黃芩總黃酮苷元對小鼠肝臟的保護作用

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(江西中醫(yī)藥大學藥學系，江西 南昌 330004)

·基礎(chǔ)醫(yī)學·

黃芩總黃酮苷元對小鼠肝臟的保護作用

徐勤*，李怡光

(江西中醫(yī)藥大學藥學系，江西 南昌 330004)

目的探討黃芩總黃酮苷元(SBTF)對肝臟的保護作用。方法將70只小鼠隨機均分為7組(空白組、模型組、陰性對照組、聯(lián)苯雙酯陽性對照組及高、中、低劑量黃芩總苷元給藥組)，每組10只，灌胃給藥15天。高、中、低劑量給藥組分別給黃芩總苷元400、200、100 mg/kg；陽性組給予聯(lián)苯雙酯200 mg/kg；陰性組給予2.0%泊洛沙姆水溶液；模型組和空白組均給予生理鹽水。第15天給藥6 h后除空白組外均腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。12 h后稱重，取血，分離肝臟，拍照、制勻漿測定丙二醛(MDA)指標；全血離心后取血清測定肝功能指標丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)。結(jié)果陽性組與高劑量給藥組中小鼠肝臟外表光滑紅潤，無血塊和斑點，但光澤差于空白組；中、低劑量給藥組紅潤程度依次下降，并可見瘀斑漸次明顯；陰性組和模型組外觀蒼白，可見成塊淤血、瘀斑。模型組、陰性組AST、ALT、MDA指標與空白組相比明顯升高；給藥組AST、ALT、MDA指標按低、中、高劑量下降，與模型組相比差異有顯著性。結(jié)論黃芩總黃酮苷元對肝臟有保護作用。

黃芩總黃酮苷元； 保肝； 四氯化碳； 藥理

黃芩為唇形科植物黃芩的干燥根，性寒，味苦，具清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎之功效[1]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，黃芩尚有保肝方面的功效，但多集中在黃芩苷類研究[2-4]。本研究將黃芩苷類提取后充分酶解，并經(jīng)高效液相檢測，將苷類全部轉(zhuǎn)化為苷元。并以此為藥物，觀察其對小鼠肝臟的保護作用。本實驗采用四氯化碳腹腔注射來制作肝損傷模型[5]，并以天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate transaminase，AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase，ALT)及丙二醛(Malondialdehyde，MDA)為指標反映肝功能的實際損傷程度。以此定量描述黃芩總黃酮苷元(Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid，SBTF)的保肝作用。

1 材料與方法

1.1 儀器

S/54紫外分光光度計(上海立光精密儀器有限公司)；METTLER AE240電子天平(梅特勒托利多儀器公司)；離心機(深圳市超杰實驗儀器有限公司)；P10-W實驗室用純水機(長沙源科儀實驗器材有限公司)；KCD-1006超聲機(南昌科昌達超聲設(shè)備廠)

1.2 藥品和試劑

黃芩總苷元(為陜西商洛野生子芩經(jīng)提取、酶解后制得，高效液相檢測結(jié)果顯示黃芩苷已徹底酶解為苷元，其中黃芩素、漢黃芩素、千層紙素、去甲漢黃芩素峰面積總和占93.12%)；AST、ALT試劑盒(北京中生生物工程公司)；丙二醛(MDA)測定試劑盒(南京建成科技有限公司)；聯(lián)苯雙酯滴丸(購于藥店)；水為純化水，其余輔料為藥用級別。

1.3 實驗動物

雄性昆明種小鼠70只，體重25～30 g，購于江西中醫(yī)藥大學動物中心(合格證號：JZDWNO：2012-0029)。將小鼠隨機分為七組，每組10只，分別為空白對照組、模型組、陰性對照組、聯(lián)苯雙酯陽性對照組以及低、中、高劑量黃芩總苷元給藥組。

1.4 給藥、造模及檢測方法

因黃芩總苷元難溶于水，故采用2.0%泊洛沙姆水溶液為分散介質(zhì)，將黃芩總苷元配成0.5%、1.0%、2.0%濃度混懸液，每日以20 mL/kg分別給低、中、高給藥組灌胃；為消除泊洛沙姆對實驗結(jié)果的影響，每日以2.0%泊洛沙姆水溶液給陰性對照組灌胃；將聯(lián)苯雙酯滴丸于研缽中研碎，加水，超聲溶解，使成1.0%濃度水溶液，每日以20 mL/kg給陽性對照組灌胃；空白對照組與模型組每天灌以等量生理鹽水。

于第15天灌胃6 h后，空白組按1 mL/kg腹腔注射植物油，其余各組腹腔注射0.1%四氯化碳油溶液。禁食12 h后稱重，眼眶取血，剝離完整肝組織，用濾紙吸去肝臟表面血跡，稱重，拍照，用生理鹽水沖洗后制成10%肝臟勻漿，吸取上清液測定MDA含量。同時血液以3 000 r/min離心10 min，取上清液按試劑盒說明測定AST及ALT的濃度。

1.5 統(tǒng)計學處理

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理。各組數(shù)值以均數(shù)±標準差表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 形態(tài)學觀察圖

陽性組與高劑量組中小鼠肝臟外表光滑紅潤，無血塊和斑點，但光澤差于空白組；中、低劑量組紅潤程度依次下降，并可見瘀斑漸次明顯；陰性組和模型組外觀蒼白，可見成塊淤血、瘀斑，肝損傷嚴重(如圖1)。

圖1 小鼠肝臟外觀圖 A：高劑量黃芩總苷元組；B：中劑量黃芩總苷元組；C：低劑量黃芩總苷元組；D：陰性對照組；E：空白對照組；F：模型組；G：聯(lián)苯雙酯陽性組

2.2 小鼠血清ALT、AST、MDA測定結(jié)果

小鼠的ALT、AST指標顯示的結(jié)果與小鼠肝臟外觀結(jié)果一致，空白組及陽性組與模型組之間差異有極顯著性，而高、中、低劑量給藥組與模型組之間差異有顯著性；小鼠MDA數(shù)據(jù)與空白組相比，模型組、陰性組MDA數(shù)據(jù)上升極顯著，而低、中、高劑量組與模型組相比差異有顯著性，且呈現(xiàn)出下降趨勢。詳見表1。

表1小鼠血清ALT、AST、MDA測定結(jié)果

組別nAST(IU/L)ALT(IU/L)MDA(nmol/mgprot)空白組1029.98±0.36b8.32±0.17b7.44±1.04b模型組10206.01±8.64305.52±17.0520.8±2.84陰性組10205.76±4.88307.45±7.3920.4±2.47聯(lián)苯雙酯陽性對照組(200mg/kg)10110.94±8.34b138.9±16.33b9.27±1.33b黃苓總黃酮苷元組 高劑量組(400mg/kg)10142.65±7.05a198.44±7.52a11.5±1.05b 中劑量組(200mg/kg)10154.33±4.81a219.36±4.37a13.2±0.81a 低劑量組(100mg/kg)10169.46±6.41a245.60±5.41a15.8±1.41a

與模型組比較，a:P<0.05,b:P<0.01

3 討 論

目前肝病已經(jīng)成為社會健康的主要問題，目前治療肝病尚沒有特異性高的藥物，導致患者生活質(zhì)量顯著下降[6]。而中藥副作用小，適于長期服用，所以從中藥中尋找一個有效的護肝藥成為現(xiàn)在一個焦點。

ALT位于肝細胞漿內(nèi)，而AST位于肝細胞漿和線粒體內(nèi)，兩者只有在肝細胞損傷后才會進入到血液中[7]。而MDA是在肝損傷時組織缺氧缺血，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)而生成的。故根據(jù)本實驗結(jié)果可以看出，黃芩總黃酮苷元可以顯著抵御四氯化碳對肝臟的傷害，而起到保肝作用。

由于本研究采用的藥物為完全酶解后的苷元，排除了苷類物質(zhì)對實驗結(jié)果的影響，從這點上提示在保肝作用上，黃芩苷類很有可能為前藥，而真正藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是其苷元部分。其作用機制可能是通過多個酚羥基的抗氧化能力對抗自由基對肝細胞的破壞而起效[8]。但是自然界中具有抗氧化性的物質(zhì)不勝枚舉，光從這一個角度無法完全說明黃芩總黃酮苷元對肝臟特有的保護作用，其更進一步的作用機制還有待進一步的發(fā)現(xiàn)與完善。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業(yè)出版社，2010:282.

[2] 寧康健，呂景芳，江景鵬，等.黃芩苷對小鼠四氯化碳肝損傷保護作用的研究[J].中國中醫(yī)藥科技，2011,18(2)：120-121.

[3] 旺曉軍，馬赟，張奉學.黃芩甙對ConA致肝損傷小鼠肝組織MDA含量的影響[J].世界華人消化雜志，2005，13(9)：1153-1155.

[4] 康輝，李強，王麗.黃芩提取物、黃芩苷抗氧化和保肝作用研究[J].中醫(yī)研究，2010,23(4)：27-29.

[5] 黎旸，李謹翡，蔣忠軍.CCl4致小鼠急性肝損傷模型的研究[J].熱帶醫(yī)學雜志，2010,10(6)：657-659.

[6] 張麗霞，李星丹，鄭衛(wèi)，等.慢性肝病患者的生存質(zhì)量量表[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志，2012,15(2)：8-9.

[7] 姚光弼.肝臟損傷的機制[J].中國消化雜志，1998,18(4)：235-238.

[8] 曾祥偉，楊麗燕，陳金龍，等.黃酮類成分抗自由基氧化活性進展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2013,28(9)：2694-2696.

EffectofScutellariaBaicalensisTotalFlavonoidonLiver-protection

XU Qin，LI Yiguang

(JiangxiUniversityofChineseTraditionalMedicine，Nanchang,Jiangxi330004,China)

ObjectiveTo study the hepatic protection effect of Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid (SBTF).MethodsSeventy male Kunming mice were randomly divided into seven groups:blank control group,model group,negative group,bifendate positive group and high-dose,middle-dose,low-dose group.Stomach perfusion was given for 15 days; High-dose,middle-dose,low-dose group were given SBTF 400mg/kg，200mg/kg，100mg/kg each once a day; positive group,negative group,model group and blank control group were given bifendate(200mg/kg),poloxamer solution(2.0%),normal saline separately.At the 15th day,6 hours after perfusion,all mice were intraperitoneally injected carbon tetrachloride oil resolution (0.1%) except the blank group,and 12h later,mice were weighed and taken for blood; their livers were separated,taking pictures,making homogenate to test MDA.The whole blood was centrifugalled and blood serum was to test ALT and AST and calculate liver index.ResultFor positive and high-dose group,the surface of mice’s liver was smooth and ruddy with no blood clot or spots,but a little dull compared with blank control group; middle-dose and low-dose group had less ruddy sequence with more obvious blood spots; negative and model group were pale,with block of clots and spots.AST,ALT,MDA of negative and model group were apparently higher than blank control group; decreases in the sequent low-dose,middle-dose,high-dose group,but not so evident as positive group.ConclusionSBTF has a hepatoprotection effect,positively related to its dose.

Scutellaria Baicalensis Total Flavonoid; hepatoprotection; carbon tetrachloride; pharmacology

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2015.01.009

2014-04-14；

2014-11-20

*通訊作者，E-mail：xjh6262@sina.com.

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(此文編輯：蔣湘蓮)