甘遂與甘草合用對(duì)甘遂毒性成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B代謝的影響

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-12-4 13:45網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3969/j.issn.1001-1978.2015.01.029.html

◇復(fù)方藥物藥理學(xué)◇

甘遂與甘草合用對(duì)甘遂毒性成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B代謝的影響

景欣悅1，彭蘊(yùn)茹2，王新敏3，段金廒3

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京210023；2.江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京210028；3. 南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省方劑高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京210023)

中國(guó)圖書分類號(hào)：R-332；R282.71；R284.1；R285.5；R345.99；R977.3

摘要：目的研究甘遂與甘草合用對(duì)甘遂中毒性成分甘遂萜酯A (Kansuinine A, KA)和甘遂萜酯B (Kansuinine B, KB) 代謝的影響。方法將正常對(duì)照組、甘草組、甘遂與甘草合用組大鼠給予相應(yīng)藥物處理10 d后，制備肝微粒體。將甘遂的毒性成分KA、KB與各組肝微粒體進(jìn)行體外共孵育，測(cè)定孵育后體系中KA、KB的濃度，用于評(píng)價(jià)KA、KB的代謝情況。另取正常大鼠肝微粒體，分別加入CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制劑紅霉素、鹽酸苯海拉明、苯溴馬隆、西咪替丁和氟康唑，與KA、KB進(jìn)行體外共孵育，檢測(cè)孵育后體系中KA、KB的濃度，闡明參與KA、KB代謝的CYP酶亞型。取正常大鼠肝微粒體，分別加入甘草酸與甘草次酸，與KA、KB體外共孵育，測(cè)定孵育后體系中KA、KB的濃度，評(píng)價(jià)甘草酸與甘草次酸對(duì)KA、KB代謝的影響。結(jié)果甘遂與甘草合用組微粒體中KA、KB的含量明顯高于正常對(duì)照組和甘遂組，表明甘遂與甘草合用使甘遂中毒性成分KA、KB的代謝受到抑制。與紅霉素、鹽酸苯海拉明、苯溴馬隆、西咪替丁和氟康唑共孵育的微粒體中KA、KB的含量均明顯高于空白對(duì)照組，表明CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19均參與了KA、KB的代謝。與甘草酸和甘草次酸共孵育，體系中KA、KB的濃度明顯高于空白對(duì)照組。CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2表明甘草酸和甘草次酸能夠抑制KA、KB的代謝。結(jié)論CYP2C19均可能參與了甘遂毒性成分KA、KB的代謝，甘遂與甘草合用能夠抑制CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2及CYP2C19的活性，而使KA、KB的代謝減慢，產(chǎn)生蓄積；另外，甘草中主要成分甘草酸和甘草次酸能夠抑制KA、KB的代謝，這可能是甘遂與甘草合用毒性增加的原因之一。

關(guān)鍵詞：甘遂萜酯A;甘遂萜酯B;CYP2C19;酶抑制劑;甘草酸;甘草次酸

收稿日期:2014-09-02,修回日期:2014-10-08

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)資助項(xiàng)目(No 2011CB505300,2011CB505303)；南京中醫(yī)藥大學(xué)青年自然科學(xué)基金(12XZR17)；江蘇省高校自然科學(xué)基金(13KJB360006)

作者簡(jiǎn)介：景欣悅(1978-)，女，博士，助理研究員，研究方向：藥物代謝，Tel:025-85811234,E-mail：jing_xinyue@163.com;

通訊作者段金廒(1956-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥復(fù)方與中藥資源化學(xué)，，E-mail：dja@njutcm.Edu.cn

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.01.029

文章編號(hào)：

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A1001-1978(2015)01-0136-05

Abstract:AimTo study the combined effect Euphorbia kansui of and Glycyrrhiza uralensis on metabolism of Kansuinine A and Kansuinine B. MethodsControl, GU and GU plus EK groups were treated for 10 days, respectively. Then the liver microsomes were prepared. KA and KB were incubated with microsomes of each group, and concentrations of KA and KB were measured to reflect the metablism of KA and KB. Erythromycin, diphenhydramine hydrochloride，benzbromarone，cimetidine，fluconazole the inhibitors of CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9, CYP1A2, CYP2C19 respectively, were incubated with KA and KB. Concentrations of KA and KB were measured to reveal the cytochrome P450 isoforms which involved in the metabolism of them. KA and KB were incubated with glycyrrhizic acid and enoxolone. Then concentrations of KA and KB were measured to reveal the effects of glycyrrhizic acid and enoxolone to KA and KB. ResultsConcentrations of KA and KB in GU plus EK group were significantly higher than those in control and EK groups, which showed that the metablisom of KA and KB was inhibited in GU plus EK group. In addition, concentrations of KA and KB were higher in microsomes incubated with erythromycin, diphenhydramine hydrochloride, benzbromarone, cimetidine and fluconazole than in control group, which revealed that the metablism of KA and KB was slowed down when CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9, CYP1A2 and CYP2C19 were inhibited. They may participate in the metablisom of KA and KB. After incubation with glycyrrhizic acid and enoxolone, the metablism of KA and KB was slowed down. ConclusionsKA and KB may be the substrates of CYP2C19. GU plus EK can inhibit the activity of CYP2C19, which resulted in KA and KB metablism slowing down and accumulation. In addition, glycyrrhizic acid and enoxolone can inhibit the metablism of KA and KB. It may be one of the reasons of increased toxicity of GU plus EK.

甘遂始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，言其“味苦寒，主大腹疝瘕，腹?jié)M，面目浮腫，留飲宿食，破癥堅(jiān)積聚，利水谷道”?，F(xiàn)行藥典記載甘遂為大戟科(Euphobiaceae)大戟屬(Euphorbia)植物甘遂(Euphorbiakansui，EK)的干燥塊根，具有瀉水逐飲的功能。用于水腫脹滿、胸腹積水、痰飲積聚、氣逆咳喘、二便不利[1]。毒性研究表明，過(guò)量使用易引起腹痛、腹瀉，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)劇烈嘔吐、血壓下降、脫水和呼吸衰竭等癥狀。功效研究表明，甘遂化學(xué)成分具有抗癌抗腫瘤活性、抗病毒、抗胰腺炎等作用，亦可影響免疫系統(tǒng)的特異性[2]。

中藥配伍禁忌概括為歌訣“本草名言十八反，半蔞貝蘞及攻烏，藻戟遂芫俱戰(zhàn)草，諸參辛芍叛藜蘆”最早見(jiàn)于金元時(shí)期張子和的《儒門事親·卷十四·十八反》。“甘遂反甘草(Glycyrrhiza uralensis，GU)”為中藥配伍禁忌之一，但從古到今，不斷有醫(yī)家報(bào)道配伍使用后無(wú)明顯毒副作用，而實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果亦不盡相同[3-4]。后世醫(yī)家對(duì)其從各個(gè)角度進(jìn)行了的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。對(duì)大鼠心、肝、腎病理形態(tài)影響顯示存在較明顯毒性增強(qiáng)的情況[5]。

目前研究報(bào)道，甘遂主要化學(xué)成分主要為二萜類和三萜類化合物?；钚匝芯恳仓饕轻槍?duì)二萜類和三萜類化合物的單體成分進(jìn)行的。研究表明，二萜類化合物有較強(qiáng)的刺激作用，但也有抗腫瘤活性，提示其毒性成分與有效成分之間有一定的內(nèi)在聯(lián)系。三萜類成分也具有一定的藥理活性，但其毒性方面的研究較少。甘遂本身所含巨大戟萜醇及其衍生物和一些二萜酯類如甘遂萜酯A、甘遂萜酯B均為毒性成分，具有激活EB病毒早期抗原活性、皮膚刺激及促進(jìn)腫瘤發(fā)生作用[6]。所以，甘遂毒性成分的代謝可能影響其毒性作用。甘遂與甘草合用，可能影響了參與甘遂毒性成分代謝的酶，而使甘遂毒性成分代謝減慢，產(chǎn)生蓄積，導(dǎo)致毒性增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)擬從甘草與甘遂合用對(duì)甘遂中毒性成份代謝的影響的角度入手，闡明二者合用增毒的可能原因。

1材料與方法

1.1試劑與儀器

1.1.1儀器Waters Acquity UPLC(美國(guó)Waters公司)，XevoTriple四極桿檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司)，配置電噴射離子源(ESI)，自動(dòng)進(jìn)樣器，MS/MS檢測(cè)器，MassLynx軟件；METTER AL104電子天平(梅特勒—托利多儀器上海有限公司)；XW-80A型漩渦混合器(上海滬西分析儀器廠有限公司)；Milli-Q Gradient A10超純水器(Millipore Inc. USA)；AllegraTM21R Centrifuge臺(tái)式離心機(jī)(BECKMAN COULTERTM)。

1.1.2試劑甘草水提物，甘遂95%醇提物由南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省方劑高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。甘遂萜酯A、甘遂萜酯B、甘草酸、甘草次酸由南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省方劑高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，紅霉素、鹽酸苯海拉明、苯溴馬隆、西咪替丁和氟康唑購(gòu)于中國(guó)藥品檢驗(yàn)所。

甘遂萜酯A、甘遂萜酯B的配制：精密稱取KA、KB粉末各1 mg，加入200 μL DMSO溶解后，加PBS定容至1 mL。配制成1.0 g·L-1的儲(chǔ)備液。

甘草酸和甘草次酸的配制：精密稱取甘草酸1 mg，加熱水溶解并定容至10 mL，終濃度為100 mg·L-1的應(yīng)用液，臨用現(xiàn)配，并置于熱水浴中保持溶解性；精密稱取甘草次酸1 mg，加入100 μL乙醇溶解后，加入PBS定容至1 mL濃度為1 g·L-1。紅霉素、鹽酸苯海拉明、苯溴馬隆、西咪替丁和氟康唑的配制：均用PBS配制成1.0 g·L-1的溶液。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組健康♂ Sprague-Dawley大鼠，體質(zhì)量180～200 g，由上海西普爾—必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。自然晝夜環(huán)境飼養(yǎng)，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由攝食、飲水，室溫保持(22±2)℃，相對(duì)濕度為50%～60%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施。動(dòng)物隨機(jī)分組3組，分別為正常對(duì)照組、甘草組、甘遂與甘草合用組，每組6只。

1.3給藥方法與劑量按組別灌胃給予相應(yīng)藥物提取物，正常對(duì)照組給予0.25%的CMC-Na溶液。甘草組為10 g生藥·kg-1，甘遂與甘草合用組為20 g生藥·kg-1。連續(xù)灌胃給予各組提取物10 d，每天1次。于末次給藥8 h后禁食16 h。

1.4肝微粒體的制備采用差速離心法制備肝微粒體[7，8]。動(dòng)物于末次給藥8 h后開始禁食，禁食16 h后，采用乙醚麻醉各組大鼠，股動(dòng)脈放血后，頸椎脫臼處死，迅速取下肝組織，置于0～4℃冰板上。將肝組織剪碎，用0.15 mol·L-1KCl-0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗3次，除去血紅蛋白后加入上述磷酸鹽緩沖液制成肝勻漿，在4℃下以9 000×g離心20 min后，取上清液，于4℃下以100 000×g離心60 min，將粉紅色沉淀物(微粒體)懸浮于含30%甘油的磷酸鹽緩沖液中，使用Bradford法[9]測(cè)定試劑盒測(cè)定肝微粒體蛋白濃度，分裝后置于-80℃冰箱內(nèi)保存。

1.5體外孵育法研究甘遂與甘草合用對(duì)甘遂中毒性成分KA、KB的影響KA、KB分別與正常對(duì)照組大鼠肝微粒體、甘遂處理組肝微粒體和甘草與甘遂合用組肝微粒體共孵育。反應(yīng)體系中含NADPH再生系統(tǒng)(NADP 500 μmol·L-1, G-6-P 10 mmol·L-1, G-6-P-OH 1 kU·L-1, MgCl20.5 mmol·L-1)，微粒體蛋白終濃度為1 g·L-1。先將反應(yīng)體系置于37℃水浴預(yù)溫孵5 min后，加入KA、KB啟動(dòng)反應(yīng)，KA、KB的終濃度均為2.0 mg·L-1。孵育30 min后，加入50 μL乙腈中止反應(yīng)。反應(yīng)總體積為200 μL。

1.6CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制劑對(duì)KA、KB代謝的影響取正常大鼠肝微粒體，反應(yīng)體系中含微粒體蛋白終濃度為1 g·L-1、NADPH再生系統(tǒng)(NADP 500 μmol·L-1, G-6-P 10 mmol·L-1, G-6-P-OH 1 kU·L-1, MgCl20.5 mmol·L-1)。分別加入CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制劑紅霉素、鹽酸苯海拉明、苯溴馬隆、西咪替丁和氟康唑，終濃度均為100 mg·L-1。于37℃預(yù)溫孵5 min，加入KA、KB啟動(dòng)反應(yīng)，溫孵30 min后，加入50 μL乙腈中止反應(yīng)。KA、KB的終濃度均為 2.0 mg·L-1。反應(yīng)總體積為200 μL。

1.7體外孵育法研究甘草酸、甘草次酸對(duì)KA、KB代謝的影響取正常大鼠肝微粒體，反應(yīng)體系中含微粒體蛋白終濃度為1 g·L-1、NADPH再生系統(tǒng)(NADP 500 μmol·L-1, G-6-P 10 mmol·L-1, G-6-P-OH 1 kU·L-1, MgCl20.5 mmol·L-1)。分別加入甘草酸和甘草次酸，于37℃預(yù)溫孵5 min，加入KA、KB啟動(dòng)反應(yīng)，溫孵30 min后，加入50 μL乙腈中止反應(yīng)。KA、KB的終濃度均為 2.0 mg·L-1。甘草酸和甘草次酸的終濃度均為10 mg·L-1。反應(yīng)總體積為200 μL。

1.8色譜條件及MS質(zhì)譜條件色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18 柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相為0.1%甲酸水-乙腈=40 ∶60；流速：0.4 mL·min-1；柱溫：30℃；ESI-MS采用正離子檢測(cè)的電噴霧電離方式；KA、KB的錐孔電壓分別為44V和56V；去溶劑化溫度為550℃；去溶劑化氣流為1 000 L·h-1。在該色譜條件下，KA和KB的保留時(shí)間分別約為3.909 min和5.932 min (R>1.5)，分離較好，且血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾KA、KB的測(cè)定。

2結(jié)果

2.1甘遂與甘草合用對(duì)甘遂中毒性成分KA、KB代謝的影響將甘遂中毒性成分KA、KB分別與正常對(duì)照組(Control)、甘遂組(EK)、甘遂與甘草合用組(EK+GU)微粒體體外共孵育，測(cè)定孵育后體系中KA、KB的濃度。KA、KB在各組中的濃度見(jiàn)Fig 1。結(jié)果顯示，甘遂組微粒體中KA的濃度與正常對(duì)照組間差異無(wú)顯著性，而甘遂與甘草合用組微粒體中KA的濃度明顯高于正常對(duì)照組和甘遂組，表明合用使KA的代謝受到抑制；甘遂組微粒體中KB的濃度高于正常對(duì)照組，表明單獨(dú)使用甘遂可使KB的代謝減慢，而甘遂與甘草合用組KB的濃度明顯高于正常對(duì)照組與甘遂組，表明合用使KB的代謝受到抑制的程度增加。

Fig 1　Concentration of KA (A) and KB (B) in hepatic

Treated rats were prepared as described in Materials and Methods. Data represent the mean ± SD of two different preparations.*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsEK.

2.2CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制劑對(duì)KA、KB代謝的影響取正常大鼠肝微粒體，分別加入CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制劑紅霉素、鹽酸苯海拉明、苯溴馬隆、西咪替丁和氟康唑，與KA、KB體外共孵育，測(cè)定孵育后體系中KA、KB的濃度。孵育后，KA、KB在各組中的濃度見(jiàn)Fig 2。結(jié)果顯示，各組微粒體中KA、KB的含量均明顯高于空白對(duì)照組，表明CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的活性受到抑制，KA、KB的代謝均減慢，CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19均可能參與了KA、KB的代謝，其中CYP2C9對(duì)KA代謝的影響最為明顯，CYP2C19對(duì)KB代謝的影響最為明顯。由此可以推測(cè)，甘遂與甘草合用抑制了CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19等酶的活性，從而使甘遂中毒性成分KA、KB的代謝減慢，產(chǎn)生蓄積，最終導(dǎo)致甘遂毒性增加。這可能是甘遂與甘草合用增毒的原因之一。

Fig 2　Concentration of KA (A) and KB (B) in hepatic

Incubation mixture consisted of microsomal protein (1 g·L-1). Treated rats were prepared as described in Materials and Methods. Data represent the mean ± SD of two different preparations.*P<0.05,**P<0.01vscontrol.

2.3甘草酸、甘草次酸對(duì)KA、KB代謝的影響取正常大鼠肝微粒體，分別加入甘草酸和甘草次酸與KA、KB共孵育，測(cè)定孵育后體系中KA、KB的濃度。KA、KB在各組中的濃度見(jiàn)Fig 3。結(jié)果顯示，加入甘草酸和甘草次酸，溫孵體系中KA、KB的濃度明顯高于正常對(duì)照組，表明甘草酸和甘草次酸能夠抑制KA、KB的代謝。

Fig 3　Concentration of KA (A) and KB (B) in hepatic

Incubation mixture consisted of microsomal protein (1 g·L-1). Treated rats were prepared as described in Materials and Methods. Data represent the mean ± SD of two different preparations.*P<0.05vscontrol.

3討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)微粒體體外孵育的方法，研究甘遂與甘草合用對(duì)甘遂中毒性成分KA、KB代謝的影響，結(jié)果表明，甘遂與甘草合用使KA、KB的代謝受到抑制；KA、KB分別與CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19的抑制劑紅霉素、鹽酸苯海拉明、苯溴馬隆、西咪替丁和氟康唑體外共孵育，測(cè)定孵育后體系中KA、KB的濃度，以確定是哪種酶的亞型參與了KA、KB的代謝。結(jié)果表明，幾種酶亞型均參與了KA、KB的代謝，以CYP2C9和CYP2C19影響最為明顯。甘遂與甘草合用可能抑制了CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C19當(dāng)中一種或幾種酶的活性，從而使甘遂中毒性成分KA、KB的代謝減慢，產(chǎn)生蓄積，最終導(dǎo)致甘遂的毒性增加。這可能是甘遂與甘草不能合用的原因之一。

有研究表明，甘遂化學(xué)部位GS-3可明顯促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，證明GS-3為甘遂致炎的毒性部位群。用HPLC-MSn色譜技術(shù)對(duì)GS-3部位進(jìn)行化學(xué)組成分析，結(jié)果共鑒定了其中的12個(gè)二萜類化合物[10]。為進(jìn)一步闡明甘遂毒效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，采用硅膠柱層析和制備液相等多種色譜手段對(duì)甘遂毒性部位進(jìn)行了化學(xué)分離。結(jié)果共分離鑒定了8個(gè)化合物，甘遂萜酯A和甘遂萜酯B為其中兩個(gè)。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)二萜酯類如甘遂萜酯A、甘遂萜酯B均為毒性成分[6]，故我們選擇甘遂萜酯A、甘遂萜酯B為目標(biāo)化合物，考察甘遂與甘草合用對(duì)KA、KB兩個(gè)毒性物質(zhì)代謝的影響，來(lái)闡明合用增毒的原因。

“甘草能解百藥毒”、“十方九草”是中醫(yī)方劑配伍解毒、調(diào)和藥性之經(jīng)典認(rèn)識(shí)。然而，“十八反”則告誡人們海藻、大戟、甘遂、芫花與甘草相對(duì)立不宜伍用。研究表明，“藻戟遂芫俱戰(zhàn)草”致毒、增毒效應(yīng)可能的作用機(jī)制有：(1)諸藥與甘草配伍后其有毒物質(zhì)可能與甘草中的甘草酸通過(guò)氫鍵形成復(fù)合物，以及具有表面活性的甘草三萜酸均有助于毒性成分的溶出，使其在水煎劑中的含量增高；(2)甘草在一定條件下或可穩(wěn)定大戟、甘遂毒性成分二萜醇(酯)和二萜原酸酯類成分的存在狀態(tài)，或延緩其毒性成分在體內(nèi)的消除速率而蓄積增毒。然而，甘草中主要成分甘草酸和甘草次酸對(duì)甘遂中毒性成分代謝的影響還未見(jiàn)報(bào)道。我們的實(shí)驗(yàn)采用體外微粒體溫孵的方法考察甘草酸和甘草次酸對(duì)KA、KB代謝的影響，以從兩味藥單體成分相互作用這一角度闡明合用增毒的可能原因。

當(dāng)然，中藥成分非常復(fù)雜，對(duì)中藥有效成分進(jìn)行細(xì)胞色素P450酶多種亞型的研究及藥物相互作用研究還不能夠全面闡釋中藥相互作用的原因。中藥間、中西藥間及中藥各成分間的相互作用尚需通過(guò)深入研究其對(duì)藥物代謝酶系統(tǒng)的影響規(guī)律，進(jìn)而闡明中藥相互作用、毒副作用發(fā)生的分子機(jī)制及科學(xué)內(nèi)涵，為中醫(yī)藥相互作用機(jī)制賦予現(xiàn)代的、科學(xué)的解釋，為臨床合理用藥提供理論基礎(chǔ)，提高中藥使用的安全性和有效性[11]。

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Combined effect ofEuphorbiakansuiandGlycyrrhizauralensison

metabolism of Kansuinine A and Kansuinine B

JING Xin-yue1, PENG Yun-ru2, WANG Xin-min3, DUAN Jin-ao3

(1.No.2ClinicalMedicalCollege,NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210023,China; 2.JiangsuProvincial

AcademyofTraditionalChineseMedicine,Nanjing210028,China; 3.JiangsuKeyLaboratoryforHighTechnology

ResearchofTCMFormulae,NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210023,China)

Key words: Kansuinine A; Kansuinine B;CYP2C19;enzyme inhibitors;glycyrrhizic acid;enoxolone