小兒雙金清熱口服液體內(nèi)外抗菌效果研究

小兒雙金清熱口服液體內(nèi)外抗菌效果研究

朱金媛1，鄒鳳1，何軍2，郝信東2，田景振1，崔清華1

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2.山東潤(rùn)華藥業(yè)有限公司，山東 濟(jì)南 250335)

摘要：目的觀察小兒雙金清熱口服液體內(nèi)外的抗菌作用。方法采用平皿二倍稀釋法測(cè)定小兒雙金對(duì)多種臨床分離菌的MIC值，以評(píng)價(jià)小兒雙金的體外抗菌活性；通過小鼠體內(nèi)腹腔注射法感染給藥小鼠，觀測(cè)給藥小鼠在染菌后7 d內(nèi)的死亡率。結(jié)果小兒雙金清熱口服液對(duì)包括革蘭陽性菌和革蘭陰性菌在內(nèi)的多種細(xì)菌均具有一定的體外抗菌活性，對(duì)細(xì)菌引起小鼠死亡有一定的保護(hù)作用。結(jié)論小兒雙金清熱口服液具有明顯的抗菌作用。

關(guān)鍵詞：小兒雙金清熱口服液；體內(nèi)外；抗菌；變形桿菌；金葡菌

基金項(xiàng)目：山東省中醫(yī)藥抗病毒協(xié)同創(chuàng)新中心項(xiàng)目(No.XTCX2014C-02)；山東中醫(yī)藥大學(xué)2014年SRT項(xiàng)目(No.2014180),本項(xiàng)目在山東中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練平臺(tái)完成

作者簡(jiǎn)介：朱金媛，女，研究方向：制藥工程，E-mail：1741032608@qq.com

通訊作者：崔清華，女，研究方向：中藥制劑分析，Tel:0531-89628597，E-mail：user753951@163.com

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Study on antibacterial effects of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid in vitro and in vivo activity

ZHUJin-yuan1,ZOUFeng1,HEJun2,HAOXin-dong2,TIANJing-zhen1,CUIQing-hua1

(1.ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan250335,China；2.Shandong

RunhuaPharmaceuticalCo.,Ltd.,Jinan250335,China)

Abstract：ObjectiveTo observe the antibacterial effects of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid in vitro and in vivo.MethodsUsing the method of two-fold agar dilution to determine the MIC values of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid for a variety of clinical isolates,and evaluate the antibacterial activity in vitro of Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid;Using the method of intraperitoneal injection to infect the mice,then observe the rates of mice mortality within 7 d.ResultsXiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid had certain antibacterial activity in vitro on bacteria including a variety of gram positive and gram negative bacteria,it afforded some protection for the death of mice by bacteria.ConclusionXiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid had obvious antibacterial effects.

Key words:Xiaoer Shuangjin Qingre Oral Liquid;In vitro and in vivo;Antibacterial;Proteus;Staphylococcus aureus

小兒雙金清熱口服液主要由金銀花、蒲公英、大青葉、板藍(lán)根、赤芍、柴胡、秦艽、荊芥等多味中藥組成，根據(jù)現(xiàn)代制備工藝研制而成，具有疏風(fēng)化濕、解毒清熱之功效，臨床上用于小兒外感發(fā)熱初期，治療低熱、咳嗽、咽喉紅腫等癥。現(xiàn)代藥理研究表明該組方中各味藥如金銀花[1，2]、蒲公英[3]、大青葉[4]、板藍(lán)根[5]、柴胡[6]等均具有一定的解熱、抗炎、抗菌等藥理作用。本實(shí)驗(yàn)主要考察了小兒雙金清熱口服液的體內(nèi)外抗菌作用。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重12~15 g，山東魯抗實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(魯)20130001。

1.2實(shí)驗(yàn)菌種金黃色葡萄球菌ATCC6538，大腸埃希菌(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床分離2株)，銅綠假單胞菌(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床分離2株)，福氏志賀菌(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床分離2株)，變形桿菌CMCC(B)49005，均為標(biāo)準(zhǔn)菌株，山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。

1.3藥品及主要試劑小兒雙金清熱口服液(山東潤(rùn)華藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140112)；生理鹽水(山東克倫藥業(yè)有限公司)；青霉素(北京悅康凱悅制藥有限公司，批號(hào)：06121005)；鏈霉素(北京悅康凱悅制藥有限公司，批號(hào)：08111103)；慶大霉素(北京悅康凱悅制藥有限公司，批號(hào)：09021012)。

1.4儀器96孔培養(yǎng)板(Fisher scientific)；MK3酶標(biāo)儀(Labsystems)；全自動(dòng)高壓滅菌鍋(YMS-280B型，寧波鎮(zhèn)海金鑫)；超凈工作臺(tái)(北京市半導(dǎo)體設(shè)備一廠)。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1體外抗菌實(shí)驗(yàn)[7]

2.1.1供試品的制備取藥液50 mL，加乙醇至含醇量為70%，4 ℃下靜置24 h，取上清液，回收乙醇，藥液加水稀釋至100 mL，備用。

2.1.2體外抑菌實(shí)驗(yàn)參照NCCLS標(biāo)準(zhǔn)采用微量稀釋法進(jìn)行。取滅菌96孔板，雙倍稀釋法用MH肉湯培養(yǎng)基稀釋“2.1.1”項(xiàng)下供試品藥液，同樣方法接種到含1 mg·mL-1雙抗(青霉素、鏈霉素)培養(yǎng)基孔內(nèi)，作為陽性藥對(duì)照管；接種到不含藥液的培養(yǎng)基孔內(nèi)，作為菌液對(duì)照管；另設(shè)立不接種的含64 mg·mL-1受試藥培養(yǎng)基對(duì)照孔，37 ℃培養(yǎng)24 h，酶標(biāo)儀600 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)OD值，以確定細(xì)菌無生長(zhǎng)的最低抑菌濃度。

2.2體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)[8]

2.2.1最小致死菌量(MLD)的測(cè)定將細(xì)菌種到普通肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)18 h后，進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，4 ℃保存待用。選取健康昆明種小鼠，隨機(jī)分為6組，每組8只，分別為5個(gè)菌液稀釋組和一個(gè)空白組。每組分別腹腔注射生理鹽水溶液稀釋的菌溶液(稀釋濃度分別為10-1、10-2、10-3、10-4)1 mL，感染后觀察并記錄48 h內(nèi)小鼠死亡數(shù)，已引起小鼠80%~100%死亡的最低劑量作為MLD，用該劑量作為體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)的感染劑量。

2.2.2細(xì)菌感染小鼠保護(hù)實(shí)驗(yàn)按細(xì)菌種類分組，每組選取健康小鼠90只，體重12~15 g，隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、慶大霉素(青霉素)對(duì)照組、小兒雙金大劑量組0.027 mL·g-1(相當(dāng)于臨床用量的2倍)，中劑量組0.013 5 mL·g-1(相當(dāng)于臨床用量)，小劑量組0.006 8 mL·g-1(相當(dāng)于臨床用量的1/2倍)。各組動(dòng)物按劑量連續(xù)灌胃給藥7 d(空白和模型組給予等劑量生理鹽水，慶大霉素對(duì)照組染菌前一天給藥1次)，每天1次。第5天給藥30 min后選用“2.2.1”項(xiàng)下細(xì)菌濃度小鼠腹腔注射給藥1 mL，造成感染(空白組注射等劑量生理鹽水)。觀察7 d內(nèi)各組小鼠死亡數(shù)。采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1體外抗菌實(shí)驗(yàn)小兒雙金清熱口服液體外抗菌效果較好，其中對(duì)銅綠假單胞菌、痢疾桿菌、變形桿菌3種菌株的MIC為32.34 mg·mL-1。對(duì)金葡菌、大腸埃希菌MIC為64.69 mg·mL-1，見表1。

表1　小兒雙金的體外抑菌活性( n=2)

3.2體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)

3.2.1不同細(xì)菌MLD測(cè)定結(jié)果見表2。

表2　不同細(xì)菌MLD測(cè)定結(jié)果

3.2.2細(xì)菌感染小鼠保護(hù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小兒雙金清熱口服液可使腹腔感染金葡菌、痢疾桿菌、變形桿菌的小鼠的死亡率明顯降低，保護(hù)率明顯提高(P<0.05或0.01)，對(duì)感染大腸埃希菌和銅綠菌的小鼠亦有一定的保護(hù)作用，結(jié)果見表3。

表3　小兒雙金清熱口服液對(duì)細(xì)菌感染小鼠

注：與模型對(duì)照組比較，**P<0.01，*P<0.05

4結(jié)論

4.1小兒雙金清熱口服液為純中藥復(fù)方制劑，臨床治療小兒感冒多年，全方共由16味藥組成，大部分中藥已有文獻(xiàn)報(bào)道具有抗菌抗病毒作用，是本方抗菌抗病毒的藥理學(xué)基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小兒雙金清熱口服液體外抗菌效果較好，其中對(duì)銅綠假單胞菌、痢疾桿菌、變形桿菌3種菌株的MIC為32.34 mg·mL-1。對(duì)金葡菌、大腸埃希菌MIC為64.69 mg·mL-1。體內(nèi)抗菌結(jié)果表明，小兒雙金清熱口服液可使腹腔感染金葡菌、痢疾桿菌、變形桿菌的小鼠的死亡率明顯降低，保護(hù)率明顯提高(P<0.05或0.01)，對(duì)感染大腸埃希菌和銅綠菌的小鼠亦有一定的保護(hù)作用。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均有效的證明了小兒雙金清

熱口服液的抗菌作用。

4.2實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，小鼠死亡情況與體重成正比，體重越小，注射菌種后致死率越高。這一現(xiàn)象可能與小鼠的免疫力發(fā)育情況有關(guān)。

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