頂空氣相色譜法測定鹽酸羅匹尼羅原料藥的溶劑殘留

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頂空氣相色譜法測定鹽酸羅匹尼羅原料藥的溶劑殘留

張小妮1，劉雪峰2，王嫦鶴2，劉海靜1，2*

(1.陜西中醫(yī)藥大學，咸陽712046；2.陜西省食品藥品檢驗所，西安710065)

摘要：目的建立頂空毛細管氣相色譜法測定鹽酸羅匹尼羅中有機溶劑殘留。方法采用毛細管色譜柱DB-624(30 m×320 mm×1.8 μm)，載氣為氮氣，流速1.5 mL·min-1，分流比1∶1；FID檢測器，進樣口溫度為200 ℃，檢測器溫度為250 ℃；程序升溫，初始溫度35 ℃,維持5 min，以10 ℃·min-1的升溫速率升至240 ℃，維持5 min；頂空進樣，頂空瓶平衡溫度為100 ℃，平衡時間30 min。結(jié)果甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的線性范圍分別為127.5～1 020(r=0.998 7)，75.09～600.7(r=0.996 7)，15.03～120.3(r=0.999 7)，7.212～57.70(r=0.999 4)，125.6～1 005(r=0.999 2)和5.256～42.05(r=0.998 7)，線性關(guān)系良好。平均回收率為96.7%，96.1%，95.5%，93.6%，92.7%和92.2%，其RSD分別為1.6%，1.2%，2.3%，2.7%，3.5%和3.0%。結(jié)論所建立的方法準確、簡便、重復(fù)性好，可用于鹽酸羅匹尼羅原料藥中6種有機溶劑殘留的測定。

關(guān)鍵詞：頂空氣相色譜法；鹽酸羅匹尼羅原料藥；溶劑殘留

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.013

中圖分類號：R927.2文獻標志碼：A

作者簡介：張小妮，女，碩士研究生

收稿日期：(2015-03-02)

Determination of residual solvents in ropinirole hydrochloride by headspace gas chromatography

ZHANG Xiaoni1，LIU Xuefeng2，WANG Changhe2，LIU Haijing1，2*(1. Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China；2. Shaanxi Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710065，China)

Abstract:ObjectiveTo establish a headspace capillary GC method for the determination of residual solvents in ropinirole hydrochloride. MethodsThe experimental condition was as follows:ADB-624 capillary column(30 m×320 mm×1.8 μm) was used， N2 was used as the carrier gas at a flow rate of 1.5 mL·min-1，and split rate was 1∶1；The injector temperature was 200 ℃ and the FID detector was 250 ℃；The oven temperature was initially held at 35 ℃ for 5 min and then programmed to 240 ℃ at 10 ℃·min-1 and held for 5 min；The headspace sampling was used at heated temperature 100 ℃ for 30 min. ResultsThe linear ranges of methanol，ethanol，methylene，chloride，n-hexane，ethylacetate，pyridine were 127.5-1 020(r=0.999 17)， 75.09-600.7(r=0.996 7)，15.03-120.3(r=0.999 7)，7.212-57.70(r=0.999 4)， 125.6-1 005(r=0.999 2)and 5.256-42.05(r=0.998 7), respectively.The average recoveries were 96.7%，96.1%，95.5%，93.6%，92.7% and 92.2%, respectively，and the RSD were 1.6%，1.2%，2.3%，2.7%，3.5% and 3.0%, respectively. ConclusionThe method is accurate，and repeatable. It can be applied for the determination of 6 residual solvents in ropinirole hydrochloride.

Key words: headspace GC；ropinirole hydrochloride；residual solvents

*通信作者：劉海靜，女，碩士生導師，主任藥師

鹽酸羅匹尼羅化學名為4,2-二正丙基胺乙基-1，3-二氫-2H-吲哚-2-酮鹽酸鹽，分子式為C16H24N20·HCl，是一種強效的選擇性非麥角堿類多巴胺D2-受體激動劑[1]，主要用于治療帕金森病和中度到重度的不寧腿(多動腿)綜合征。1996年首次在英國上市，商品名Requip，1997年獲FDA批準在美國上市[2]。目前該藥在臨床上已廣泛應(yīng)用，前景良好，但國內(nèi)還未見有關(guān)鹽酸羅匹尼羅中殘留溶劑測定的報道。根據(jù)不同廠家的工藝資料，本品在合成、純化及精制過程中可能涉及了甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶等有機溶劑，根據(jù)《中國藥典》(2010年版)二部附錄VIII P“殘留溶劑測定法”項下殘留溶劑及限度規(guī)定，二氯甲烷、正己烷、甲醇、吡啶為二類溶劑(限度分別為0.06%，0.029%，0.3%和0.02%)，乙醇和乙酸乙酯為三類溶劑(限度均為0.5%)[3]，因此，檢測原料藥中有機溶劑的殘留量是有必要的。本文通過建立頂空毛細管氣相色譜法測定鹽酸羅匹尼羅中有機溶劑殘留的方法對3批原料藥進行了檢測。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 6890N氣相色譜儀，配置氫火焰離子化檢測器(FID)；Agilent 7694E頂空進樣儀；塞多利斯ME-235S型電子分析天平。

1.2試藥3批鹽酸羅匹尼羅原料藥根據(jù)批號不同分別記作S1、S2、S3；甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和吡啶均為分析純;N，N-二甲基甲酰胺(DMF)為色譜純;水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1頂空條件頂空進樣，平衡溫度為100 ℃，平衡時間為30 min，取樣針溫度為110 ℃，傳輸線溫度為120 ℃，加壓時間為3 min，進樣時間為1 min。

2.2色譜條件[4]Agilent 6890N氣相色譜儀，7694E頂空進樣儀；色譜柱：Agilent DB-624毛細管柱(5%苯基+95%聚二甲基硅氧烷，30 m×320 mm×1.8 μm)；載氣為高純氮氣(質(zhì)量分數(shù)≥99.999%)，流速1.5 mL·min-1，F(xiàn)ID檢測器；進樣口溫度為200 ℃，檢測器溫度為250 ℃；程序升溫，初始溫度35 ℃，維持5 min，以10 ℃·min-1的升溫速率升至240 ℃，維持5 min；氫氣流速35 mL·min-1，空氣流速300 mL·min-1，尾吹10 mL·min-1，分流比1∶1。

2.3溶液的制備

2.3.1定位溶液的制備取吡啶、正己烷、二氯甲烷、無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯適量，分別加水-DMF(1∶1)2 mL，搖勻，作為定位溶液。

2.3.2對照品溶液的制備精密稱取吡啶約0.2 g，正己烷約0.3 g，二氯甲烷0.6 g，置于同一100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀釋至刻度作為對照儲備液1；精密稱取無水乙醇約0.5 g，甲醇約0.3 g,乙酸乙酯約0.5 g，置于同一100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀釋至刻度作為對照儲備液2；精密移取1 mL對照儲備液1與10 mL對照儲備液2，置于100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀釋至刻度即得混合對照品溶液。

2.3.3供試品溶液的制備精密稱取鹽酸羅匹尼羅原料藥約0.2 g，置于頂空瓶中，精密加入水-DMF(1∶1)2 mL溶解，搖勻，即得。

2.3.4標準曲線溶液的制備分別精密移取對照儲備液1溶液0.25，0.5，0.75，1.0，1.5和2.0 mL與對照儲備液2溶液2.5，5.0，7.5，10.0，15.0和20.0 mL,一一混合,置于100 mL量瓶中，用水-DMF(1∶1)稀釋至刻度，得到系列質(zhì)量濃度的對照品溶液。

2.4系統(tǒng)適用性精密量取混合對照品溶液、空白溶劑各2 mL，置于20 mL頂空瓶中，進樣，按2.2項下色譜條件進行測定，記錄氣相色譜圖(圖1)。在所得的色譜圖中，各組分峰的理論塔板數(shù)均大于10 000，各個相鄰峰的分離度均大于3.0，空白溶劑對樣品測定無干擾[5]。

2.5線性關(guān)系考察精密量取2.3.4項下系列濃度的對照品溶液各2 mL，置于20 mL頂空瓶中，進樣，按2.2項下色譜條件進行測定，記錄各峰面積。以峰面積為縱坐標、以各對照品的質(zhì)量濃度為橫坐標，進行線性回歸，分別得到甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的標準曲線線性回歸方程及線性范圍，見表1。

圖1系統(tǒng)適用性色譜圖

A.混合對照品；B.空白溶劑；1.甲醇；2.無水乙醇；3.二氯甲烷；4.正己烷；5.乙酸乙酯；6.吡啶；7.N，N-二甲基甲酰胺；

Fig.1 Chroromatograms of system suitability

A.mixed reference standard；B.blank solvent；1.methanol；2.ethanol；3.methylene chloride；4.n-hexane；5.ethyl acetate;6.pyridine;7.DMF

表1殘留溶劑標準曲線的回歸方程及線性范圍

Tab.1 Regression equation and linear ranges of 6 residual solvents

溶劑線性方程r 線性范圍/μg·mL-1甲醇Y=0.6263X-8.25190.9987127.5～1020無水乙醇Y=0.8641X+4.35880.996775.09～600.7二氯甲烷Y=1.8590X-8.85740.999715.03～120.3正己烷Y=1.6720X-11.47700.99947.212～57.70乙酸乙酯Y=3.4358X-108.26000.9992125.6～1005.0吡啶Y=0.3005X+5.94890.99875.256～42.05

2.6最低檢測限和定量限將2.3.2項下混合對照品溶液逐級稀釋，在信噪比為3(S∶N=3)作為檢測限；信噪比為10(S∶N=10)作為定量限。測得甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的檢測限分別為0.15，0.12，0.24，0.22，0.58和0.84 μg·mL-1，甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的定量限分別為0.6，0.5，0.5，0.7，1.7和2.8 μg·mL-1。

2.7精密度實驗精密量取混合對照品溶液2 mL,置于20 mL頂空瓶中，平行6份，按2.2項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算各有機溶劑峰面積的RSD值，結(jié)果甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的日內(nèi)精密度分別為1.2%，1.7%，0.8%，1.4%，2.5%和3.3%。同法平行操作3 d，測得各有機溶劑峰面積的RSD值，結(jié)果甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、吡啶的日間精密度分別為1.8%，1.7%，0.5%，1.9%，3.0%和3.6%。

2.8重復(fù)性實驗取供試品S1，按2.3.3項下方法，制備5份供試品溶液，按2.2項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算各有機溶劑含量的RSD值，結(jié)果均小于5.0%。

2.9穩(wěn)定性實驗取供試品S1，按2.3.3項下方法，制備供試品溶液，分別于2，4，6，12和24 h進行測定，記錄色譜圖，計算各有機溶劑含量的RSD值，結(jié)果均小于5.0%。

2.10回收率實驗精密稱取供試品S1約0.2 g，置于20 mL頂空瓶中，以各溶劑檢測限度的80%,100%和120%，分別精密加入混合對照品溶液0.8，1.0和1.2 mL，再依次精密加入水-DMF(1∶1)1.2,1.0和0.8 mL，搖勻，各平行3份，共9份。按2.2項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，計算6種殘留溶劑的平均回收率分別為96.7%，96.1%，95.5%，93.6%，92.7%和92.2%，其RSD分別為1.6%，1.2%，2.3%，2.7%，3.5%和3.0%。

2.11樣品的測定取2.3.3項下供試品溶液，按2.2項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖(圖2)，計算殘留溶劑的含量，結(jié)果見表2。

圖2 羅匹羅尼原料溶劑殘留色譜圖

A.供試品S1；B.供試品S2；C.供試品S3；2.無水乙醇；5.乙酸乙酯；7.N，N-二甲基甲酰胺

Fig.2 Chromatograms of residual solvents in ropinrole

A．sample S1；B.sample S2；C.sample S3；2.ethanol；5.ethyl acetate；7.DMF

表2樣品中殘留溶劑測定結(jié)果

Tab.2 Results of the residual solvents in samples

批號殘留溶劑檢出量/%甲醇無水乙醇二氯甲烷正己烷乙酸乙酯吡啶限度0.30.50000.060.0290.50000.02S1-0.0625--0.1044-S2-0.0593--0.1330-S3-0.0532--0.1162-

由表2可知，3批原料樣品中均檢測到了乙醇和乙酸乙酯，其含量遠低于限度規(guī)定，其他溶劑殘留均未檢測到。結(jié)果表明，3批原料藥中殘留溶劑均符合規(guī)定。

3討論

3.1溶劑的選擇甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯、吡啶均可溶于水，但二氯甲烷與正己烷微溶于水，溶于大多有機溶劑，所以本實驗采用水-DMF(1∶1)的溶液作為溶劑。

3.2頂空平衡溫度的選擇甲醇、無水乙醇、正己烷和乙酸乙酯4種溶劑的沸點均低于80 ℃，本實驗中探討了80，90和100 ℃3個條件下的頂空溫度對樣品測定的影響，發(fā)現(xiàn)80和90 ℃時二氯甲烷和吡啶不能完全揮發(fā)，影響測定結(jié)果，而100 ℃時均能揮發(fā)完全，所以選擇頂空溫度設(shè)置為100 ℃。

4結(jié)論

本研究采用頂空毛細管氣相色譜法測定了鹽酸羅匹尼羅原料中6種有機溶劑的殘留量，該方法簡便，準確度、靈敏度高，重復(fù)性好，分離度符合要求，適用于鹽酸羅匹尼羅原料中殘留溶劑的測定。

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