某豬場(chǎng)3種重大疫病的抗體檢測(cè)分析

張振東，王紅巖，呂 林，胡東方，王 林，王愛國，劉思當(dāng)

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安，271000；2.勃林格殷格翰(中國)動(dòng)物保健，北京 100004）

某豬場(chǎng)3種重大疫病的抗體檢測(cè)分析

張振東1，王紅巖2，呂 林1，胡東方1，王 林2，王愛國2，劉思當(dāng)*

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安，271000；2.勃林格殷格翰(中國)動(dòng)物保健，北京 100004）

為評(píng)估某豬場(chǎng)豬瘟、藍(lán)耳病及偽狂犬病三大疫病的免疫狀況及感染狀態(tài)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在風(fēng)險(xiǎn)，為重大疫病的預(yù)警防控提供理論依據(jù)，應(yīng)用中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所豬瘟病毒抗體間接ELISA檢測(cè)試劑盒、IDEXX與法國LSI藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒以及SVANOVIR偽狂犬野毒抗體檢測(cè)試劑盒，對(duì)采自某豬場(chǎng)各階段豬只的50份血清進(jìn)行了抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，該豬場(chǎng)豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬gE抗體總體陽性率分別為92.0%、38.0%(IDEXX)、90.0%(LSI)和42.0%；豬瘟抗體陽性率很高但整體抗體滴度較低且離散度較大，免疫效果一般；2種藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)結(jié)果在一定程度上具有一致性，指示生長育肥豬藍(lán)耳病病毒的感染壓力較大；種豬群偽狂犬gE抗體的陽性率偏高，說明該場(chǎng)偽狂犬野毒感染情況嚴(yán)重。通過對(duì)抗體的監(jiān)測(cè)及其結(jié)果的科學(xué)分析，能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)豬場(chǎng)存在的問題，以便針對(duì)性地采取防控措施，指導(dǎo)養(yǎng)豬生產(chǎn)。

抗體檢測(cè)；免疫程序；豬病防控

養(yǎng)豬是高風(fēng)險(xiǎn)的行業(yè)，產(chǎn)能嚴(yán)重過剩，疾病防控難度以及食品質(zhì)量安全壓力日益增大，疫病因素成為制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。近段時(shí)間以來豬場(chǎng)許多疾病尤其是豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬病等重大疫病進(jìn)入發(fā)病活躍期，主要表現(xiàn)母豬的繁殖障礙綜合征、保育后期豬只的呼吸道疾病綜合征、新生仔豬神經(jīng)癥狀以及流行性腹瀉。通過抗體檢測(cè)，了解豬場(chǎng)免疫水平或感染狀態(tài)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫病風(fēng)險(xiǎn)，為重大疫病的預(yù)警、防控提供理論依據(jù)，更好地指導(dǎo)養(yǎng)豬生產(chǎn)，把豬養(yǎng)好，在低迷的行情中保證豬場(chǎng)的健康平穩(wěn)持續(xù)發(fā)展。

1??材料與方法

1.1??材料

1.1.1??樣品信息該豬場(chǎng)為山東某規(guī)?；i場(chǎng)，存欄經(jīng)產(chǎn)母豬856頭，2014年4月2日采集血樣50份進(jìn)行送檢，樣品信息情況見表1。

1.1.2??主要試劑及儀器中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所豬瘟病毒（CSFV）間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、IDEXX與法國LSI藍(lán)耳病病毒(PRRSV)抗體檢測(cè)試劑盒以及SVANOVIR豬偽狂犬病毒gE(PRVgE)抗體檢測(cè)試劑盒，Eppendorf移液器、酶標(biāo)儀。

1.2??方法

1.2.1??檢測(cè)方法嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒的說明書進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.2.2??結(jié)果判定1）CSFV：IE值≥10.0%為陽性，阻斷率≤8.0%為陰性，兩者之間為可疑；2）PRRSV(IDEXX)：S/P值≥0.4為陽性，S/P值＜0.4為 陰 性；3）PRRSV(LSI)：IRPC＞20.0為陽性，IRPC≤20.0為陰性；4）PRVgE（SVANOVIR）：ODp＞60.0%為陰性，ODp≤50.0%為陽性，之間為可疑。

2??結(jié)果與分析

2.1??抗體檢測(cè)結(jié)果匯總

經(jīng)檢測(cè)，豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬gE抗體總體陽性率分別為92.0%、38.0%(IDEXX)、90.0%(LSI)和42.0%。匯總結(jié)果見表1。

2.2??豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所豬瘟病毒抗體間接ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)對(duì)象為豬瘟病毒E2蛋白多克隆抗體，能精確反映血清中的抗體水平，并可對(duì)不同抗體水平的血清進(jìn)行區(qū)分。該場(chǎng)種豬群豬瘟抗體陽性率為100.0%，商品豬為88.0%，總體陽性率為92.0%，符合我國農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病強(qiáng)制免疫計(jì)劃70.0%的合格率，但是豬群的整體抗體高度較低且各階段豬只離散度較大（17.5%～70.3%），說明豬群豬瘟的整體免疫效果一般。核心種母豬群各胎次段豬瘟抗體離散度在17.5%～70.3%之間，后備母豬與3～4胎母豬抗體水平相對(duì)均勻，但3～4胎母豬IE值相對(duì)偏低；結(jié)合該場(chǎng)仔豬豬瘟疫苗的免疫程序（30日齡首免，60日齡二免）可知，3～10周齡的變化曲線屬于正?，F(xiàn)象；12～14和18～20周齡豬瘟抗體變化曲線降低可能與藍(lán)耳病病毒感染引起的免疫抑制有關(guān)（根據(jù)本次檢測(cè)結(jié)果），當(dāng)然也不能排除其他因素的影響。檢測(cè)結(jié)果及變化情況見表3、圖1。

表1??樣品信息匯總

表2?抗體檢測(cè)結(jié)果匯總表

2.3??藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

IDEXX藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒以藍(lán)耳病病毒的核衣殼蛋白（N蛋白）為包被抗原，N蛋白不能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生對(duì)抗病毒的中和抗體，不適用于對(duì)疫苗免疫效果的監(jiān)測(cè)，但是能夠在一定程度上判斷豬只藍(lán)耳病病毒的免疫或感染狀態(tài)，且因其保守性好、敏感性高、結(jié)果重復(fù)性好，而被廣泛應(yīng)用；法國LSI藍(lán)耳病抗體檢測(cè)試劑盒以膜蛋白為包被抗原，該蛋白參與中和抗體的產(chǎn)生，因此既可以檢測(cè)野毒感染狀況又可以反映疫苗抗體情況。該場(chǎng)未進(jìn)行藍(lán)耳病疫苗的免疫，因此，通過本次抗體檢測(cè)可知：

圖1 豬瘟抗體檢測(cè)情況

IDEXX：母豬群1～8胎的抗體陽性率僅為26.7%（4/15）且S/P值并不高，說明母豬群整體可能處于無藍(lán)耳病病毒感染壓力或趨于藍(lán)耳病凈化狀況；母豬群中低胎次經(jīng)產(chǎn)母豬尤其是1～2胎及后備母豬的抗體陽性率高且S/P值偏高，說明母豬群有藍(lán)耳病病毒的感染且該病毒可能處于活躍狀態(tài)，生產(chǎn)中應(yīng)注意加強(qiáng)對(duì)即將進(jìn)入基礎(chǔ)群的后備豬進(jìn)行隔離和馴化，以免因后備豬尤其是外來后備豬的并群而引起母豬群藍(lán)耳病的活躍甚至暴發(fā)；公豬群整體陽性率為28.6%（2/7），基本無藍(lán)耳病感染壓力，但1頭祖代公豬的S/P值較高，可考慮將其淘汰；保育仔豬3～10周齡藍(lán)耳病抗體S/P值幾乎都為陰性，說明仔豬在保育后期之前沒有藍(lán)耳病野毒循環(huán)感染，也可知N蛋白抗體維持時(shí)間較短，從藍(lán)耳病角度來看，豬群處于高度健康狀況；生長育肥階段豬只藍(lán)耳病抗體較高，說明藍(lán)耳病感染壓力較大，可能引起一定程度的或嚴(yán)重的呼吸道癥狀和繼發(fā)感染；仔豬下床后藍(lán)耳病抗體急速上升，說明仔豬下床前后是藍(lán)耳病循環(huán)感染時(shí)期且感染壓力較大。

LSI：藍(lán)耳病抗體整體陽性率為90.0%，核心種豬群均為100.0%，說明本場(chǎng)通過自然的馴化和感染，種豬群豬只均產(chǎn)生了藍(lán)耳病病毒的中和抗體，具備了一定的抵抗力；3～4、5～7與8～10周齡豬只陽性率分別為100.0%、80.0%和40.0%，說明中和抗體維持時(shí)間較N蛋白長、母源抗體逐漸下降，變化曲線屬于正?，F(xiàn)象；12～14與18～20周齡豬只抗體反而又突然上升，說明在保育后期階段存在藍(lán)耳病野毒的感染。2種檢測(cè)試劑盒具有一致性。檢測(cè)結(jié)果及變化圖表見表4、圖2、圖3。

2.4???豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測(cè)結(jié)果及分析

經(jīng)SVANOVIR豬偽狂犬病病毒gE(PRVgE)抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，公豬、母豬及商品豬抗體陽性率分別為 71.4%（5/7）、50.0%（9/18） 和28.0%（7/25），公豬及母豬群野毒抗體陽性率高，說明曾經(jīng)或最近感染過偽狂犬病野毒；3～7周齡陽性率為70%、8～20周齡陽性率為0，從生豬gE值變化曲線一直處于上升可知，整個(gè)生長期間（初生--出欄）沒有感染偽狂犬病野毒，而仔豬3～7周齡gE值處于陽性階段是母源抗體所為，不是偽狂犬病野毒感染造成的，8周之后豬只gE抗體全為陰性，也說明偽狂犬病母源抗體可能僅維持7周左右。檢測(cè)結(jié)果及變化見表5、圖4。

2.5???檢測(cè)結(jié)果分析總結(jié)及處理意見

通過本次抗體檢測(cè)以及檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)整理分析，發(fā)現(xiàn)該豬場(chǎng)存在以下4個(gè)問題：第一，種豬群偽狂犬病野毒感染嚴(yán)重（56.0%），仔豬母源抗體維持時(shí)間短；第二，保育后期豬只藍(lán)耳病感染壓力較大，在一定程度上可能隨時(shí)出現(xiàn)所謂“高熱病”的風(fēng)險(xiǎn)；第三，低胎次尤其是1胎及后備母豬藍(lán)耳病抗體S/P值偏高，可能存在藍(lán)耳病帶毒或處于感染狀態(tài)；第四，豬瘟抗體滴度整體偏低且離散度較大，豬瘟疫苗免疫效果一般。

表3??豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

表4??藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果?

圖2 藍(lán)耳病抗體檢測(cè)情況（IDEXX）

圖3 藍(lán)耳病抗體檢測(cè)情況（LSI）

表5?偽狂犬gE抗體檢測(cè)結(jié)果??

圖4 偽狂犬gE抗體檢測(cè)情況

針對(duì)所發(fā)現(xiàn)的問題，建議采取下列措施：第一，暫停偽狂犬病gE抗體陽性種公豬精液的使用，特別加強(qiáng)做好種豬群偽狂犬病疫苗的免疫工作，通過疫苗的逐漸馴化，達(dá)到“陽轉(zhuǎn)陰”的目的；第二，建議商品豬在45日齡左右二免偽狂犬病疫苗，降低7周齡后無母源抗體保護(hù)情況下中大豬發(fā)生偽狂犬病的機(jī)率；第三，加強(qiáng)留種或引種時(shí)的帶毒檢測(cè)并做好相關(guān)疫病抗體的監(jiān)測(cè)工作，并在后備豬進(jìn)入基礎(chǔ)母豬群前對(duì)其進(jìn)行科學(xué)的隔離和馴化；第四，從預(yù)防角度建議考慮藍(lán)耳病疫苗的免疫，可在7～14日齡免疫藍(lán)耳病疫苗，并在呼吸系統(tǒng)疾病高發(fā)的保育期加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和進(jìn)行適當(dāng)?shù)乃幬镱A(yù)防；第五，重視豬瘟疫苗的免疫工作，避免因疫苗運(yùn)輸、稀釋、不及時(shí)使用以及免疫不當(dāng)而導(dǎo)致免疫失敗的低級(jí)錯(cuò)誤；第六，保證豬場(chǎng)的全進(jìn)全出，做好豬場(chǎng)的生物安全防護(hù)。

3??結(jié)語

在豬場(chǎng)疾病防控風(fēng)險(xiǎn)逐漸增大的時(shí)代，豬場(chǎng)常見疫病的抗體檢測(cè)并不只是集團(tuán)化規(guī)模豬場(chǎng)的“特權(quán)”，中小規(guī)模場(chǎng)尤其是重大疫病不穩(wěn)定的豬場(chǎng)更應(yīng)該重視豬場(chǎng)疫病的檢查和監(jiān)測(cè)，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的、能夠反映豬群實(shí)際狀況的采血方案，采血后進(jìn)行重大疫病抗體的檢測(cè)并對(duì)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的分析，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)并科學(xué)處理豬群中潛在的疫病風(fēng)險(xiǎn)，提高豬群的健康狀況，將豬病尤其是重大疫病扼殺在搖籃之中，使豬場(chǎng)健康可持續(xù)發(fā)展。

2014-04-23）

張振東,男，山東濰坊青州人，在讀碩士研究生，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，研究方向?yàn)閯?dòng)物臨床病理學(xué)。通訊作者:劉思當(dāng)，教授.E-mail:liusid@sdau.edu.cn