川參膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

川參膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

竇建衛(wèi)1，劉偉2，封南華2，任翠翠1 *

(1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安710061；2.銅川市人民醫(yī)院藥劑科，銅川727000)

摘要：目的建立川參膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用TLC法分別對膠囊中的牡丹皮、丹參和赤芍進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法對制何首烏中二苯乙烯苷進(jìn)行了含量測定。結(jié)果牡丹皮、丹參和赤芍薄層鑒別具有較好的專屬性，陰性對照無干擾；有效成分二苯乙烯苷在0.626 0～3.754 0μg(r=0.999 9)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.4%，RSD為1.1%(n=6)。結(jié)論所建立的標(biāo)準(zhǔn)簡便易行、專屬性強(qiáng)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：川參膠囊；TLC；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；HPLC

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.012

中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

作者簡介：竇建衛(wèi)，男，副教授

收稿日期：(2015-03-20)

Study on the quality standard of Chuanshen Capsules

DOU Jianwei1， LIU Wei2，F(xiàn)ENG Nanhua2，REN Cuicui1*(1.School of Pharmacy， Xi′an Jiaotong University， Xi′an 710061， China； 2. Department of Pharmacy, People’s Hospital of Tongchuan， Tongchuan 727000， China)

Abstract:ObjectiveTo set up the quality standard for Chuanshen Capsules. MethodsTLC was adopted for carring out research for Cortex Moutan， Radix Salviae Miltiorrhizae and Paeoniae Radix Rubra in the capsules. HPLC was adopted for quantative analysis of stilbene glycoside. ResultsThe TLC of Cortex Moutan， Radix Salviae Miltiorrhizae and Paeoniae Radix Rubra showed good specificity， and no interference was observed. The calibration curve of stilbene glycoside was in good linearity over the range of 0.626 0-3.754 0 μg (r=0.999 9) and the average recovery was 99.4%， RSD=1.1%(n=6). Conclusion The method was simple，sensitive and accurate， and can be used for the quality control of Chuanshen Capsules.

Key words: Chuanshen Capsules； TLC； quality standard； HPLC

*通信作者：任翠翠，女，在讀碩士研究生

川參膠囊是銅川市人民醫(yī)院長期應(yīng)用的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑，主要由制何首烏、山楂、益母草、牡丹皮、赤芍、川芎和丹參等組成，具有滋陰潛陽、平肝熄風(fēng)、活血化瘀、通絡(luò)止痛、寬胸利氣的功效，臨床上用于治療高血壓、高血脂、冠心病、心腦梗死、動脈硬化等諸癥所致的頭暈、心悸、四肢麻木及顏面、肢體抽搐等。何首烏中的卵磷脂和鐵分別是細(xì)胞膜和血紅蛋白組分，能促進(jìn)紅細(xì)胞生成，故有補(bǔ)血作用[1]；牡丹皮有清熱涼血、活血化瘀[2]的功效；丹參和赤芍有抗血栓、抗血脂和動脈粥樣硬化等作用[3-4]。為了控制川參膠囊的質(zhì)量，本文對該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，制定了處方中牡丹皮、丹參和赤芍的薄層鑒別，同時建立了處方中君藥制何首烏的有效成分二苯乙烯苷的高效液相色譜含量測定方法。

1儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀(日本島津LC-20A型)；AB135-S0.01mg分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2試藥牡丹皮對照藥材(批號121490-200501)，丹參對照藥材(批號120923-200408)，赤芍對照藥材(批號121092-200402)，二苯乙烯苷對照品(批號0844-200003)，均購自中國藥品生物制品檢定所。川參膠囊樣品(0.3 g·粒-1，批號20130601，20130602，20130603)。

2薄層色譜鑒別

2.1牡丹皮的薄層鑒別取本品內(nèi)容物5 g，加乙醚[5]20 mL，超聲提取(功率250 W，頻率40 kHz )30 min，濾過，先將濾液蒸干，再用1 mL丙酮溶解殘?jiān)?，即得供試品溶液。另取牡丹皮對照藥?批號121490-200501)1 g，同法制成牡丹皮對照藥材溶液。再按處方比例取不含牡丹皮的陰性對照藥材，同法制成陰性對照溶液。照《中國藥典》(Ch.P 2010)薄層色譜法(附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，用毛細(xì)管分別點(diǎn)于同一薄層板(硅膠G)上，以體積比為4∶1∶0.1的環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸的混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干。均勻噴灑50 g·L-1香草醛硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[6]。3批樣品在日光下，均顯示牡丹皮特征斑點(diǎn)，且陰性對照無干擾。

2.2丹參的薄層鑒別取本品內(nèi)容物5 g，加乙醚20 mL，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz )20 min，殘?jiān)鼮V過，先將濾液蒸干，再用1 mL乙酸乙酯溶解殘?jiān)?，即得供試品溶液[7]。另取丹參對照藥材(批號120923-200408)1 g，同法制成丹參對照藥材溶液。再按處方比例取不含丹參的陰性對照藥材，同法制成陰性對照溶液。照《中國藥典》(Ch.P 2010)薄層色譜法(附錄Ⅵ B)實(shí)驗(yàn)，用毛細(xì)管分別吸取上述對照品溶液5 μL、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一薄層板(硅膠G)上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4∶1)的混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干。3批樣品在日光下，均顯示丹參特征斑點(diǎn)，且陰性對照無干擾。

2.3赤芍的薄層鑒別取本品內(nèi)容物5 g，加乙醇15 mL，密塞，超聲提取(功率250 W，頻率40 kHz )20 min，先將殘?jiān)鼮V過，濾液蒸干，再用1 mL乙醇溶解殘?jiān)吹霉┰嚻啡芤篬8]。另取赤芍對照藥材(批號121092-200402)1 g，同法制成赤芍對照藥材溶液。再按處方比例取不含赤芍的陰性對照藥材，同法制成陰性對照溶液。照《中國藥典》(Ch.P 2010)薄層色譜法(附錄Ⅵ B)實(shí)驗(yàn)，用毛細(xì)管分別吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一薄層板(硅膠G)上，以體積比為40∶5∶10∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的混合溶劑為展開劑，展開，取出，晾干。3批樣品在日光下，均顯示赤芍特征斑點(diǎn)，且陰性對照無干擾。

3含量測定

3.1色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)色譜柱Diamosil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)， 乙腈-水(25∶75)為流動相；流速為1.0 mL·min-1；柱溫保持在室溫；檢測波長選擇320 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

3.2對照品溶液的制備精密稱取二苯乙烯苷對照品(批號0844-200003)適量，加乙醇制成質(zhì)量濃度為0.2 mg·mL-1的溶液，即得二苯乙烯苷對照品溶液。

3.3供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物1 g(過四號篩)，精密稱定；置于索氏提取器中，精密加入25 mL稀乙醇，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，放冷至室溫，再次稱定質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，濾過上清液后取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

3.4陰性對照品溶液的制備按照3.3項(xiàng)下供試品的制備方法，取按生產(chǎn)工藝制備的缺制何首烏藥材的陰性樣品適量，同法制備陰性對照溶液。

3.5專屬性實(shí)驗(yàn)精密吸取川參膠囊的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果陰性樣品在二苯乙烯苷位置上未檢出色譜峰，表明處方中其他成分對二苯乙烯苷的測定不會產(chǎn)生干擾，該方法專屬性良好。

圖1HPLC圖

A.對照品；B.供試品；C.陰性對照品；1.二苯乙烯苷

Fig.1 HPLC chromatograms

A.reference substance； B.sample； C.negative sample； 1. stilbene glycoside

3.6線性范圍精密稱取二苯乙烯苷對照品，加乙醇制成1 mL含二苯乙烯苷0.625 6 mg的溶液作為二苯乙烯苷儲備溶液，精密量取儲備溶液適量，加乙醇稀釋制成二苯乙烯苷質(zhì)量濃度分別為0.062 6，0.125 1，0.187 7，0.250 2，0.312 8和0.375 4 mg·mL-1的溶液，將以上溶液分別進(jìn)樣10 μL，測定峰面積。以峰面積(Y)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得二苯乙烯苷的回歸方程：Y= 1.78×105X-68.31，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9。表明二苯乙烯苷在0.626 0～3.754 0 μg之間有良好的線性關(guān)系。

3.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液(批號20130602)10 μL，分別于0，1，2，4，6和8 h進(jìn)樣，測定二苯乙烯苷的峰面積。結(jié)果對照品溶液的RSD為0.91%(n=6)，供試品溶液的RSD為1.39%(n=6)。表明對照品溶液和供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取川參膠囊(批號20130602)的樣品，共6份，按照3.3項(xiàng)下的方法制備川參膠囊供試品溶液，先分別精密取供試品溶液和對照品溶液各10 μL進(jìn)樣，測定，然后再按外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算樣品中二苯乙烯苷的含量。結(jié)果，二苯乙烯苷平均含量為2.67 mg·g-1，RSD值為1.24%，表明本文所建立的方法重復(fù)性良好。

3.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)取本品內(nèi)容物0.5 g(批號20130602)，總共取6份，精密稱定每份的質(zhì)量，分別加入前述制得的二苯乙烯苷對照品溶液適量，按3.3項(xiàng)下制成供試品溶液，色譜條件及測定方法同上。測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 二苯乙烯苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 Results of recovery test of stilbene glycoside(n=6)

編號取樣量/g樣品中的量/mg加入量/mg測得總量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.48931.30141.25122.5634100.8620.49801.32471.25122.570799.5830.50291.33781.25122.580899.3440.49241.30981.25122.557699.7350.50591.34561.25122.590899.5260.50181.33471.25122.554897.5199.41.1

3.10樣品的含量測定取3批(批號20130601，20130602，20130603)不同批次的川參膠囊樣品，采用上述色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果3批樣品中二苯乙烯苷的含量為2.68±0.03 mg·g-1。

4討論

川參膠囊是銅川市人民醫(yī)院中醫(yī)專家、腦病專家結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出的復(fù)方。在銅川市人民醫(yī)院長期應(yīng)用，治療患者較多，療效確切，深受患者好評。本文在前期實(shí)驗(yàn)研究和查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，選擇對川參膠囊中的牡丹皮、丹參和赤芍進(jìn)行薄層定性鑒別；對制何首烏中的二苯乙烯苷進(jìn)行定量控制。結(jié)果表明，所選的薄層方法操作簡單，色譜條件易于控制，具有可重復(fù)性，且薄層檢出效果好。此外，二苯乙烯苷的高效液相色譜方法成熟穩(wěn)定，具有可操作性。因此，本文建立的方法可作為川參膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制的依據(jù)。

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