藥品檢驗(yàn)中無(wú)菌觀念的培養(yǎng)及無(wú)菌操作規(guī)范

孫亦群

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405）

藥品檢驗(yàn)中無(wú)菌觀念的培養(yǎng)及無(wú)菌操作規(guī)范

孫亦群

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405）

介紹無(wú)菌概念、滅菌方法及無(wú)菌操作規(guī)范，強(qiáng)調(diào)培養(yǎng)無(wú)菌觀念的重要性及基本操作訓(xùn)練、無(wú)菌室的制度管理。

藥品檢驗(yàn)；無(wú)菌概念；操作規(guī)范

藥品是特殊商品，藥品質(zhì)量關(guān)系到人的健康和生命。因此，生產(chǎn)藥品的車間需達(dá)到一定的凈化級(jí)別，生產(chǎn)中的每個(gè)步驟都應(yīng)有操作規(guī)范，每一位操作者都應(yīng)具備一定的藥學(xué)專業(yè)知識(shí)并經(jīng)過(guò)崗位培訓(xùn)。作為一位藥學(xué)工作者，樹(shù)立無(wú)菌觀念、掌握無(wú)菌技術(shù)是十分必要的。

1 無(wú)菌技術(shù)

無(wú)菌技術(shù)包括無(wú)菌環(huán)境及無(wú)菌操作。

1.1 無(wú)菌環(huán)境

用物理或化學(xué)方法，在某一可控的空間內(nèi)，使微生物數(shù)量降到最低限度。

潔凈室是根據(jù)需要對(duì)空氣中塵粒、微生物、溫度、濕度、壓力和噪聲進(jìn)行控制的密閉空間，并以其空氣潔凈度級(jí)別符合有關(guān)規(guī)定為主要特征。我國(guó)將空氣潔凈度劃分為4個(gè)級(jí)別，見(jiàn)表1。

表1 空氣潔凈度級(jí)別

對(duì)于制藥車間來(lái)說(shuō)，一般要求達(dá)到300 000級(jí)到100 000級(jí)，而對(duì)于檢驗(yàn)用的無(wú)菌操作室，要求達(dá)到10 000級(jí)，局部100級(jí)（操作臺(tái)）。為保持無(wú)菌環(huán)境，防止污染，人流通道應(yīng)設(shè)2個(gè)緩沖間，需經(jīng)過(guò)換鞋、換衣、洗手、消毒等步驟方能進(jìn)入；物流設(shè)傳遞窗，物品經(jīng)清潔、消毒后，經(jīng)傳遞窗進(jìn)入。

1.1.1 物理滅菌法（1）干熱滅菌：滅菌設(shè)備為電烤箱。適用于設(shè)備、器械、容器、耐熱干粉藥劑的滅菌。

（2）濕熱滅菌：以水或水蒸氣為媒介，通過(guò)加熱提高溫度，達(dá)到滅菌效果。適用于設(shè)備、器械、耐熱液體藥劑、生藥等的滅菌。常用的方法有煮沸滅菌法、流通蒸氣法、間歇滅菌法、高壓蒸氣滅菌法、巴氏消毒法。①間歇滅菌法：當(dāng)溫度達(dá)到一定值，保溫一段時(shí)間后，降至室溫，再繼續(xù)加熱，溫度達(dá)到一定值，保溫一段時(shí)間后，降至室溫，這樣反復(fù)操作幾次，直至達(dá)到滅菌效果。如靈芝孢子粉的滅菌：加熱至70℃（或80℃），保溫1小時(shí)，降至室溫，反復(fù)操作3次。這個(gè)方法適用于不耐長(zhǎng)時(shí)間高溫的物品滅菌[1]。②高壓蒸氣滅菌法：常用各類壓力滅菌器，在壓力作用下，可使蒸氣穿透力增強(qiáng)，溫度提高，極大提高滅菌效果。這個(gè)方法適用于耐高溫的物品滅菌。③巴氏消毒法：最早用于牛奶的消毒。有兩種方法：保持式巴氏消毒法和連續(xù)式巴氏消毒法。保持式巴氏消毒法即在62℃～65℃處理30分鐘，立即降溫，15分鐘內(nèi)降至5℃以下，可殺滅致病微生物（如結(jié)核桿菌、布氏桿菌、沙門(mén)菌等）；連續(xù)式巴氏消毒法即在72℃～75℃保持15～16秒，立即降溫至10℃，再繼續(xù)加熱至80℃～85℃，保持10～15秒，立即降溫至10℃。而現(xiàn)在常用于血漿蛋白制品生產(chǎn)中的病毒滅活的巴氏消毒法是60℃保持10小時(shí)[2-3]。

（3）輻射滅菌：醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。①紫外線滅菌：紫外線消毒滅菌（UVGⅠ）定義為：使用紫外線光輻射進(jìn)行空氣和表面消毒殺菌的技術(shù)，即利用紫外線C波段254 nm波長(zhǎng)產(chǎn)生的紫外線破壞微生物的DNA或RNA，達(dá)到消毒殺菌的效果。紫外線消毒滅菌是一種高效、廣譜、無(wú)污染、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)單的實(shí)用技術(shù)，可廣泛應(yīng)用于水、空氣的消毒殺菌，是一項(xiàng)被醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的最有效的廣譜殺菌技術(shù)。其可在短時(shí)間內(nèi)殺滅分布于空氣及水中的微生物，還能產(chǎn)生活性氧清新空氣，對(duì)潔凈室來(lái)說(shuō)能增加空氣新鮮度、潔凈度，真正達(dá)到潔凈衛(wèi)生的空氣品質(zhì)，并適用于物品表面的消毒[4]。②微波滅菌：微波（Microwave）是頻率在300 MHz至300 GHz，波長(zhǎng)在1 mm至1 000 mm范圍內(nèi)的超高頻電磁波。在微波輻射下產(chǎn)生熱效應(yīng)，并使分子的運(yùn)動(dòng)加劇，分子的平均能量增加，瞬間提高溫度，達(dá)到滅菌效果[5]。③鈷60射線滅菌：利用60Co-Y射線對(duì)細(xì)菌進(jìn)行輻射，破壞細(xì)菌的DNA和RNA，使分子發(fā)生降解，失去合成蛋白質(zhì)和遺傳的功能，使細(xì)胞死亡，達(dá)到滅菌效果。具有穿透力強(qiáng)、節(jié)能、安全、方便（不必除去包裝）、高效、滅菌徹底等優(yōu)點(diǎn)。一般選擇輻照劑量為10 kGy以下、輻照時(shí)間為5小時(shí)就能達(dá)到滅菌效果。對(duì)不能以常規(guī)方法滅菌的制劑，可以采用鈷60輻照滅菌[3]。

（4）濾過(guò)滅菌：利用微孔濾膜（0.22 μm）濾除細(xì)菌。常用于熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料、生化藥劑、水及空氣的滅菌。

1.1.2 化學(xué)滅菌法 化學(xué)滅菌法可分為氣體滅菌法和液體滅菌法。（1）氣體滅菌法是指采用氣態(tài)殺菌劑（如臭氧、環(huán)氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和過(guò)氧乙酸蒸氣等）進(jìn)行滅菌的方法。該法特別適合環(huán)境消毒以及不耐加熱滅菌的醫(yī)用器具、設(shè)備和設(shè)施的消毒，亦可用于粉末注射劑。（2）液體滅菌法是指采用液態(tài)殺菌劑進(jìn)行消毒的方法。該法常作為其他滅菌法的輔助措施，適合于皮膚、無(wú)菌器具和設(shè)備的消毒。常采用的消毒液有75%乙醇、1%聚維酮碘溶液、0.1%～0.2%苯扎溴銨（新潔爾滅）、2%左右的酚或煤酚皂溶液等。

1.2 無(wú)菌操作

無(wú)菌操作一般是指在無(wú)菌環(huán)境下，使用無(wú)菌器材進(jìn)行操作，可保證操作中物品不被二次污染、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性及檢驗(yàn)人員的安全。無(wú)菌操作涉及的面很廣，現(xiàn)以藥品檢驗(yàn)中的無(wú)菌操作為例，簡(jiǎn)述如下[6]。

1.2.1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 消毒（對(duì)無(wú)菌操作室地面、墻面、工作臺(tái)面及燈具等進(jìn)行消毒）→空間滅菌（開(kāi)啟凈化系統(tǒng)和紫外線燈）→經(jīng)滅菌處理的實(shí)驗(yàn)器具與供試品進(jìn)入無(wú)菌室（通過(guò)物流通道）→操作人員進(jìn)入第一緩沖間（換鞋、洗手、用消毒液消毒手）→操作人員進(jìn)入第二緩沖間（穿戴無(wú)菌工作服、鞋、帽、口罩，75%乙醇噴霧消毒手）→操作人員進(jìn)入無(wú)菌室→點(diǎn)燃酒精燈，用有消毒液的棉球消毒手→進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.2.2 檢驗(yàn)操作規(guī)程（1）實(shí)驗(yàn)全過(guò)程應(yīng)在近火焰處操作，動(dòng)作要輕。（2）對(duì)供試品及實(shí)驗(yàn)器皿做標(biāo)記。（3）對(duì)接種環(huán)（針）進(jìn)行灼燒滅菌。（4）用吸管吸取供試液或培養(yǎng)液等。（5）用過(guò)的玻璃器皿應(yīng)立即放入消毒液缸（桶）內(nèi)進(jìn)行滅菌。（6）在開(kāi)啟菌種管或其他供試品安瓿之前，應(yīng)用碘伏溶液、碘酒棉球消毒容器及刻痕用的砂輪、鋸刀等，安瓿切口通過(guò)火焰滅菌。（7）在接種霉菌、放線菌時(shí)，應(yīng)在鋪有浸過(guò)消毒液的濕紗布上操作，以防孢子散落傳播。（8）培養(yǎng)皿開(kāi)蓋時(shí)開(kāi)口朝向火焰，不得將蓋放在工作臺(tái)上，拔出玻璃容器塞子時(shí)應(yīng)用小指夾住塞子拔出，不得將塞子放在工作臺(tái)上，以免造成污染。（9）觀察平板培養(yǎng)物時(shí)，一般不宜開(kāi)蓋觀察。如取菌落或菌苔涂片、染色，或做玻片凝集試驗(yàn)時(shí)，在近火焰處操作，平皿蓋可適當(dāng)開(kāi)啟（45°），開(kāi)口朝向火焰，挑取菌落。（10）在涂片、染色時(shí)，應(yīng)使用夾子夾持載玻片，切勿用手直接拿載玻片，用過(guò)的載玻片和蓋玻片應(yīng)放入消毒液中消毒后洗刷清潔，再經(jīng)消毒后再洗刷清潔，最后放在固定處。

2 無(wú)菌觀念的培養(yǎng)

臨床上常由于操作人員未嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，導(dǎo)致醫(yī)療、護(hù)理事故，而在制藥及藥品檢驗(yàn)上，雖然不比醫(yī)療上會(huì)造成嚴(yán)重后果，但同樣也會(huì)造成很大的損失。如造成整批藥品微生物限度超標(biāo)而報(bào)廢；又如因操作污染，檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，需要從頭來(lái)過(guò)等。無(wú)菌操作看似簡(jiǎn)單，但無(wú)菌觀念的養(yǎng)成卻并不簡(jiǎn)單。要應(yīng)用好無(wú)菌技術(shù)，就要樹(shù)立牢固的無(wú)菌觀念。無(wú)菌觀念的形成不是一蹴而就的，強(qiáng)化無(wú)菌觀念是一個(gè)長(zhǎng)期的、重要的任務(wù)，需要不斷學(xué)習(xí)、培訓(xùn)，強(qiáng)化無(wú)菌意識(shí)，還要建立嚴(yán)格的制度，以制度管理員工，才能使員工逐漸樹(shù)立無(wú)菌觀念，做好每一步無(wú)菌操作，生產(chǎn)出合格的無(wú)菌產(chǎn)品。

2.1 無(wú)菌知識(shí)的學(xué)習(xí)

藥學(xué)人員應(yīng)時(shí)刻牢記藥品是特殊商品，質(zhì)量是企業(yè)的生命，藥品質(zhì)量直接關(guān)系到人的健康甚至生命。只有了解無(wú)菌概念，才能知道其重要性，才能自覺(jué)樹(shù)立無(wú)菌意識(shí)。在無(wú)菌操作中，自覺(jué)做好每一步操作，最終完成無(wú)菌操作全過(guò)程，生產(chǎn)出合格的無(wú)菌產(chǎn)品，產(chǎn)品的質(zhì)量就會(huì)有保證。

2.2 滅菌技術(shù)及無(wú)菌操作的培訓(xùn)

無(wú)菌操作是培訓(xùn)重點(diǎn)，僅學(xué)習(xí)幾個(gè)概念、定義及條文是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。因此，要加強(qiáng)滅菌技術(shù)及無(wú)菌操作的培訓(xùn)，通過(guò)培訓(xùn)，使員工清楚地了解怎么做是正確的、怎么做是錯(cuò)誤的，加深他們對(duì)無(wú)菌觀念的認(rèn)識(shí)和理解，從而逐漸養(yǎng)成無(wú)菌操作的良好習(xí)慣。

以藥品檢驗(yàn)為例，實(shí)習(xí)生及新入職的檢驗(yàn)員都要經(jīng)過(guò)培訓(xùn)才能上崗。初上崗時(shí)，需要教師帶教，對(duì)以下問(wèn)題進(jìn)行實(shí)地講解：操作環(huán)境需要消毒，如何消毒？所有物品，包括檢驗(yàn)器具、培養(yǎng)皿、吸管、稀釋液、培養(yǎng)基都要消毒，如何消毒？為什么消毒物品要裝入容器內(nèi)，或用消毒巾包好？無(wú)菌物品在空氣中能否暴露較長(zhǎng)時(shí)間？無(wú)菌物品取出后能否放回?zé)o菌容器內(nèi)？為什么手經(jīng)過(guò)消毒，還是不能接觸吸管吸樣品的一端？用吸管取樣時(shí)，能否用嘴吹？通過(guò)對(duì)這些問(wèn)題的講解，以加深實(shí)習(xí)生及新入職檢驗(yàn)員對(duì)無(wú)菌觀念的認(rèn)識(shí)。

2.3 嚴(yán)格的制度管理

員工經(jīng)過(guò)學(xué)習(xí)和培訓(xùn)，了解了無(wú)菌概念，樹(shù)立了無(wú)菌意識(shí)，養(yǎng)成了無(wú)菌操作的良好習(xí)慣，還需要嚴(yán)格的制度管理才能使無(wú)菌觀念長(zhǎng)久地樹(shù)立心中，順利地貫徹執(zhí)行下去[7]。其中，無(wú)菌操作室管理制度包括：（1）無(wú)菌操作室溫度應(yīng)控制在18℃～26℃，相對(duì)濕度應(yīng)控制在45%～65%，并做到每天記錄；（2）級(jí)別不同的相鄰房間的靜壓差應(yīng)大于5 Pa，無(wú)菌操作室與室外大氣的靜壓差應(yīng)大于10 Pa，以保證空氣新鮮，并做到每天記錄靜壓差；（3）無(wú)菌操作室內(nèi)空氣的微生物數(shù)和塵粒數(shù)應(yīng)符合規(guī)定并定期檢查和記錄。無(wú)菌操作室微生物數(shù)、塵粒數(shù)檢測(cè)每年一次，檢測(cè)報(bào)告應(yīng)歸檔備查；（4）進(jìn)入無(wú)菌操作室按規(guī)定穿潔凈工作服，工作人員應(yīng)按個(gè)人衛(wèi)生制度進(jìn)行檢查，合格后方可進(jìn)入潔凈室。無(wú)菌操作室使用完畢，應(yīng)嚴(yán)格按清潔規(guī)程進(jìn)行各房間、器具等的清潔工作，實(shí)驗(yàn)前后均應(yīng)對(duì)無(wú)菌操作室進(jìn)行消毒，并有清潔記錄及消毒記錄。另外，人員出入均需登記；（5）無(wú)菌操作室內(nèi)嚴(yán)格控制人員數(shù)量，無(wú)關(guān)人員嚴(yán)禁入內(nèi)。工作人員（包括維修輔助人員）應(yīng)定期進(jìn)行衛(wèi)生和微生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)、潔凈作業(yè)等方面的培訓(xùn)與考核，對(duì)進(jìn)入無(wú)菌操作室的臨時(shí)外來(lái)人員應(yīng)進(jìn)行指導(dǎo)和監(jiān)督。

[1]蕭莉.靈芝孢子粉低溫間歇滅菌法除菌效果的考察[J].中國(guó)藥業(yè)，2003，12（1）：52.

[2]薛廣波.現(xiàn)代消毒學(xué)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002.

[3]張文福.醫(yī)學(xué)消毒學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2002.

[4]嚴(yán)浩.紫外線消毒滅菌（UVGI）與（過(guò)濾+UVGI）潔凈技術(shù)[J].機(jī)電信息，2009（29）：3-9.

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1671-1246（2015）08-0158-02