不同灸法對免疫抑制兔血細(xì)胞的影響

吳愛花，單增天，田岳鳳，李雷勇，王 軍

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，山西太原030006）

不同灸法對免疫抑制兔血細(xì)胞的影響

吳愛花1，單增天1，田岳鳳1，李雷勇2，王 軍1

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，山西太原030006）

目的：觀察不同灸法對環(huán)磷酰胺所致免疫抑制兔外周血細(xì)胞的影響。方法：大耳白兔50只隨機(jī)分為5組，分別為空白組、模型組、隔藥餅灸組、艾灸組、假藥餅灸組。除空白組外均腹腔注射環(huán)磷酰胺60 mg/kg，連續(xù)7 d，造成免疫抑制模型。3個治療組分別進(jìn)行隔藥餅灸、艾灸、假藥餅灸治療，隔日灸，共灸10次。灸療結(jié)束次日靜脈取血，進(jìn)行血細(xì)胞系列的檢測。結(jié)果：與空白組比較，模型組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，隔藥餅灸組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；艾灸組RBC明顯升高（P＜0.01）；假藥餅灸組9項指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：隔藥餅灸對因環(huán)磷酰胺所致的免疫功能低下狀態(tài)具有明顯的改善作用。

環(huán)磷酰胺；免疫抑制；隔藥餅灸；艾灸；血細(xì)胞

作為祖國醫(yī)學(xué)的一種傳統(tǒng)療法，艾灸能有效調(diào)節(jié)機(jī)體免疫抑制狀態(tài)已被大量實驗研究所證實。本文從藥物、艾灸、穴位三者協(xié)同作用的隔藥餅灸的角度，探討其對免疫抑制兔外周血細(xì)胞系列的影響，為臨床艾灸提高機(jī)體免疫力低下提供實驗依據(jù)，豐富艾灸防病治病的理論內(nèi)涵。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 大耳白兔50只，體重（2.5±0.3）kg，雌雄不限，由北京昌揚(yáng)西山養(yǎng)殖場提供［動物合格證號：SCXK（京）2011-0010］。飼養(yǎng)溫度20℃～25℃，相對濕度50%～70%。

1.1.2 藥物、試劑與儀器 注射用環(huán)磷酰胺（CTX），200 mg/瓶，山西普德藥業(yè)股份有限公司（批號：H14023686）。0.9%NaCl注射液500 mL（石家莊四藥有限公司）。血細(xì)胞檢測儀（美國雅培公司CELLDYN3700）。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模 50只大耳白兔隨機(jī)分為空白組、模型組、隔藥餅灸組、艾灸組及假藥餅灸組5組，每組10只。動物適應(yīng)性飼養(yǎng)10 d后，模型組、隔藥餅灸組、艾灸組及假藥餅灸組均腹部皮下注射環(huán)磷酰胺60 mg/kg（環(huán)磷酰胺用生理鹽水稀釋），連續(xù)注射7 d，每天上午進(jìn)行；空白組注射等量生理鹽水。

1.2.2 藥餅制作 將熟地黃、山萸肉、山藥、澤瀉、丹皮、茯苓（按組方劑量）打碎成粉末，過120目篩備用，臨用前以75%酒精調(diào)勻，用模具制成直徑1 cm、厚0.3 cm的藥餅；假藥餅制作方法與藥餅相同，其采用的原料是面粉。

1.2.3 穴位選擇 神闕、關(guān)元、足三里（雙）、脾俞（雙）、腎俞（雙）。穴位定位參照林文注主編《實驗針灸學(xué)》［1］常用動物穴位定位法及擬人比照法。

1.2.4 施灸方法 動物造模后穴位處剪毛，綁縛固定于兔臺。選用江蘇盱眙華佗中藥廠的艾絨，制成底徑0.8 cm、高0.5 cm相等大小的圓錐形艾柱，分別置于藥餅和假藥餅上，以線香點(diǎn)燃，燃盡更換，每穴連灸3壯，隔日灸，共灸10次；艾灸組選用盱眙華佗中藥廠的清艾條（批號：Z32020153），將自制艾灸架置于穴位上施灸，艾絨為3壯艾柱量，線香點(diǎn)燃，隔日灸，共灸10次。

1.3 樣品采集及指標(biāo)觀察

實驗結(jié)束后第2天，動物麻醉，腹腔靜脈采血，采用血細(xì)胞檢測儀觀察外周血細(xì)胞系列的變化。包括白細(xì)胞系列：白細(xì)胞（WBC）、嗜中性粒細(xì)胞百分比［NEU（%）］、淋巴細(xì)胞百分比［LYM（%）］、單核細(xì)胞百分比［MONO（%）］、嗜酸性粒細(xì)胞百分比［EOS（%）］、嗜堿性粒細(xì)胞百分比［BASO（%）］；紅細(xì)胞系列：紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析（one way-ANOVA）并進(jìn)行組間比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。全部數(shù)據(jù)輸入計算機(jī)用SAS8.2統(tǒng)計軟件，由統(tǒng)計專業(yè)人員進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

與空白組比較，模型組白細(xì)胞系列中WBC、NEU，紅細(xì)胞系列中RBC、HGB、HCT均明顯降低，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），LYM、MONO、EOS、BASO 4項指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

與模型組比較，隔藥餅灸組白細(xì)胞系列中WBC、NEU，紅細(xì)胞系列中RBC、HGB、HCT均明顯升高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；艾灸組RBC與模型組比較明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），其余8項指標(biāo)與模型組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；假藥餅灸組9項指標(biāo)與模型組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

3 討 論

已有大量實驗研究證明，環(huán)磷酰胺是烷化劑中最常用的一種免疫抑制劑，在實驗研究中利用其對動物機(jī)體的免疫功能和造血功能損害可制作免疫抑制模型［2-4］。采用CTX造模方法簡單易行，用量及時間均可靈活掌握，所以常用其來制造免疫功能低下實驗?zāi)Ｐ?。血?xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，由白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板組成，其中白細(xì)胞通常又被稱為免疫細(xì)胞，血液的免疫防御功能主要是靠白細(xì)胞實現(xiàn)，其數(shù)量及功能的變化反映免疫功能的強(qiáng)弱。此外，血液的運(yùn)輸功能主要是靠紅細(xì)胞來完成，紅細(xì)胞數(shù)量減少或質(zhì)量下降，會不同程度地影響血液運(yùn)輸功能，從而出現(xiàn)一系列病理變化。

灸法作為中國傳統(tǒng)預(yù)防保健的常用療法，可升高外周血細(xì)胞系列的數(shù)量，正向調(diào)節(jié)免疫功能低下或受抑狀態(tài)［5-6］，從而達(dá)到扶正祛邪目的。神闕穴與關(guān)元穴均為任脈之穴，可補(bǔ)腎固本、調(diào)理臟腑；足三里為足陽明胃經(jīng)主要穴位之一，常灸之可保健防病、延年益壽、增強(qiáng)體力等；脾俞、腎俞為脾腎兩臟氣血匯聚于腰背之背俞穴，灸其補(bǔ)益脾腎，兩穴通用可達(dá)滋陰補(bǔ)腎、健脾益氣之功。

有實驗研究表明，熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、丹皮六味藥有機(jī)結(jié)合對改善機(jī)體免疫功能具有一定的協(xié)同作用［7-8］。隔藥餅灸是將艾灸、藥物與穴位有機(jī)結(jié)合，通過艾灸的溫?zé)?，促進(jìn)皮膚對滋陰補(bǔ)腎藥物的吸收，經(jīng)經(jīng)絡(luò)傳輸從而發(fā)揮藥物歸經(jīng)之效能，達(dá)到提高機(jī)體免疫防御功能的作用。課題

表1 隔藥餅灸對免疫抑制兔血細(xì)胞系列的影響 （x±s）

組前期試驗也表明，隔藥餅灸對不同年齡人群、艾灸對亞健康人群的外周血細(xì)胞系列均有明顯的調(diào)節(jié)作用［9-10］。

本實驗結(jié)果表明，造模后WBC、NEU、RBC、HGB、HCT明顯低于空白組（P＜0.01），表明腹腔注射環(huán)磷酰胺造模成功。隔藥餅灸神闕、關(guān)元、足三里（雙）、脾俞（雙）、腎俞（雙）后，可明顯回升免疫抑制兔血細(xì)胞系列WBC、NEU、RBC、HGB、HCT的含量，與空白組比較差異不明顯，表明隔藥餅灸通過回升血細(xì)胞系列的數(shù)量達(dá)到提高免疫抑制兔的免疫功能。艾灸后免疫抑制兔RBC明顯升高，但與空白組相比仍存在明顯差異，說明艾灸對RBC有明顯回升作用，但作用不及隔藥餅灸；假藥餅灸組與模型組比較各項指標(biāo)無明顯差異，與空白組差異顯著，說明假藥餅灸治療效果不佳。艾灸組的作用不夠理想，可能與灸量或時間有關(guān)，本課題后期研究將進(jìn)行探討。

［1］林文注，王佩.實驗針灸學(xué)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1994：283-287.

［2］羅月蘋，王嫣，汪偉，等.環(huán)磷酰胺致新西蘭大白兔白細(xì)胞減少癥模型的建立［J］.激光雜志，2013，34（2）：77-78.

［3］壽旗揚(yáng)，應(yīng)華忠，周衛(wèi)民，等.兩種方法注射環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥模型的比較［J］.實驗動物與比較醫(yī)學(xué)，2008，28（4）：266-268.

［4］應(yīng)軍，肖百全，楊威，等.雞血藤與阿膠升白細(xì)胞作用的比較研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，22（2）：175-177.

［5］張敏，李旭廷，曾富強(qiáng)，等.當(dāng)歸補(bǔ)血湯對環(huán)磷酰胺所致家兔血細(xì)胞減少的影響［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2012，39（12）：19-23.

［6］鄭雪峰，聶焱，王志強(qiáng)，等.艾灸關(guān)元穴對化療后低白細(xì)胞模型大鼠外周血象影響的實驗研究［J］.湖北中醫(yī)雜志，2009，31（5）：5-6.

［7］曹建恒.六味地黃丸對2型糖尿病患者紅細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)作用的影響［J］.新中醫(yī)，2005，37（3）：45-46.

［8］宋宇，宋穎，段冷昕，等.六味地黃丸及其不同工藝提取物對小鼠免疫功能的影響［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2008，31（6）：385-388.

［9］董成林，田岳鳳，李雷勇，等.隔藥餅灸對不同年齡人群機(jī)體血細(xì)胞系列影響的比較［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，9（1）：58-60.

［10］陳猛，李雷勇，田岳鳳，等.艾灸對中青年亞健康狀態(tài)人群血細(xì)胞系列的干預(yù)作用［J］.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2014，15（1）：39-42.

（編輯：翟春濤）

Influence of different moxibustion on blood cells series in immunosuppressive rabbits

Wu Aihua1，Shan Zengtian1，Tian Yuefeng1，Li Leiyong2，Wang Jun1
（1.Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024；2.The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan Shanxi 030006）

Objective：To observe the influence of blood cells series in immunosuppressive rabbits treated with herbal cake-separated moxibustion，moxibustion and sham cake-separated moxibustion.Methods：50 rabbits were randomly divided into blank group，model group，herbal cake-separated moxibustion group，moxibustion group and sham cake-separated moxibustion group.Except the blank group，other groups were given intraperitoneal injection of cyclophosphamide（Cy）60 mg/kg in 7 consecutive days so as to set up the immunosuppressive model.Three treatment groups were treated every other day by herbal cake-separated moxibustion，moxibustion，sham cake-separated moxibustion respectively，a total of 10 times.Then abdominal vein blood was collected and blood cell series was detected after treatment.Results：Compared with the blank group，the WBC、NEU、RBC、HGB、HCT of model group were significantly decreased（P＜0.01）.Compared with model group，the WBC，RBC，HGB，HCT，NEU of herbal cake-separated moxibustion group were extremely significant increased（P＜0.01）.The RBC of moxibustion group was significantly higher than that of model gronp（P＜0.01）. Conclusion：Herbal cake-separated moxibustion has obvious effect on improving immunosuppressive state of rabbits induced by cyclophosphamide.

cyclophosphamide；immunosuppressive；herb cake-separated moxibustion；moxibustion；blood cells series

R332

A

1671-0258（2015）01-0019-03

國家自然科學(xué)基金面上項目（81373742）

吳愛花，在讀碩士，E-mail：170225989@qq.com

田岳鳳，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：tyfsx@163.com