飼料中豆油替代魚粉對鯉魚生長、免疫力及消化酶活性的影響

■張寶龍 曲 木 程鎮(zhèn)燕 孫金輝 翟勝利 白東清 喬秀亭

（1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室，天津 300384；2.天津現(xiàn)代晨輝科技集團有限公司，天津 301800）

蛋白質(zhì)是魚類生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，如果飼料中蛋白含量不足，則會影響魚體生長。但飼料蛋白含量過高，剩余部分將會轉(zhuǎn)化為能量而被消耗掉。另外，魚類排泄到水體中的氮含量增加，會導(dǎo)致水環(huán)境惡化。在鯉魚配合飼料中，魚粉的價格最為昂貴，如果在不影響魚類生長和健康的情況下降低飼料的蛋白水平，將會大大降低飼料成本。很多研究表明，魚類對碳水化合物的利用率低，而對脂類有較高的利用率。Danielssen等(1991)、Berge等(1991)分別用脂肪含量為22%與30%的飼料飼喂大菱鲆幼魚和大西洋鮭，結(jié)果發(fā)現(xiàn)并未抑制其生長。施兆鴻等(2013)對褐菖鲉的研究表明，隨著飼料脂肪水平上升，褐菖鲉溶菌酶、SOD和CAT活性均有上升趨勢，當(dāng)脂肪添加量為6%時達到最大值。Infante等(1991)研究表明，隨著飼料脂肪水平上升，舌齒鱸腸道脂肪酶活性上升。飼料脂類可以提供魚類生長所需的必需氨基酸，為某些激素和維生素的合成提供原料。作為高熱量營養(yǎng)物質(zhì)，在飼料中適量添加可以減少蛋白質(zhì)作為能量的消耗，使之更好的合成體蛋白，從而起到對蛋白質(zhì)的節(jié)約作用。

鯉魚是我國最常見的養(yǎng)殖品種，目前關(guān)于鯉魚的營養(yǎng)學(xué)研究已有很多報道。但關(guān)于降低飼料蛋白水平的報道不為多見。本研究通過添加不同水平的豆油替代魚粉，測定不同替代量對鯉魚生長、免疫力和消化酶活力的影響，為優(yōu)化鯉魚配合飼料營養(yǎng)配比提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

試驗飼料以魚粉、豆粕、花生粕和棉粕作為蛋白源，豆油作為脂肪源，配制5種蛋白/脂肪水平為32/2.1、31.1/4、30.2/5.8、29.2/7.6、28.3/9.4的飼料（分別記作Diet 1、Diet 2、Diet 3、Diet 4、Diet 5）。各飼料原料均通過粉碎機粉碎全部過40目分析篩，混合均勻后，使用天祥水產(chǎn)有限公司提供的江蘇牧羊集團牧羊MUZLM V4型飼料制粒機制成直徑為2.00 mm的沉性顆粒飼料，常溫下晾干，用塑料袋密封包裝，置于-20℃冰箱中備用。使用前測定營養(yǎng)成分。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 試驗魚及飼養(yǎng)管理

試驗鯉魚為天津市換新水產(chǎn)良種場同一批繁殖的魚種，隨后運往天津市寧河縣天祥水產(chǎn)養(yǎng)殖公司。進行消毒處理后，以泡沫浮板搭在大面積混養(yǎng)池塘上構(gòu)建暫養(yǎng)池，通過拉網(wǎng)形式將暫養(yǎng)池分為15個小沉性網(wǎng)箱（1 m×1 m×2 m）。試驗魚以基礎(chǔ)飼料（蛋白水平為32%）預(yù)飼，馴化14 d，待其適應(yīng)環(huán)境后，選取規(guī)格一致[（36.12±1.82）g]、體質(zhì)健壯的鯉魚900尾進行試驗，隨機分為5組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)60尾魚。養(yǎng)殖期間，水溫（28±3.1）℃，pH值7.8±0.2，溶解氧大于5.0 mg/l，日投喂率為體重的3%～6%，每日投喂2次（09:00和15:00），試驗期63 d。

表1 飼糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 樣本的采集與指標(biāo)測定

1.3.1 生長指標(biāo)的測定

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，禁食48 h，測量所有試驗魚的體長、體重和全長，并計算增重率、飼料系數(shù)、特定生長率。

增重率（WG,%）=（Wt-W0）/W0×100；

特定生長率（SGR,%/d）=（LnWt-LnW0）×100/t；

飼料系數(shù)（FCR）=Id/（Wt-W0）。

式中：Wt和W0——魚的終末平均體重和初始平均體重（g）；

t——試驗天數(shù)；

Id——攝食量的干重（g）。

1.3.2 相關(guān)酶活性的測定

每個網(wǎng)箱隨機取20尾魚，用MS-222麻醉，采用尾部靜脈抽血方法，用1 ml一次性無菌注射器采血。在針管中加入少量肝素，每4尾魚的血為一個樣本，注入2 ml的離心管中，4℃、4 500 r/min離心15 min，取血清備用。將取血后的魚解剖，分別取肝胰臟和腸道組織，在冰生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙試干，用移液管加入9倍于組織塊質(zhì)量的預(yù)冷勻漿介質(zhì)（0.85%的生理鹽水），在勻漿器中進行勻漿，4℃、4 500 r/min離心15 min，取上清液備用，在-80℃條件下冷藏。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、過氧化氫酶（CAT）、溶菌酶（LZM）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、堿性磷酸酶（AKP）、脂肪酶（LPS）、淀粉酶（AMS）的測定均采用試劑盒測定。試劑盒購自南京建成生物工程研究所。蛋白酶的測定采用福林酚法。

1.3.3 飼料營養(yǎng)成分的測定

水分按照常壓恒溫烘干法（GB/T6435—1986）測定，粗灰分按照550℃灼燒法（GB/T6438—2007）測定，粗蛋白質(zhì)按照凱氏定氮法（GB/T6432—1994）測定，粗脂肪按照索氏抽提法（GB/T6433—1994）測定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析（one-way ANOVA），若差異達到顯著水平（P＜0.05），則進行Duncan's法多重比較。所有數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Means±S.E.）”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各處理組鯉魚的生長差異(見表2)

表2 各組鯉魚生長的比較

由表2可知，各處理組鯉魚存活率無顯著差異(P＞0.05)；增重率與特定生長率呈先下降后升高再降低的趨勢，且Diet 1～Diet 4四個處理組無顯著差異(P＞0.05)，但在Diet 4達到最大值，且顯著高于Diet 5(P＜0.05)；飼料系數(shù)Diet 4最低，且顯著低于Diet 5(P＜0.05)。

2.2 各處理組鯉魚免疫力的差異(見表3)

表3 各組鯉魚免疫力的比較

由表3可知，飼料中豆油替代魚粉可以增強鯉魚的抗氧化能力。血清及肝胰臟中SOD活性隨著替代量的升高而升高，且Diet 4顯著高于其它處理組（P＜0.05）；血清中Diet 1 CAT活性最高，肝胰臟中CAT活性呈先下降后上升再下降的趨勢。MDA含量呈先下降后上升的趨勢，且Diet 4 MDA含量低于其他處理組。

飼料中豆油替代魚粉影響鯉魚GOT、GPT活性，隨替代量的升高，鯉魚血清中GOT活性呈先下降后上升的趨勢，Diet 5顯著高于其它處理組（P＞0.05），在肝胰臟中Diet 2 GOT活性最低，且顯著低于其它處理組（P＜0.05）；鯉魚血清與肝胰臟中GPT活性呈先下降后上升的趨勢，Diet 2活性最低，Diet 5活性最高，且Diet 5顯著高于其它處理組（P＜0.05）。但對鯉魚血清與肝胰臟AKP、LZM活性無顯著影響（P＞0.05）。

2.3 各處理組鯉魚消化酶活性的差異(見表4)

表4 各組鯉魚消化酶活性的比較

由表4可知，隨著替代量的升高，鯉魚肝胰臟及腸道中蛋白酶活性呈下降趨勢。肝胰臟中Diet 1蛋白酶活性最高，且顯著高于Diet 4和Diet 5（P＜0.05），而腸道中，中腸蛋白酶活性高于前腸和后腸，但替代量對腸道各區(qū)間段蛋白酶活性無顯著影響（P＞0.05）。

隨著替代量的升高，鯉魚肝胰臟及腸道脂肪酶活性呈先上升后下降的趨勢，在肝胰臟中Diet 3脂肪酶活性最高，且顯著高于其它處理組（P＜0.05），在腸道中，中腸脂肪酶活性最低，前腸、中腸和后腸脂肪酶活性最高的處理組分別是Diet 3、Diet 4和Diet 4，且顯著高于Diet 1、Diet 2和Diet 5。鯉魚肝胰臟中淀粉酶活性呈先下降、上升、下降趨勢，腸道中淀粉酶活性呈先上升后下降的趨勢，但各組間無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 豆油替代魚粉對鯉魚生長的影響

在正常條件下，脂肪是含有能量最高的營養(yǎng)物質(zhì)，也是魚類體內(nèi)重要的儲備形式。許多研究表明，魚類對脂肪有較高的利用能力。不僅如此，脂肪還是組織細(xì)胞的重要組成成分，也是脂溶性維生素的溶劑，并為魚體提供必需脂肪酸。然而脂肪的添加量并非越多越好，添加脂肪過量，會導(dǎo)致魚體內(nèi)脂肪積累，死亡率升高，同時也會影響其食用價值。在本試驗條件下，飼料脂肪含量為7.6%(Diet 4)時，鯉魚生長效果最好。Takeuchi等(1991)研究發(fā)現(xiàn)，真鯛飼料中的脂肪含量從15%增加到20%，蛋白質(zhì)的含量從48%下降到35%，對魚類的生長沒有任何影響。龐思成等(1994)發(fā)現(xiàn)，添加3%～5%的豆油，飼料脂肪含量為8.8%～10.7%時，羅非魚生長最佳。向梟等(2008)對翹嘴紅鮊、Luo等(2009)對日本鱸、Chou等(1996)對奧尼羅非魚的研究表明，隨著飼料脂肪水平的升高，其特定生長率呈先上升后下降的趨勢，基本上與本試驗的結(jié)果相符。而Mohanta等(2008)對爪哇鯉的研究中發(fā)現(xiàn)，隨飼料脂肪水平升高，其特定生長率先上升后趨于穩(wěn)定。分析其原因，首先，魚的種類不同，對脂肪的需求量及代謝能力不同。其次，飼料中脂肪含量不足，不能為魚體提供足夠的必需脂肪酸，以及組織細(xì)胞合成所需的原料，最終造成魚體生長緩慢，而飼料中脂肪含量過高時，會使脂肪在肝臟及其它組織中過度積累，使組織受損，正常代謝功能受阻，從而降低了對飼料的利用率。在本試驗中，隨著飼料脂肪水平的升高，粗蛋白含量逐漸降低。飼料蛋白含量最高的Diet 1的特定生長率并不是最低的，反而高于Diet 2、Diet 3和Diet 5，這可能是由于飼料脂肪含量過低，過量的蛋白質(zhì)可以彌補其不足，從而為魚體提供生命活動所需的能量。Diet 4生長最好，恰好表現(xiàn)出了脂肪對蛋白質(zhì)的節(jié)約作用，而適宜的添加比例，可以有效的降低飼料成本。

3.2 豆油替代魚粉對鯉魚免疫力的影響

SOD、CAT及MDA綜合反映了魚體的抗氧化能力。SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，MDA則反映了機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度。在本試驗中，Diet 4血清SOD活性最高，MDA含量最低，Diet 1血清CAT活性最高。在肝胰臟中則是Diet 4 SOD活性最高，Diet 2 CAT活性最高，Diet 4 MDA含量最低。施兆鴻等(2013)對褐菖鲉的研究表明隨著飼料脂肪水平上升，褐菖鲉血清中SOD和CAT活性均呈上升趨勢，脂肪水平為18.5%飼料組活性最高，肝胰臟中SOD和CAT活性呈先上升后下降的趨勢，MDA含量呈上升趨勢，且飼料脂肪水平為12.4%飼料組肝胰臟的抗氧化能力最強。許治沖等(2012)對松浦鏡鯉的研究表明，水溫為30℃時，隨著飼料脂肪水平的升高，松浦鏡鯉肝胰臟中SOD活性呈降低趨勢，而MDA含量呈上升趨勢，脂肪水平為15%飼料組CAT活性最低。張春暖等(2013)研究表明，梭魚肝胰臟CAT活性隨飼料脂肪水平的升高而上升，SOD活性呈先上升后降低的趨勢，MDA含量與CAT活性變化趨勢相同。這些與本試驗結(jié)果并不完全相符。其原因可能是由于添加的脂肪源，以及魚的種類不同所導(dǎo)致的。但其整體的變化趨勢大體相近，已有研究表明，當(dāng)飼料中添加過多的油脂而未添加增強魚體抗氧化能力的物質(zhì)時，極易造成機體的氧化損傷。可能是由于攝入高脂肪水平飼料，鯉魚的肝胰臟沉積了大量脂肪，并有一部分已經(jīng)發(fā)生了氧化。

GOT、GPT主要存在于肝臟中，是衡量肝細(xì)胞損傷的重要標(biāo)志。AKP是生物體內(nèi)重要的水解酶，主要存在于巨噬細(xì)胞溶酶體中。在生物體內(nèi)起著催化和轉(zhuǎn)移磷酸基團的作用，也是血清和動物體各臟器、骨骼中不可或缺的免疫相關(guān)酶。許多學(xué)者也證明了AKP在營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和轉(zhuǎn)運的過程中起著重要作用，也是動物體內(nèi)重要的解毒體系。正常情況下，血清AKP活性很低，而當(dāng)肝臟或骨骼發(fā)生病變時，其活性將會升高。在本試驗中，鯉魚血清及肝胰臟GOT、GPT活性呈先下降后升高的趨勢，且Diet 5顯著高于其它處理組（P＜0.05）。而各處理組AKP活性無顯著差異（P＞0.05）。王愛民等(2011)研究表明，飼料脂肪水平對吉富羅非魚血清GOT、GPT活性無顯著影響（P＞0.05），但仍有先下降后上升的趨勢。吉富羅非魚血清AKP活性呈升高趨勢，當(dāng)飼料脂肪水平為16.55%時其活性顯著高于其它處理組（P＜0.05）。這與本試驗結(jié)果相符。章龍珍等(2014)對點籃子魚、趙巧娥等(2012)對鳡幼魚的研究也有相似的結(jié)果。蔣陽陽(2012)研究表明，血漿中GOT活性隨飼料蛋白水平的升高呈先升高后降低的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），隨飼料脂肪水平的升高顯著升高（P＜0.05）。GPT活性的變化趨勢與GOT活性變化基本相同，但顯著受飼料蛋白水平的影響（P＜0.05），而脂肪水平對其影響差異不顯著（P＞0.05）。這與本試驗結(jié)果不符。有相關(guān)報道，這種結(jié)果很可能是發(fā)生脂肪肝后肝細(xì)胞破損，主要儲存于肝細(xì)胞的各種酶進入血液，同時肝功能受阻，合成和分泌蛋白質(zhì)能力降低所造成的。

溶菌酶是重要的非特異性免疫指標(biāo)，鹿璇等(2014)對鯉魚、蔡春芳等(2001)對異育銀鯽的研究表明：飼料蛋白水平對溶菌酶活性無顯著影響（P＞0.05）。施兆鴻等(2013)對褐菖鲉的研究表明LZM活性隨飼料脂肪水平升高呈先升高后降低的趨勢，且脂肪含量為12.4%飼料組LZM活性顯著高于其它處理組（P＜0.05）。在本試驗中，各處理組LZM活性無顯著差異（P＞0.05）。Lin等(2003)研究表明，隨著飼料中多不飽和脂肪酸水平增加，馬拉巴石斑魚血清溶菌酶活性顯著提高，楊鳶劼等(2008)對黃鱔的研究表明，必需脂肪酸可以調(diào)節(jié)魚體的體液免疫和細(xì)胞免疫，促進淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。

3.3 豆油替代魚粉對鯉魚消化酶活性的影響

消化酶是魚類消化道中的重要物質(zhì)，其活性的高低決定著魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，進而影響魚類的生長。近年來，許多國內(nèi)外學(xué)者對魚類消化酶展開了較多的研究，但研究結(jié)果復(fù)雜多樣，魚的種類，飼料成分的變化都可對消化酶活性造成影響。孫翰昌等(2010)研究表明，飼料蛋白水平對瓦氏黃顙魚肝胰臟及腸道脂肪酶、淀粉酶活性無顯著影響（P＞0.05），而腸道蛋白酶活性隨飼料蛋白水平升高呈先上升后下降的趨勢。邵慶均等(2004)研究表明，寶石鱸腸道蛋白酶活性隨飼料蛋白水平的升高而升高，但對脂肪酶活性無顯著影響（P＞0.05）。石英等(2009)研究表明，血鸚鵡幼魚前腸蛋白酶活性隨飼料蛋白水平的升高呈先上升后下降的趨勢。王愛民等(2010)研究表明，脂肪水平為9.88%時，有促進異育銀鯽腸道分泌蛋白酶的作用，而對腸道分泌淀粉酶、肝胰臟分泌蛋白酶和淀粉酶無顯著作用。王朝明等(2010)研究表明，隨飼料脂肪水平升高胭脂魚腸道蛋白酶、淀粉酶活性呈下降趨勢，脂肪酶活性呈先升高后下降的趨勢。章龍珍等(2014)對點籃子魚脂肪酶活性的研究也有相同的結(jié)果。在本試驗中，隨著豆油對魚粉替代量的增加，鯉魚蛋白酶活性呈下降趨勢，脂肪酶活性呈先升高后下降的趨勢，而對淀粉酶的活性無顯著影響（P＞0.05）。這與上述研究結(jié)果有相符之處。魚的種類、飼料原料以及環(huán)境條件可能是造成差異的原因。本試驗中，各處理組腸道蛋白酶活性無顯著差異（P＞0.05），這也可能是飼料中適宜脂肪水平可滿足魚類對能量的需要，為必需脂肪酸的合成提供充足的原料，從而減少蛋白質(zhì)作為能源的消耗，促進蛋白質(zhì)的利用。但其具體的作用機制仍需進一步研究。

4 結(jié)論

綜合分析表明，飼料中蛋白與脂肪的合理配比，不僅有利于鯉魚的生長，增強其免疫力及消化酶活性，并且通過對蛋白質(zhì)的節(jié)約作用，可以有效降低飼料成本。在本試驗中適宜鯉魚生長的最佳蛋白/脂肪水平為29.2/7.6。

（參考文獻36篇，刊略，需者可函索）