老年胃癌患者胃癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C、-D、-A、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2表達(dá)、幽門螺旋菌-L型感染與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

老年胃癌患者胃癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C、-D、-A、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2表達(dá)、幽門螺旋菌-L型感染與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

王成袁麗萍殷麟

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，青海西寧810001)

摘要〔〕目的分析老年胃癌患者胃癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-C、-D、A及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)-2的表達(dá)和幽門螺旋菌(Hp)-L型感染與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法胃癌患者手術(shù)病理組織蠟塊標(biāo)本90例，采取免疫組化法測(cè)定VEGF-C、-D、-A、FGF-2、Hp-L型表達(dá)水平，計(jì)算微淋巴管密度(LVD)。結(jié)果Hp-L型陽(yáng)性組VEGF-C、-D陽(yáng)性率顯著高于Hp-L型陰性組(P<0.01)。VEGF-C、-D陽(yáng)性表達(dá)組和Hp-L感染LVD顯著高于陰性組(P<0.01)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組VEGF-C、-D、FGF-2表達(dá)和Hp-L型感染陽(yáng)性率、LVD顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組(P<0.01)。LVD和胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性(P<0.01)。結(jié)論Hp-L型感染、VEGF-C、-D、FGF-2和胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切， Hp-L型感染、VEGF-C、-D在胃癌組織淋巴管生成方面具有一定作用，Hp-L型感染、VEGF-C、-D、FGF-2可共同促進(jìn)胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

關(guān)鍵詞〔〕血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2；幽門螺旋菌-L型；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；胃癌

中圖分類號(hào)〔〕R459.3；R656.61〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

第一作者：王成(1971-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸腫瘤研究。

胃癌早期臨床癥狀不明顯，隨著病情進(jìn)展可逐漸出現(xiàn)惡心、嘔吐、上腹不適、吞咽困難、幽門梗阻以及消化道出血等癥狀。胃癌的發(fā)病是多因素綜合作用的結(jié)果〔1，2〕。主要病因有飲食生活習(xí)慣、幽門螺桿菌(Hp)感染及遺傳因素等。其中Hp感染與胃癌之間的關(guān)系已被證實(shí)，但是有關(guān)Hp-L型與胃癌關(guān)系的研究較少見(jiàn)。另外，癌組織中的某些細(xì)胞因子與胃癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚未完全闡明。本研究通過(guò)免疫組化法對(duì)胃癌組織中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-C、-D、-A、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)-2進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)檢測(cè)幽門螺旋菌(Hp)-L型的感染情況，旨在探究其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)標(biāo)本我科2011年1月至2015年1月胃癌手術(shù)病理組織蠟塊標(biāo)本90例，均確診為胃癌，同時(shí)臨床病史資料完整，術(shù)前未進(jìn)行任何抗癌治療。男68例，女22例；年齡62~83歲，平均(72.4±3.9)歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例，淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移35例。

1.2試劑和試驗(yàn)方法兔抗人VEGF-C、-D、-A多克隆抗體、兔抗人FGF-2單克隆抗體購(gòu)自福州邁新公司，兔抗人Hp-L型抗體、鼠抗人D2-40單克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物公司。將病理組織石蠟塊切片厚度為4 μm，進(jìn)行免疫組化SP法染色，采用PBS代替一抗進(jìn)行陰性對(duì)照。

1.3觀察指標(biāo)VEGF-C、-D、-A、FGF-2表達(dá)：免疫組化中，陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)中棕黃色或黃色顆?！?〕。其中染色程度：0分，不著色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。染色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率：0分，<5%；1分，5%~25%；2分，26%~50%；3分，51%~75%；4分，>75%。染色程度和染色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率相乘乘積進(jìn)行計(jì)算：0分，陰性；1~4分，弱陽(yáng)性；5~8分，中度陽(yáng)性；9~12分，強(qiáng)陽(yáng)性。Hp-L型表達(dá)：免疫組化中，陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)中棕黃色細(xì)顆粒〔4〕。微淋巴管密度(LVD)計(jì)算：D2-40陽(yáng)性表現(xiàn)為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜中棕黃色顆粒。計(jì)數(shù)時(shí)先在100倍低倍鏡視野下選取腫瘤中心和邊緣組織中含有淋巴管最多的部分。選取200倍高倍鏡視野，隨機(jī)選取3個(gè)視野計(jì)數(shù)，計(jì)算其平均值〔5〕。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS22.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、多因素Logistic回歸分析。

2結(jié)果

2.1VEGF-C、-D、-A及FGF-2的表達(dá)和Hp-L型感染之間的關(guān)系Hp-L型陽(yáng)性組的VEGF-C、-D陽(yáng)性率顯著高于Hp-L型陰性組(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1　VEGF-C、-D、-A及FGF-2的陽(yáng)性表達(dá)和

2.2VEGF-C、-D、-A、FGF-2的表達(dá)、Hp-L型感染的胃癌組織中LVD比較VEGF-C、-D和Hp-L感染陽(yáng)性組LVD顯著高于陰性組(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2　VEGF-C、-D、-A、FGF-2陽(yáng)性表達(dá)、

2.3VEGF-C、-D、-A、FGF-2的表達(dá)、Hp-L型感染、LVD和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組VEGF-C、-D、FGF-2表達(dá)和Hp-L型感染陽(yáng)性率、LVD顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3　VEGF-C、-D、-A、FGF-2的表達(dá)、Hp-L型感染、LVD值和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系( n)

2.4胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)因素的Logistic回歸分析LVD和胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性(P<0.01)。見(jiàn)表4。

表4　胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)因素的Logistic回歸分析

3討論

毛細(xì)淋巴管的生成是癌組織發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的重要因素〔6〕。而VEGF是促進(jìn)毛細(xì)淋巴管生成的重要因子〔7〕。其作用機(jī)制為與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上VEGF受體(VEGFR)結(jié)合，引發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與分化。VEGF中對(duì)淋巴管生成起主要作用的有VEGF-C、VEGF-D及VEGF-A〔8〕。其中VEGF-C和VEGF-D具有同源性，均通過(guò)與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFR-3結(jié)合，使細(xì)胞內(nèi)第二信使活化，從而激活A(yù)kt或MAPK等信號(hào)通路，正向調(diào)控淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化及遷移的過(guò)程，促進(jìn)淋巴管生成。正常組織中，VEGF-C和VEGF-D常處于失活或者封閉狀態(tài)。而腫瘤組織中VEGF-C和VEGF-D表達(dá)水平上升，且處于活性狀態(tài)，具有誘導(dǎo)癌組織內(nèi)毛細(xì)淋巴管生成的作用，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。而VEGF-A則是通過(guò)與VEGFR-1、VEGFR-2相結(jié)合，一方面可直接促進(jìn)腫瘤組織淋巴管的生成和轉(zhuǎn)移，另一方面可刺激巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞分泌VEGF-C和VEGF-D，從而間接促進(jìn)毛細(xì)淋巴管的生成。LVD是反映癌組織淋巴管生成的主要指標(biāo)〔9〕。本研究結(jié)果說(shuō)明VEGF-C和VEGF-D的表達(dá)水平升高是腫瘤組織新生毛細(xì)淋巴管生成的基礎(chǔ)，VEGF-C和VEGF-D與胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移具有密切的聯(lián)系。而本研究中未發(fā)現(xiàn)VEGF-A與胃癌組織淋巴管生成之間的顯著關(guān)系，一方面可能由于VEGF-A在腫瘤組織發(fā)生和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的直接作用并不明顯，另一方面可能與研究樣本的局限性有關(guān)。

FGF-2是一種多功能細(xì)胞因子〔10〕。FGF-2對(duì)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移、血管生成、胚胎發(fā)育等過(guò)程均起重要作用。其中當(dāng)FGF-2處于低水平表達(dá)時(shí)，主要促進(jìn)淋巴管生成，其作用機(jī)制主要分為兩方面，一是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激活FGF受體及其下游的信號(hào)通路，直接誘導(dǎo)癌組織的毛細(xì)淋巴管生成，二是通過(guò)促進(jìn)炎性細(xì)胞如單核巨噬細(xì)胞等分泌VEGF-C和VEGF-D，從而間接調(diào)節(jié)腫瘤淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、分化及轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果證實(shí)了FGF-2在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用。

Hp是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細(xì)菌〔11〕。研究顯示，約60%以上胃癌患者均存在Hp感染〔12〕。其中Hp-L型由于缺失細(xì)胞壁，無(wú)法維持螺旋形彎曲的外部形態(tài)，主要表現(xiàn)為球形或短桿形。Hp-L型表面電荷發(fā)生變化，增強(qiáng)了其對(duì)胃組織細(xì)胞的黏附性，定植能力更強(qiáng)。Hp-L型促進(jìn)胃癌毛細(xì)淋巴管生成的主要機(jī)制為：①Hp-L型長(zhǎng)時(shí)間定植于胃組織中，引發(fā)慢性炎癥，從而促進(jìn)炎性細(xì)胞釋放各種炎性因子，其中包括VEGF及FGF-2等，從而間接促進(jìn)癌組織淋巴管的生成；②慢性炎癥可導(dǎo)致胃組織血管及淋巴管通透性增加，滲出增加，導(dǎo)致組織水腫，可引發(fā)局部組織缺氧，從而誘導(dǎo)各種細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)，促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增生和轉(zhuǎn)移。本研究說(shuō)明Hp-L型感染與胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。LVD和胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性。

綜上，VEGF-C、-D、FGF-2及Hp-L型感染能促進(jìn)腫瘤組織新生毛細(xì)淋巴管的生成和轉(zhuǎn)移，是胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要因素。

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〔2013-12-19修回〕

(編輯苑云杰)