如何科學地開設生化實驗

歐陽文英 唐瑋蔚 劉美玲

【摘 要】隨著我國醫(yī)學教育改革的不斷深入，醫(yī)學教育的目標已發(fā)展為培養(yǎng)高素質(zhì)、強能力、具有創(chuàng)新精神的綜合型人才。醫(yī)學實驗教學是培養(yǎng)醫(yī)學人才的重要環(huán)節(jié)，根據(jù)我院的實際情況，生化實驗的實驗項目按照“基礎性實驗”“綜合性實驗”“設計創(chuàng)新性實驗”三大板塊進行開設，聯(lián)系后續(xù)課程內(nèi)容及臨床。然而我院本科醫(yī)學生的生化實驗，有一部分實驗受到了學時不足、開設難度大的限制，為了解決這一難題，我們生化實驗室運用了“倒敘法”合理縮短了學時，科學地開設實驗。下面我將就我們實驗室開設的幾個采用“倒敘法”的實驗進行闡述。

【關鍵詞】生化實驗 ? ? 倒敘法 ? ? 科學

為了適應高等醫(yī)學院?；A醫(yī)學實驗教學的發(fā)展要求，培養(yǎng)醫(yī)學生的實踐能力和創(chuàng)新能力，我院針對全院本科醫(yī)學生的生物化學教學內(nèi)容進行了合理地調(diào)整，增加了有利于學習掌握生物化學新技術、培養(yǎng)學生科研能力的較大型綜合創(chuàng)新性實驗。原則上我院要求本科生生物化學實驗在四學時內(nèi)完成，然而聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳、醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)和蔗糖酶與淀粉酶的專一性這幾個實驗，四個學時是遠遠不夠的。在教學要求與教學條件的矛盾沖突下，我們實驗室就采用“倒敘法”來順利完成這些實驗。

聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳實驗按照正常的操作順序應該是：1.制備分離膠;2.制備濃縮膠;3.準備電泳槽;4.上樣;5.電泳;6.剝膠;7.固定、染色、漂洗;8.觀察結(jié)果。而我們實驗室則采用“倒敘法”，第一輪實驗所需要的凝膠包括分離膠和濃縮膠都由實驗室的老師準備就緒，往后每一輪實驗所需的凝膠由上一輪實驗的同學制備，將這個實驗分段同時進行。具體操作則變?yōu)椋?.準備電泳槽;2.上樣;3.電泳（電泳所需要的時間大概為一個小時左右，在這一個小時跑電泳的時間里，我們可以完成后續(xù)的實驗內(nèi)容）;4.制備分離膠;5.濃縮膠制備;6.剝膠;7.固定與染色、脫色;8.觀察結(jié)果。要合理地運用時間來完成這個實驗。

醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)的實驗中，我們也是先電泳以后再具體講原理和操作步驟以及方法。按照正常的程序應該是先講實驗目的、實驗原理、實驗器材與試劑，然后再重點講解實驗步驟，講完以后同學們再開始操作。然而我們先簡單地介紹一下實驗操作，然后開始點樣，點完樣以后再上樣和進行電泳。電泳跑上了以后我們再繼續(xù)接著講實驗目的、實驗原理、實驗器材與試劑，再詳細介紹實驗步驟，及每一個步驟需要注意的注意事項。薄膜準備：一般要浸泡半個小時以上，每一次都由實驗室的老師先準備好;儀器準備：剪裁尺寸合適的“濾紙橋”是用來聯(lián)系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的中間 “橋梁”（也由實驗室的老師準備好）;點樣;電泳：調(diào)節(jié)電壓，預電泳（50V，5min），然后再調(diào)節(jié)至120V左右，通電45分鐘，待電泳區(qū)帶展開至薄膜三分之二處時，停止通電;染色：用鑷子小心將薄膜取出，浸于氨基黑10B染色液中染色1-3分鐘;漂洗：漂洗3次干凈的薄膜用濾紙吸干，可見5條界限清晰的區(qū)帶;定量分析：剪下薄膜各蛋白色帶分別放入NaOH溶液中，30分鐘后去測其吸光度值;計算：計算各蛋白的相對百分含量和A/G比值。這樣就有效地縮短了學時，圓滿地完成了實驗。

蔗糖酶與淀粉酶的專一性實驗中，實驗的操作步驟：1.酵母蔗糖酶提出液制備：取鮮酵母（面包酵母）1小勺，放在小試管內(nèi)，倒入甲苯1～2ml，用粗玻璃棒攪拌約30～45分鐘使酵母液化，然后加蒸餾水3～5ml，充分混勻。3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，傾棄上清液，保留沉淀于小試管中，加蒸餾水1.5ml，甲苯0.2ml，混勻，在30℃水浴中過夜。次日取出，用玻璃棒攪勻，一邊攪拌一邊加3～5%稀醋酸，調(diào)節(jié)pH至3.5～4.0（用pH試紙測試），離心（3000轉(zhuǎn)/分）10分鐘。將上清液傾入潔凈的燒杯內(nèi)，加入少量硅藻土（約一小匙），混勻，3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。上清液用氨水中和至pH 5左右，放4℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用前可根?jù)實驗需要的活性大小適當稀釋。2.準備稀釋唾液（淀粉酶的來源）：實驗者先用水漱口，然后含一口蒸餾水于口中輕漱一、二分鐘，吐入小燒杯中。3.取6支試管按表格依次加入試劑，每管混勻后置于37℃恒溫水浴中保溫30min。另取大試管6支，每支試管中加Benedict試劑1ml（約20滴），加熱煮沸后，分別將保溫后的試管中的液體加入之，繼續(xù)煮沸2分鐘，放試管架上冷卻，觀察并記錄結(jié)果。解釋實驗結(jié)果。操作步驟中要求在30℃水浴中過夜，所以過夜這一部分的內(nèi)容由實驗室的老師提前給同學們準備好。同學們從次日取出開始操作，做完以后在保溫的30min時間里再做過夜的這一部分，做完又可以給下一個班的同學使用。這樣輪回倒轉(zhuǎn)法使我們的實驗有序完成。

這些實驗運用“倒敘法”在我院已通過多年的實踐，在圓滿完成本實驗的全面教學的同時，讓原來的四個學時完成不了的成為可能，既滿足了人才培養(yǎng)的教學需要，又克服了學時不足的現(xiàn)實條件，為實現(xiàn)創(chuàng)新人才培養(yǎng)目標、促進實驗教學改革奠定了基礎。

【參考文獻】

[1]黃春霞，龍昱.生物化學與分子生物學實驗教程[M].北京：北京大學醫(yī)學出版社，2014.

[2]歐陽文英，唐瑋蔚.臨床專業(yè)認證中生物化學實驗的改革與實施[J].考試周刊，2014（96）.

[3]胡桔紅，歐陽文英，湯婷，等.如何科學的開設聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳[J].青春歲月，2012（23）.