical role in the evolution of the adaptive immune system[J].Science,2010,330:1768-1773.

    [13] Franzosa EA,Hsu T,Sirota-Madi A,et al.Sequencing and beyond:integrating molecular ‘omics’ for microbial community profiling[J].Nat Rev Microbiol,2015,13:360-372.

    [14] Qin J,Li R,Raes J,et al.A human gut microbial gene catalogue established by metagenomic sequencing[J].Nature,2010,464:59- 65.

    [15] NIH HMP Working Group,Peterson J,Garges S,et al.The NIH Human Microbiome Project[J].Genome Res,2009,19:2317-2323.

    [16] Human Microbiome Project C:Structure,function and diversity of the healthy human microbiome[J].Nature,2012,486:207-214.

    [17] Littman DR,Pamer EG.Role of the commensal microbiota in normal and pathogenic host immune responses[J].Cell Host Microbe,2011,10:311-323.

    [18] Wu HJ,Ivanov,II,Darce J,et al.Gut-residing segmented filamentous bacteria drive autoimmune arthritis via T helper 17 cells[J].Immunity,2010,32:815- 827.

    [19] Longman RS,Yang Y,Diehl GE,et al.Microbiota:host interactions in mucosal homeostasis and systemic autoimmunity[J].Cold Spring Harb Symp Quant Biol,2013,78:193-201.

    [20] Faith JJ,Guruge JL,Charbonneau M,et al.The long-term stability of the human gut microbiota[J].Science,2013,341:1237439.

    [21] Schloissnig S,Arumugam M,Sunagawa S,et al.Genomic variation landscape of the human gut microbiome[J].Nature,2013,493:45-50.

    [22] Yatsunenko T,Rey FE,Manary MJ,et al.Human gut microbiome viewed across age and geography[J].Nature,2012,486:222-227.

    [23] Scher JU,Sczesnak A,Longman RS,et al.Expansion of intestinal Prevotella copri correlates with enhanced susceptibility to arthritis[J].Elife,2013,2:e01202.

    [24] van Nood E,Vrieze A,Nieuwdorp M,et al.Duodenal infusion of donor feces for recurrent Clostridium difficile[J].N Engl J Med,2013,368:407- 415.

    [25] Colman RJ,Rubin DT.Fecal microbiota transplantation as therapy for inflammatory bowel disease:a systematic review and meta-analysis[J].J Crohns Colitis,2014,8:1569-1581.

    [26] Zhang X,Zhang D,Jia H,et al.The oral and gut microbiomes are perturbed in rheumatoid arthritis and partly normalized after treatment[J].Nat Med,2015,21:895-905.

    [27] Tringe SG,von Mering C,Kobayashi A,et al.Comparative metagenomics of microbial communities[J].Science,2005,308:554-557.

    [28] Li J,Jia H,Cai X,et al.An integrated catalog of reference genes in the human gut microbiome[J].Nat Biotechnol,2014,32:834- 841.

    [29] Qin J,Li Y,Cai Z,et al.A metagenome-wide association study of gut microbiota in type 2 diabetes[J].Nature,2012,490:55- 60.

    [30] Rogers GB.Germs and joints:the contribution of the human microbiome to rheumatoid arthritis[J].Nat Med,2015,21:839- 841.

    [31] Phillips R.Rheumatoid arthritis:Microbiome reflects status of RA and response to therapy[J].Nat Rev Rheumatol,2015,11:502.

    [32] Devaraj S,Hemarajata P,Versalovic J.The human gut microbiome and body metabolism:implications for obesity and diabetes[J].Clin Chem,2013,59:617- 628.

    [33] Hedin C,van der Gast CJ,Rogers GB,et al.Siblings of patients with Crohn’s disease exhibit a biologically relevant dysbiosis in mucosal microbial metacommunities[J].Gut,2016,65(6):944-953.

    [34] Halaris A.Inflammation,heart disease,and depression[J].Curr Psychiatry Rep,2013,15:400.

    猜你喜歡
    牙菌斑菌群基因組
    什么是牙菌斑
    “云雀”還是“貓頭鷹”可能取決于腸道菌群
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:50
    牛參考基因組中發(fā)現(xiàn)被忽視基因
    “水土不服”和腸道菌群
    科學(xué)(2020年4期)2020-11-26 08:27:06
    如何預(yù)防牙菌斑?
    健康之家(2019年9期)2019-12-14 03:44:43
    如果停止刷牙會發(fā)生什么
    天天說刷牙,但是刷的真是“牙”本身嗎?
    肉牛剩余采食量與瘤胃微生物菌群關(guān)系
    咽部菌群在呼吸道感染治療中的臨床應(yīng)用
    基因組DNA甲基化及組蛋白甲基化
    遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:58:49
    国产亚洲午夜精品一区二区久久| 午夜精品国产一区二区电影| 在现免费观看毛片| 免费观看无遮挡的男女| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产免费现黄频在线看| 亚洲第一av免费看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 在线免费观看不下载黄p国产| 午夜福利影视在线免费观看| 久久ye,这里只有精品| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美激情极品国产一区二区三区| 波多野结衣av一区二区av| 免费黄色在线免费观看| 一本大道久久a久久精品| 91精品国产国语对白视频| 国产精品人妻久久久影院| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 只有这里有精品99| 成年美女黄网站色视频大全免费| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久精品免费免费高清| 亚洲少妇的诱惑av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 男人爽女人下面视频在线观看| 在现免费观看毛片| 婷婷色综合www| 久久午夜福利片| 日本av手机在线免费观看| 色吧在线观看| 久久精品国产自在天天线| 满18在线观看网站| 亚洲,欧美精品.| 日韩视频在线欧美| 在线观看人妻少妇| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲图色成人| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 丝袜美足系列| av片东京热男人的天堂| 成人国产麻豆网| 一区在线观看完整版| 日本-黄色视频高清免费观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 精品国产乱码久久久久久男人| 18禁国产床啪视频网站| 欧美成人午夜免费资源| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 高清不卡的av网站| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久热在线av| 丰满乱子伦码专区| 欧美中文综合在线视频| 久久久久视频综合| 久久久久久伊人网av| 99热国产这里只有精品6| 一级,二级,三级黄色视频| 电影成人av| 成年美女黄网站色视频大全免费| 成人免费观看视频高清| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品二区激情视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 精品一区二区三卡| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲美女搞黄在线观看| 青春草国产在线视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品久久久久久精品电影小说| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日本爱情动作片www.在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 两个人看的免费小视频| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲内射少妇av| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 2022亚洲国产成人精品| 2022亚洲国产成人精品| 久久精品亚洲av国产电影网| 久久99精品国语久久久| 最新的欧美精品一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 在线看a的网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 1024视频免费在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 女性生殖器流出的白浆| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产探花极品一区二区| 欧美日本中文国产一区发布| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美+日韩+精品| 看十八女毛片水多多多| 成人免费观看视频高清| 欧美日韩综合久久久久久| 久久国产精品大桥未久av| 国产成人精品在线电影| 交换朋友夫妻互换小说| www.av在线官网国产| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 黄片播放在线免费| 天堂8中文在线网| 色视频在线一区二区三区| 精品少妇久久久久久888优播| 日日爽夜夜爽网站| 咕卡用的链子| 热99国产精品久久久久久7| 日本欧美国产在线视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 两个人看的免费小视频| 人人澡人人妻人| 免费观看无遮挡的男女| 一本久久精品| 一级a爱视频在线免费观看| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲成人一二三区av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 在线观看www视频免费| 在线观看人妻少妇| 久久婷婷青草| 18禁国产床啪视频网站| 欧美激情极品国产一区二区三区| videosex国产| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 精品福利永久在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 精品人妻偷拍中文字幕| 免费在线观看黄色视频的| 看非洲黑人一级黄片| 欧美精品国产亚洲| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美日韩精品网址| 欧美成人午夜精品| 亚洲精品国产av蜜桃| 极品少妇高潮喷水抽搐| 青春草视频在线免费观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲国产精品999| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 中文字幕人妻丝袜制服| 男女啪啪激烈高潮av片| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品成人在线| 欧美精品一区二区免费开放| 免费观看a级毛片全部| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产男女内射视频| 黑人猛操日本美女一级片| 在线观看美女被高潮喷水网站| av国产久精品久网站免费入址| 不卡av一区二区三区| 亚洲国产色片| 欧美成人午夜精品| 欧美成人午夜免费资源| tube8黄色片| 蜜桃在线观看..| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 麻豆av在线久日| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品无大码| 一区二区av电影网| 少妇的丰满在线观看| 欧美精品av麻豆av| 日日爽夜夜爽网站| 热99国产精品久久久久久7| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲四区av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 男人舔女人的私密视频| 男人添女人高潮全过程视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | av.在线天堂| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久久国产一区二区| 久久99热这里只频精品6学生| 婷婷色综合www| 九色亚洲精品在线播放| 久热久热在线精品观看| tube8黄色片| 不卡视频在线观看欧美| 国产成人精品久久久久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 日韩制服骚丝袜av| 观看av在线不卡| 少妇人妻 视频| av天堂久久9| av国产精品久久久久影院| 午夜老司机福利剧场| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美bdsm另类| 大陆偷拍与自拍| 日韩一本色道免费dvd| 26uuu在线亚洲综合色| 欧美另类一区| 热re99久久国产66热| 国产精品一区二区在线观看99| 精品国产露脸久久av麻豆| 青草久久国产| av免费在线看不卡| 国产片内射在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲精品第二区| 日日啪夜夜爽| 在线精品无人区一区二区三| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品自拍成人| 人人妻人人澡人人看| 亚洲伊人久久精品综合| 国产人伦9x9x在线观看 | 国产又色又爽无遮挡免| 色94色欧美一区二区| 国产精品 国内视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美黄色片欧美黄色片| 制服丝袜香蕉在线| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品熟女久久久久浪| 国产亚洲一区二区精品| 日韩视频在线欧美| 亚洲经典国产精华液单| 91国产中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国精品久久久久久国模美| 秋霞在线观看毛片| 日本欧美视频一区| 看十八女毛片水多多多| 2022亚洲国产成人精品| 国产成人免费观看mmmm| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品久久久久久精品古装| 秋霞伦理黄片| 伦理电影大哥的女人| 黄片无遮挡物在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 有码 亚洲区| 国产成人a∨麻豆精品| 国产乱来视频区| 欧美97在线视频| 老司机影院毛片| 男女边摸边吃奶| 亚洲av.av天堂| 美女xxoo啪啪120秒动态图| av国产久精品久网站免费入址| 下体分泌物呈黄色| 熟妇人妻不卡中文字幕| 欧美+日韩+精品| 母亲3免费完整高清在线观看 | 91在线精品国自产拍蜜月| 久久久久精品性色| 欧美av亚洲av综合av国产av | 国产成人精品在线电影| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲伊人久久精品综合| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲四区av| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲成人av在线免费| 国产成人精品久久二区二区91 | 99re6热这里在线精品视频| 色网站视频免费| 婷婷色综合大香蕉| 一区二区三区激情视频| 老熟女久久久| 五月开心婷婷网| 精品国产一区二区久久| 国产综合精华液| 欧美精品亚洲一区二区| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品蜜桃在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 香蕉国产在线看| xxx大片免费视频| av片东京热男人的天堂| 黄片播放在线免费| 亚洲精品日本国产第一区| 男人舔女人的私密视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产乱来视频区| 两个人免费观看高清视频| 永久网站在线| 十分钟在线观看高清视频www| 精品少妇内射三级| 伊人久久国产一区二区| 亚洲中文av在线| av免费观看日本| 国产一区二区 视频在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产淫语在线视频| 成年美女黄网站色视频大全免费| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲欧美一区二区三区久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 九草在线视频观看| 波多野结衣一区麻豆| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 欧美成人午夜精品| 久久亚洲国产成人精品v| 1024视频免费在线观看| 午夜激情久久久久久久| 一本大道久久a久久精品| 自线自在国产av| 欧美激情极品国产一区二区三区| 免费在线观看黄色视频的| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲精品第二区| 久久毛片免费看一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看 | 久久午夜综合久久蜜桃| 一二三四在线观看免费中文在| 午夜福利乱码中文字幕| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲国产精品成人久久小说| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品三级大全| 美女国产高潮福利片在线看| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 欧美人与善性xxx| 在线观看人妻少妇| 国产乱来视频区| 91精品国产国语对白视频| 又大又黄又爽视频免费| 国产伦理片在线播放av一区| 国产精品久久久久久久久免| 看免费成人av毛片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产又色又爽无遮挡免| 一区二区三区精品91| 在线观看美女被高潮喷水网站| 另类精品久久| 美女高潮到喷水免费观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产成人a∨麻豆精品| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久久久精品人妻al黑| 日本av免费视频播放| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品一区二区在线观看99| 99热网站在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 男女免费视频国产| 亚洲欧洲日产国产| 秋霞在线观看毛片| 国产一区有黄有色的免费视频| 制服丝袜香蕉在线| 国产精品 欧美亚洲| 最近的中文字幕免费完整| 日韩欧美一区视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 观看美女的网站| 国产爽快片一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 国产麻豆69| 春色校园在线视频观看| 男女无遮挡免费网站观看| 久久99精品国语久久久| 一二三四中文在线观看免费高清| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲精品aⅴ在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久久久久久久久人人人人人人| xxx大片免费视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲久久久国产精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 最近手机中文字幕大全| 精品人妻在线不人妻| 亚洲国产最新在线播放| 涩涩av久久男人的天堂| 香蕉丝袜av| 免费av中文字幕在线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产在线视频一区二区| 少妇人妻 视频| 国产在视频线精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲人成77777在线视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产高清不卡午夜福利| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 欧美日韩av久久| 亚洲,欧美,日韩| 日本vs欧美在线观看视频| 女性被躁到高潮视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产又爽黄色视频| 亚洲人成电影观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产av国产精品国产| 亚洲国产成人一精品久久久| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产高清国产精品国产三级| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久人妻熟女aⅴ| 成人影院久久| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 电影成人av| 国精品久久久久久国模美| www.自偷自拍.com| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 黄片播放在线免费| 国产野战对白在线观看| 男女边摸边吃奶| 在线观看免费高清a一片| 欧美97在线视频| 久久99蜜桃精品久久| 最近手机中文字幕大全| 赤兔流量卡办理| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲国产色片| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲欧美清纯卡通| 人妻人人澡人人爽人人| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 大香蕉久久成人网| 午夜91福利影院| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日韩伦理黄色片| av不卡在线播放| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲av男天堂| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 免费高清在线观看日韩| 激情五月婷婷亚洲| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 满18在线观看网站| 看免费av毛片| 日韩视频在线欧美| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲成人手机| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 久热久热在线精品观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品欧美亚洲77777| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久免费观看电影| 在线观看免费高清a一片| 男人添女人高潮全过程视频| 日本午夜av视频| av卡一久久| 蜜桃在线观看..| 亚洲综合色惰| 激情视频va一区二区三区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产人伦9x9x在线观看 | 久久99精品国语久久久| 久久午夜福利片| 国产成人一区二区在线| 性少妇av在线| 超碰97精品在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 青青草视频在线视频观看| 丁香六月天网| 亚洲精品,欧美精品| av电影中文网址| 国产av一区二区精品久久| 最黄视频免费看| 黄色视频在线播放观看不卡| 深夜精品福利| 亚洲国产av影院在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲 欧美一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 精品一区二区免费观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产在线免费精品| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产极品粉嫩免费观看在线| 秋霞在线观看毛片| 精品国产乱码久久久久久男人| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 精品人妻在线不人妻| 99久久中文字幕三级久久日本| 韩国av在线不卡| 天天操日日干夜夜撸| 午夜福利影视在线免费观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 精品一区在线观看国产| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 另类精品久久| 美女大奶头黄色视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 女人久久www免费人成看片| 在线观看国产h片| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 岛国毛片在线播放| www.精华液| 91成人精品电影| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 青春草国产在线视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产乱人偷精品视频| 只有这里有精品99| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 91成人精品电影| 99热国产这里只有精品6| 热re99久久精品国产66热6| 一级,二级,三级黄色视频| 一本大道久久a久久精品| 成人亚洲精品一区在线观看| 搡老乐熟女国产| 美女午夜性视频免费| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲成人一二三区av| a级毛片在线看网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 欧美激情高清一区二区三区 | 亚洲成人手机| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 亚洲三区欧美一区| av网站免费在线观看视频| 日韩免费高清中文字幕av| 久久国产精品大桥未久av| 我的亚洲天堂| 1024香蕉在线观看| 亚洲综合色网址| 国产片特级美女逼逼视频| 国产精品一区二区在线观看99| 免费观看性生交大片5| 免费在线观看完整版高清| 日本vs欧美在线观看视频| 看免费av毛片| 一个人免费看片子| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费观看av网站的网址| 91精品伊人久久大香线蕉| 看免费成人av毛片| 两个人看的免费小视频| 久久狼人影院| 久久久久国产一级毛片高清牌| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 免费人妻精品一区二区三区视频| 五月天丁香电影| videosex国产| 久久精品久久精品一区二区三区| 欧美+日韩+精品| 青青草视频在线视频观看| a级片在线免费高清观看视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 天天影视国产精品| 少妇的丰满在线观看| tube8黄色片| 亚洲成国产人片在线观看| 97在线人人人人妻| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 最近最新中文字幕大全免费视频 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 秋霞在线观看毛片| 最新的欧美精品一区二区| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产成人精品久久二区二区91 | 国产亚洲最大av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产成人a∨麻豆精品| 国产欧美亚洲国产| av国产精品久久久久影院| 国产一区二区激情短视频 | 老司机影院成人| 大话2 男鬼变身卡| 女性被躁到高潮视频| 男的添女的下面高潮视频| 久久久久精品性色| a级毛片在线看网站| av电影中文网址| 欧美xxⅹ黑人| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品av久久久久免费|