蛹蟲草子實(shí)體中抗氧化活性化合物的分離純化

邵 穎，陳安徽，張傳麗，周 揚(yáng)

蛹蟲草子實(shí)體中抗氧化活性化合物的分離純化

邵 穎，陳安徽，張傳麗，周 揚(yáng)

（徐州工程學(xué)院 江蘇省食品資源開發(fā)與質(zhì)量安全重點(diǎn)建設(shè)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 徐州 221008）

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除活性為指導(dǎo)對蛹蟲草子實(shí)體中的抗氧化活性化合物進(jìn)行了分離純化。對蛹蟲草子實(shí)體經(jīng)甲醇浸提后獲得的甲醇提取物，再進(jìn)行硅膠柱色譜分離得到一個(gè)具有較強(qiáng)抗氧化活性的組分CM9，組分CM9利用反相高效液相色譜法進(jìn)行活性指導(dǎo)下的分離得到抗氧化活性化合物CM9-1。該化合物采用薄層色譜和高效液相色譜法進(jìn)行純度檢測發(fā)現(xiàn)此為純品化合物，液相色譜-質(zhì)譜分析結(jié)果表明該化合物相對分子質(zhì)量為430，分子式為C22H22O9。該物質(zhì)在質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時(shí)對0.4 mg/mL的DPPH自由基試劑的清除率為（73.67±0.29）%。

蛹蟲草；子實(shí)體；抗氧化活性化合物；分離；純化

自由基又叫游離基，是人體生命活動(dòng)中多種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物。在正常的生命過程中，自由基是維護(hù)生命所必需的物質(zhì)，具有增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬功能，參與前列腺素、脂肪加氧酶、膠原蛋白、凝血酶原等物質(zhì)的合成，參與肝臟解毒，調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂，維持人體正常氧化代謝過程等多種重要作用[1-3]。自由基在體內(nèi)處于一種不斷產(chǎn)生、不斷被抗氧化系統(tǒng)清除的動(dòng)態(tài)平衡中，但機(jī)體在一些特殊條件下會(huì)使得自由基大量堆積，造成機(jī)體在分子水平、細(xì)胞水平及組織器官水平的各種損傷[4-8]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究結(jié)果揭示的證據(jù)表明，自由基與人體常見的100余種疾病及衰老密切相關(guān)[9-14]。隨著自由基理論和抗氧化劑研究的深入，天然抗氧化劑的研發(fā)越來越受到重視，許多學(xué)者從一些植物、中草藥及多種微生物的代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了大量的具有抗氧化活性的天然成分[15-19]。

蛹蟲草（Cordyceps militaris（L.）Link.）又名北冬蟲夏草，與冬蟲夏草同屬蟲草屬（Cordyceps），大量研究成果表明蛹蟲草的功效成分和藥理作用接近或超過冬蟲夏草，可作為冬蟲夏草的有效替代品，具有廣闊的開發(fā)利用價(jià)值[20-21]。蛹蟲草中富含蟲草素、蟲草酸、腺苷、多糖、氨基酸等多種生物活性成分，具有抗菌、消炎、抗癌、增強(qiáng)免疫力等多種重要的藥理活性[22-24]。近年來，學(xué)者對蛹蟲草的無性型蛹擬青霉的液體發(fā)酵代謝產(chǎn)物及子實(shí)體進(jìn)行系統(tǒng)活性研究時(shí)發(fā)現(xiàn)了蛹蟲草及其無性型代謝產(chǎn)物較強(qiáng)的抗氧化活性[13,25-27]。雖然大量研究顯示了蛹蟲草及其無性型代謝產(chǎn)物的抗氧化活性，但抗氧化活性物質(zhì)的分離純化研究成果卻報(bào)道甚少。本研究對蛹蟲草進(jìn)行固體培養(yǎng)，并對獲得的子實(shí)體在1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除活性指導(dǎo)下進(jìn)行抗氧化活性成分的分離純化，獲得了一種蟲草多糖之外的抗氧化活性化合物。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蛹蟲草無性型菌株蛹擬青霉菌株P(guān)aecilamyces militaris（菌株號為xzcs005）保存于徐州工程學(xué)院食品（生物）工程學(xué)院，蛹蟲草子實(shí)體為本實(shí)驗(yàn)室自行栽培。

DPPH(分析純） 美國Sigma公司；甲醇（分析純） 徐州星光化工廠；甲醇（色譜純）江蘇恒安試劑公司；二氯甲烷（分析純） 上海建信化工有限公司；柱層析硅膠（70～150 μm） 中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司；GF254高效薄層硅膠板 青島海洋化工廠。

1.2 儀器與設(shè)備

YXQ.SG4/.280手提式壓力蒸汽滅菌器 上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司；WFH-203B三用紫外分析儀 上海精科實(shí)業(yè)有限公司；040520111G冷凍干燥系統(tǒng) 美國Labconco公司；SENCO R-502B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海申勝生物技術(shù)公司；LC3100高效液相色譜儀、UV3100高效液相色譜（紫外檢測器） 安徽皖儀科技股份有限公司；6210高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國Agilent公司；Synergi Hydro分析柱（4.6 mm×250 mm，4 μm） 美國Waters公司；AIR TECH超凈工作臺 蘇凈集團(tuán)安泰公司；Spectra Max M2酶標(biāo)儀 美國分子儀器公司； LRH-250-G光照培養(yǎng)箱 廣東省醫(yī)療器械廠；AE200型電子天平 梅特勒-托利多（上海）公司。

1.3 方法

1.3.1 DPPH自由基清除活性的定性定量評價(jià)

1.3.1.1 甲醇提取物DPPH自由基清除活性定性檢測

將蛹蟲草子實(shí)體甲醇提取物重新配制成10 mg/mL的溶液，以質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的抗壞血酸甲醇溶液為陽性對照，分別取4 μL點(diǎn)樣于硅膠板上進(jìn)行DPPH自由基清除活性檢測，選擇V（二氯甲烷）∶V（甲醇）∶V（水）= 7∶3∶0.5為展開劑，室溫條件下采用上行法展開，待流動(dòng)相到達(dá)距上沿1 cm的地方取出讓展開劑自然揮干。然后噴事先用95%乙醇配制好的0.4 mg/mL DPPH試劑，并用鉛筆輕輕劃下活性斑點(diǎn)。

1.3.1.2 DPPH自由基清除活性定量測定

參照胡豐林等[28]的方法并改進(jìn)。將樣品用甲醇配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的樣品溶液。將各質(zhì)量濃度的樣品溶液100 μL和事先用95%乙醇配制好的0.4 mg/mL DPPH自由基試劑100 μL 于96孔酶標(biāo)板中，每個(gè)樣品設(shè)3 個(gè)重復(fù)。樣品加入后將96孔酶標(biāo)板置于酶標(biāo)儀中振動(dòng)30 s，在37 ℃、517 nm波長條件下測定其吸光度（Ap）；37 ℃保溫10 min后再測定1 次。同時(shí)測定不加DPPH自由基試劑的樣品的空白吸光度（Ac）和加DPPH試劑但不加樣品（100 μL甲醇代替樣品）的吸光度（Amax）。最后按照下述公式計(jì)算樣品的自由基清除率。

1.3.2 蛹蟲草子實(shí)體抗氧化活性物質(zhì)的提取和分離

1.3.2.1 子實(shí)體甲醇提取物的制備

稱取蛹蟲草子實(shí)體凍干粉50 g，加入200 mL甲醇并于超聲振蕩器中于400 Hz條件下振蕩浸提45 min，過濾除去固形物，收集上清液，揮去溶劑，得到5.09 g提取物。

1.3.2.2 甲醇提取物的硅膠柱層析分離

將5.00 g甲醇提取物用適量的色譜甲醇充分溶解后，與40 g層析硅膠G100（100～200 目）拌勻后，脫除甲醇后上柱（H=40 cm、Φ=6 cm），硅膠柱床采用濕法裝柱。使用石油醚-乙酸乙酯-甲醇洗脫系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，初始洗脫液為石油醚、乙酸乙酯、甲醇體積比為80∶15∶5的混合液，隨著洗脫的進(jìn)行石油醚在洗脫液中的體積百分比逐梯度降低2%，同時(shí)乙酸乙酯體積百分比增加2%，每個(gè)梯度的洗脫體積約1 500 mL，每500 mL洗脫液收集一瓶，共收集66 瓶。將收集到的洗脫液分別于硅膠板上點(diǎn)樣50 μL，揮干溶劑后噴質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL DPPH自由基乙醇溶液進(jìn)行顯色，將含有相似成分的洗脫液進(jìn)行合并。

1.3.2.3 甲醇提取物柱層析分離組分的抗氧化活性檢測

將經(jīng)過柱層析分離得到的組分減壓濃縮至原體積的1/10，再各取50 μL點(diǎn)樣于同一塊硅膠板上，以V（二氯甲烷）∶V（甲醇）∶V（水）=65∶30∶5為展開劑于室溫條件下展開，展開后揮去有機(jī)溶劑并噴灑0.4 mg/mL DPPH試劑，并于紫外燈下觀察熒光猝滅點(diǎn)以確定抗氧化活性組分。

1.3.2.4 抗氧化活性組分中活性物質(zhì)的分離純化

采用高效液相色譜法對經(jīng)過活性鑒定的抗氧化活性組分進(jìn)行進(jìn)一步分離純化。對經(jīng)過硅膠柱色譜分離后獲得的活性組分采用反相高效液相色譜制備進(jìn)行進(jìn)一步分離純化。色譜條件為：將組分CM9用甲醇配制成1.0 mg/mL的溶液，進(jìn)樣50 μL。流動(dòng)相為甲醇和水，具體洗脫條件為：0～30 min甲醇10%～100%，30～45 min 100%甲醇洗脫，40～50 min 甲醇100%～0%，50～60 min水洗，甲醇洗脫速率為2.0 mL/min，二極管陣列檢測器檢測波長為260 nm。

1.3.3 抗氧化活性化合物的初步鑒定

1.3.3.1 化合物的純度鑒定

薄層層析鑒定：將經(jīng)過1.3.2節(jié)分離純化出的活性物質(zhì)溶于適量甲醇，點(diǎn)樣于薄層層析板，分別于兩種不同的展開劑中（V（二氯甲烷）∶V（甲醇）=5∶1；V（乙酸乙酯）∶V（甲醇）=7∶1）展開，于紫外燈下觀察熒光猝滅點(diǎn)，并用碘蒸氣顯色以鑒定物質(zhì)的純度。

高效液相色譜鑒定：將分離到的單一活性成分用甲醇溶解后配制成0.2 mg/mL的溶液，在兩種不同的梯度洗脫條件下進(jìn)行反相高效液相色譜分析，根據(jù)色譜峰鑒定活性物質(zhì)的純度。洗脫條件Ⅰ：A為5%甲醇配制的0.01% (NH4)H2PO4，B為100%甲醇；洗脫條件Ⅱ：A為100% H2O，B為100%甲醇。本實(shí)驗(yàn)具體的梯度洗脫設(shè)置如表1所示。

表 1 流動(dòng)相梯度設(shè)置Table 1 Mobile phase gradients

1.3.3.2 抗氧化活性物質(zhì)的高效液相色譜-質(zhì)譜分析

取活性物質(zhì)樣品若干配制成0.1 mg/mL的甲醇溶液，進(jìn)樣1 μL進(jìn)行高效液相色譜-質(zhì)譜分析。液相色譜柱規(guī)格Waters（3.9 mm×150 mm，5 μm），流速為1 mL/min，梯度洗脫0～10 min甲醇0%～20%，10～20 min甲醇20%～100%，然后100%甲醇沖洗。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用DPS 7.05版軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)均采用±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛹蟲草子實(shí)體甲醇提取物的自由基清除活性定性分析

將蛹蟲草的子實(shí)體甲醇提取物按照1.3.2.1節(jié)的方法，以質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的抗壞血酸-甲醇溶液為陽性對照，進(jìn)行DPPH自由基清除活性定性檢測，結(jié)果如圖1所示。

以已知具有抗氧化活性的抗壞血酸-甲醇溶液作為陽性對照，蛹蟲草子實(shí)體甲醇提取物點(diǎn)樣展開并噴灑0.4 mg/mL DPPH試劑反應(yīng)后與抗壞血酸在相同條件下的反應(yīng)結(jié)果相似，均在DPPH-薄層分析（thin layer chromatography，TLC）上有黃色斑點(diǎn)呈現(xiàn)，說明蛹蟲草甲醇提取物具有DPPH自由基清除活性。從圖1可以看出，蛹蟲草甲醇提取物在本實(shí)驗(yàn)條件下展開并噴灑DPPH試劑后呈現(xiàn)一個(gè)明顯和兩個(gè)隱約可見的黃色斑點(diǎn)，說明甲醇提取物中具有抗氧化活性的物質(zhì)至少有3 個(gè)。

圖 1 甲醇提取物清除DPPH自由基活性的定性分析Fig.1 DPPH-TLC assay of methanol extract from the fruiting body of Cordyceps militaris

2.2 甲醇提取物的硅膠柱層析分離

準(zhǔn)確稱取5.00 g蛹蟲草甲醇提取物按照1.3.2.2節(jié)的方法進(jìn)行裝柱，使用石油醚-乙酸乙酯-甲醇洗脫系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫后，將收集到的洗脫液濃縮后分別進(jìn)行薄層色譜分析，展開劑為V（二氯甲烷）∶V（甲醇）∶V（水）= 65∶30∶5，展開后噴0.4 mg/mL DPPH試劑并紫外燈下觀察熒光淬滅點(diǎn)，將含有相似成分的洗脫液進(jìn)行合并，合并后獲得9個(gè)組分，分別標(biāo)記為CM1、CM2、CM3……CM9。將合并的9 個(gè)組分進(jìn)行DPPH自由基清除活性定性檢測，結(jié)果如圖2所示。

圖 2 各組分的DPPH-TLC活性測定圖譜Fig.2 DPPH-TLC assay of nine fractions of the methanol extract

從圖2看出可以，組分CM4、CM6、CM8、CM9展開噴灑DPPH試劑后呈現(xiàn)的黃色斑點(diǎn)較為明顯，其中CM8和CM9最為突出，說明理論上CM8和CM9組分中含有較強(qiáng)的DPPH自由基清除活性物質(zhì)。從圖2還可以看出，雖然CM8組分展開后黃色斑點(diǎn)較亮，但斑點(diǎn)距離原點(diǎn)的距離較近，說明活性物質(zhì)的極性較大而且也未得到有效的分離。因此本實(shí)驗(yàn)將對組分CM9中的DPPH自由基清除活性物質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化。

2.3 抗氧化活性組分的高效液相色譜分離純化

對經(jīng)過硅膠柱色譜分離后獲得的活性組分采用反相高效液相色譜制備進(jìn)行進(jìn)一步分離純化。組分CM9于1.3.2.4節(jié)方法的色譜條件下主要有5 個(gè)洗脫峰，分別按洗脫峰收集各個(gè)樣品，脫除溶劑后用甲醇配制成1.0 mg/mL的樣品進(jìn)行DPPH自由基清除活性的定量檢測。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

表 2 不同分離組分的DPPH自由基清除率Table 2 DPPH radical scavenging-activities of the different compounds

由表2可知，經(jīng)高效液相色譜分離純化收集到的5個(gè)成分對DPPH自由基均有清除活性，其中CM9-1在質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時(shí)對0.4 mg/mL的DPPH試劑的自由基清除率達(dá)到（73.67±0.29）%，顯著高于分離到的其他4 個(gè)組分。說明組分CM9-1為蛹蟲草子實(shí)體甲醇提取物中的主要抗氧化活性成分。本研究重復(fù)10 次進(jìn)樣收集CM9-1成分，脫除溶劑后冷凍干燥進(jìn)行純度鑒定。

2.4 純度鑒定

2.4.1 TLC鑒定

將CM9-1溶于適量甲醇后點(diǎn)樣于薄層層析板，分別于兩種不同的展開劑中（A展開劑為V（二氯甲烷）∶V（甲醇）=5∶1；B展開劑為V（乙酸乙酯）∶V（甲醇）= 7∶1）展開，于紫外燈下觀察熒光猝滅點(diǎn)，并用碘蒸氣顯色以鑒定物質(zhì)的純度。TLC圖譜如圖3所示。

圖 3 CM9-1的TLC圖譜Fig.3 TLC assay of CM9-1

由圖3可以看出，CM9-1于兩種展開劑中分別展開，在254 nm波長條件下觀察只有單一斑點(diǎn)，而且使用碘蒸汽熏蒸后也只呈現(xiàn)一個(gè)斑點(diǎn)，化合物CM9-1可以被初步判斷為純化合物。

2.4.2 高效液相色譜鑒定

將CM9-1用甲醇溶解后配制成0.2 mg/mL的溶液，在1.3.3.1節(jié)兩種不同的梯度洗脫條件下進(jìn)行反相高效液相色譜分析。為了驗(yàn)證CM9-1成分在分離純化過程其性質(zhì)是否發(fā)生了變化，所以本實(shí)驗(yàn)也將蛹蟲草子實(shí)體甲醇提取物用甲醇溶解后配制成0.2 mg/mL的溶液并在洗脫條件Ⅰ下進(jìn)行反相高效液相色譜分析。

蛹蟲草甲醇提取物在洗脫條件Ⅰ，成分CM9-1在洗脫條件Ⅰ、Ⅱ，采用表1的流動(dòng)相梯度設(shè)置洗脫得到的高效液相色譜圖譜分別如圖4～6所示。

圖 4 甲醇提取物的分析高效液相色譜圖譜Fig.4 Analytic HPLC chromatogram of the MeOH extract

圖 5 CM9-1于條件Ⅰ的分析高效液相色譜圖譜Fig.5 Analytic HPLC chromatogram of CM9-1 under condition Ⅰ

圖 6 CM9-1于條件Ⅱ的分析高效液相色譜圖譜Fig.6 Analytic HPLC chromatogram of CM9-1 under condition Ⅱ

化合物CM9-1在兩種不同的洗脫條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，從其分析圖譜圖5、6可以看出，該物質(zhì)在洗脫條件Ⅰ和Ⅱ條件下洗脫分別在保留時(shí)間28.901 min和36.791 min有強(qiáng)吸收峰，除此之外無其他吸收峰出現(xiàn)，再結(jié)合TLC純度鑒定的結(jié)果綜合說明化合物CM9-1為純化合物。另外，在洗脫條件Ⅰ條件下對蛹蟲草的甲醇提取物進(jìn)行了高效液相色譜分析，發(fā)現(xiàn)蛹蟲草甲醇提取物中成分較多，但在保留時(shí)間為28.634 min也有一強(qiáng)吸收峰，與化合物CM9-1在相同條件下的出峰保留時(shí)間基本保持一致，說明化合物CM9-1在本實(shí)驗(yàn)條件下分離純化其性質(zhì)未發(fā)生變化。經(jīng)過多次進(jìn)樣，根據(jù)峰面積計(jì)算CM9-1的純度達(dá)到95.39%以上。所以，本實(shí)驗(yàn)方法是蛹蟲草子實(shí)體中抗氧化活性成分分離純化的可行方法。

2.5 CM9-1的液相色譜-質(zhì)譜分析

圖 7 CM9-1化合物色譜圖（A）和陰（B）、陽（C）離子圖譜Fig.7 HPLC-MS chromatogram (A) and spectra of compound CM9-1 in negative (B) and positive (C) ion modes

將樣品CM9-1配制成0.1 mg/mL的甲醇溶液進(jìn)行高效液相色譜-質(zhì)譜分析，如圖7所示。陰離子圖譜、陽離子圖譜中均有較強(qiáng)的離子碎片峰。陰離子有m/z 253.061 3、429.130 6、475.103 3和859.269 4的離子碎片峰，分別判定為（M-C7H13O5）-、（M-H）-、（M＋CHO2）-和（2M-H）-峰。從陽離子圖譜中可以看出有m/z 255.067 8的碎片峰，對應(yīng)的分子式為C15H11O4，應(yīng)是M-C7H12O5＋H＋峰。另外，有m/z 431.144 2、883.263 3的離子碎片峰，分別判定為M＋H＋峰、2M＋Na＋峰。綜合陰離子和陽離子圖譜，該化合物對應(yīng)的相對分子質(zhì)量為430，分子式為C22H22O9。

3 結(jié) 論

2009年衛(wèi)生部根據(jù)《中華人民共和國食品安全法》和《新資源食品管理辦法》的規(guī)定，將蛹蟲草批準(zhǔn)為新資源食品。蛹蟲草的安全性及特定的保健功效已得到了廣泛的認(rèn)可，所以從蛹蟲草子實(shí)體中提取天然抗氧化劑應(yīng)用于食品、保健品、化妝品等行業(yè)意義重大。

本研究以DPPH自由基清除活性為指導(dǎo)，采用硅膠柱層析和高效液相色譜法對蛹蟲草子實(shí)體中的抗氧化活性成分進(jìn)行分離純化，得到一個(gè)具有較強(qiáng)抗氧化活性的化合物CM9-1，該分離方法快捷方便。CM9-1采用TLC和高效液相色譜法進(jìn)行純度檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物在兩種不同的展開劑中展開，不同的顯色條件下顯色均呈現(xiàn)一個(gè)斑點(diǎn)；化合物CM9-1在兩種不同的洗脫條件下洗脫時(shí)其高效液相色譜分析圖譜中僅出現(xiàn)一個(gè)主峰，綜合多種純度檢測結(jié)果可以說明化合物CM9-1為一純品化合物。該化合物經(jīng)高效液相色譜-質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)其相對分子質(zhì)量為430，分子式為C22H22O9。當(dāng)該物質(zhì)質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL時(shí)對0.4 mg/mL的DPPH試劑的自由基清除率為（76.23±0.45）%?；衔顲M9-1分離自新資源食品蛹蟲草子實(shí)體并具有較強(qiáng)抗氧化活性，CM9-1分離自蛹蟲草子實(shí)體的甲醇提取物，是已知抗氧化活性成分蛹蟲草多糖之外的一種化合物，后續(xù)將在本實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上對該化合物進(jìn)行進(jìn)一步結(jié)構(gòu)分析。本研究確定了蛹蟲草子實(shí)體活性除了蟲草多糖之外的新的物質(zhì)基礎(chǔ)。

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Isolation and Purification of Antioxidant Components in Fruiting Body of Cordyceps militaris

SHAO Ying, CHEN Anhui, ZHANG Chuanli, ZHOU Yang
(Jiangsu Key Construction Laboratory of Food Resource Development and Quality Safe, Xuzhou Institute of Technology, Xuzhou 221008, China)

The 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity was used as an indicator and the bioassayguided fractionation was developed to isolate antioxidant components from the fruiting body of Cordyceps militaris. The methanol extract of the fruiting body of Cordyceps militaris was separated by silica gel column chromatography and a higher active antioxidant component CM9 was obtained. By using reversed-phase high performance liquid chromatographic (RP-HPLC) method, CM9-1 was purified from component CM9 and was confirmed as a pure compound by thin layer chromatography (TLC) and HPLC. The results of mass spectrographic analysis showed that molecular weight of the purified antioxidant compound CM9-1 was 430 with a molecular formula of C22H22O9. At the concentration of 1.0 mg/mL, CM9-1 could decrease (73.67 ± 0.29)% of 0.4 mg/mL DPPH radicals. The results of this study could offer a new way to develop health natural antioxidant.

Cordyceps militaris； fruiting body； antioxidant components； isolation； purification

Q939.9

A

1002-6630（2015）08-0175-06

10.7506/spkx1002-6630-201508032

2014-06-20

安徽省科技計(jì)劃項(xiàng)目（1301C063011）

邵穎（1979—），女，講師，博士，研究方向?yàn)槲⑸镔Y源開發(fā)與應(yīng)用。E-mail：shyzhbo2005@126.com