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    鄭州地區(qū)2013~2014年秋冬季腹瀉嬰幼兒輪狀病毒VP7基因分型

    2016-01-08 05:31:06王艷麗婁俊麗杜遠(yuǎn)舉李春力程艷波
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2015年33期
    關(guān)鍵詞:腹瀉輪狀病毒基因型

    王艷麗 婁俊麗 杜遠(yuǎn)舉 李春力 程艷波

    [摘要] 目的 了解鄭州地區(qū)秋冬季腹瀉患兒輪狀病毒(rotavirus,RV)G基因型。 方法 收集鄭州市第一人民醫(yī)院及鄭州人民醫(yī)院兒科門診及住院部2013年9月~2014年3月患兒的糞便標(biāo)本500份,采用膠體金法檢測RV抗原,陽性標(biāo)本進(jìn)行基因分型。 結(jié)果 500份標(biāo)本中,202份RV抗原陽性,陽性率為40.4%;陽性標(biāo)本進(jìn)行基因分型,G血清型以G1型(68.8%)為主要流行型別,其次為G3型(17.8%),G1和G3混合感染型(7.9%),G9型(1.5%)。 結(jié)論 鄭州地區(qū)A組RV以G1P8型為主,有混合感染型。

    [關(guān)鍵詞] 輪狀病毒;基因型;腹瀉;嬰幼兒

    [中圖分類號(hào)] R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701(2015)33-0045-03

    自1973年澳大利亞學(xué)者Bishop等首次發(fā)現(xiàn)輪狀病毒(Rotavirus,RV)以來,人們對(duì)RV的研究越來越深入。5歲以下的嬰幼兒大部分感染過RV腸炎[1]。在發(fā)展中國家,小兒腹瀉常常是嬰幼兒死亡的主要原因,僅次于肺炎,排在第二位[2]。大約90%的RV感染相關(guān)死亡病例發(fā)生在亞洲和非洲的發(fā)展中國家[3]。我國每年有4萬嬰幼兒因RV性腹瀉而死亡[4]。RV型別多,易變異,人群普遍易感。因此,不同地域RV流行特征明顯不同,同一地區(qū)不同季節(jié)型別也不同,甚至同一地方同一種型別也可能存在多種毒株同時(shí)流行[5]。因此有必要建立廣泛的RV監(jiān)測網(wǎng),動(dòng)態(tài)監(jiān)測RV流行株的變化,從而為疫苗研發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。鄭州屬溫帶氣候,是我國RV流行的代表性地區(qū)之一。為了解鄭州地區(qū)秋冬季RV基因型別,為RV疫苗的研制以及臨床應(yīng)用提供依據(jù),本研究收集鄭州市第一人民醫(yī)院及鄭州人民醫(yī)院兒科2013年9月~2014年3月500份門診及住院部腹瀉患兒的糞便標(biāo)本,進(jìn)行G基因型分型,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料

    收集2013年9月~2014年3月鄭州市第一人民醫(yī)院及鄭州人民醫(yī)院兒科門診及住院腹瀉患兒標(biāo)本500份,其中女193例,男307例,年齡在5歲以下,具體臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)見參考文獻(xiàn)[6]。

    1.2 RV檢測及提取試劑

    膠體金法檢測RV,使用小量柱離心式/液體樣品RNA/DNA抽提試劑盒(購自上海華舜工程有限公司)提取RVRNA。

    1.3 RV的G分型

    RT-PCR分別擴(kuò)增RV的VP7全長基因,net-PCR進(jìn)行血清型分型。所用引物均有上海英駿生物基因工程股份有限公司合成,具體分型方法及引物見參考文獻(xiàn)[7]。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及直接計(jì)數(shù)法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 輪狀病毒感染的年齡和性別分布

    通過ELISA方法檢測結(jié)果顯示:202份陽性標(biāo)本中,男女性別無明顯流行病學(xué)特征。輪狀病毒感染患兒以6個(gè)月~1歲居多, 與其他年齡段比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1、2。

    2.2 RVG血清型分型結(jié)果

    對(duì)202陽性標(biāo)本進(jìn)行G基因分型研究,RVG血清型以G1型為主,并有不同的混合性感染病例。見表3。

    3 討論

    目前國內(nèi)外對(duì)于輪狀病毒腹瀉的研究較多。研究路線比較成熟。本研究對(duì)2013年9月~2014年3月鄭州地區(qū)腹瀉患兒進(jìn)行監(jiān)測RV陽性率為40.4%,與2005年10月~2006年10月陽性率相比51.97%[8]及2010年RV感染率50%相比有所下降[4],低于國內(nèi)其他地區(qū)如烏魯木齊2007年RV感染率48.14%[9]、重慶地區(qū)2008年的50.69%[10],與國內(nèi)其他地區(qū)相比基本一致。

    A組RV作為引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體,主要感染人群為6個(gè)月~2歲的嬰幼兒,隨年齡增長感染比例下降,考慮可能為年齡增長兒童抵抗力增強(qiáng)有關(guān)。RV檢出率在男性患兒和女性患兒之間國內(nèi)報(bào)道各有區(qū)別。本研究顯示RV陽性率在男女患兒之間無差異。

    VP7為一種RV糖蛋白,是型特異性抗原,目前已有27個(gè)G血清型和35個(gè)P基因型被確定[11]。RV全球范圍內(nèi)最流行的組合為G1P8、G2P4、G3P8、G4P8、G9P8[12]。按照NCBI的分類標(biāo)準(zhǔn)VP7血清型有12個(gè)血清型(G1、G2、G3、G4、G5、G6、G8、G9、G10、G11、G12)和未能分型,其中5個(gè)(G1、G2、G3、G4、G9)型最為常見,且G9有增多趨勢[13],并發(fā)現(xiàn)不常見的G9、G10等型別的出現(xiàn)。高志勇等[14]監(jiān)測北京地區(qū)2011年RV分子流行型別以G1+G9P8混合型為主。近年來河南省部分地區(qū)2005年、2006年、2010年鄭州地區(qū)監(jiān)測的流行株以G3為主相比流行株有所改變[4]。本研究發(fā)現(xiàn)2013年9月~2014年3月鄭州地區(qū)RV基因分型以G1型為主,也有G9型的出現(xiàn)。目前國內(nèi)也常有報(bào)道發(fā)現(xiàn)G9型輪狀病毒。并逐漸成為繼G1~G4之后第5種最為流行的血清型,本研究發(fā)現(xiàn)有混合感染株以及不常見的G9型,G9型較2010年比例有所增加,這是否與氣候、環(huán)境變化以及樣本量增多等因素有關(guān),需要進(jìn)一步研究。

    RV腹瀉的嚴(yán)重程度和RV血清型的相關(guān)性研究一直是個(gè)熱點(diǎn)。2013年WHO在關(guān)于RV疫苗的意見書中提出RV的型別通常與疾病的嚴(yán)重程度無關(guān)。本課題研究發(fā)現(xiàn)在所有研究的RV分型中合并呼吸道感染的病例G9型居多,這是否與RVG9型易合并呼吸道感染有關(guān)還是與G9型毒力強(qiáng)有關(guān),需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

    目前國際市場上銷售的RV疫苗為默克公司研制生產(chǎn)并于2006年上市的RV5疫苗(5價(jià)牛-人重組疫苗),商品名RotaTeq,主要預(yù)防G1~G4血清型RV引起的胃腸炎以及葛蘭素史克公司研制生產(chǎn)并于2008年上市的RV1疫苗(單價(jià)人RV疫苗),商品名Rotarix,主要預(yù)防由G1、G3、G4、G9導(dǎo)致的RV胃腸炎。在我國使用的是蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn)的羊RV疫苗,該疫苗于1998年取得國家認(rèn)可并獲準(zhǔn)進(jìn)行試生產(chǎn),2001年獲得國家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的正式生產(chǎn)批件,投入使用安全有效。本研究還發(fā)現(xiàn)口服RV疫苗仍再次感染的情況,這說明RV疫苗的使用并不能完全起到預(yù)防作用。具體原因有可能是與RV具有分節(jié)段的基因組,極易發(fā)生基因重配和基因重組甚至點(diǎn)突變有關(guān)[15]。目前越來越多的RV的型別流行的研制給疫苗帶來挑戰(zhàn),理想的RV疫苗應(yīng)當(dāng)有很廣譜抗RV作用,且免疫性強(qiáng)無毒副作用。因此對(duì)RV流行病學(xué)的檢測意義重大。

    [參考文獻(xiàn)]

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    (收稿日期:2015-05-04)

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