野生藥用植物紅茂草生物堿化學成分的研究

趙 強，索有瑞，王廷璞

（1.天水師范學院 生物工程與技術學院，甘肅 天水 740001；2.中國科學院 西北高原生物研究所，青海 西寧 810008）

紅茂草[Dicranostigma leptodum(maxim.)Fedde，DLF]又名禿瘡花、禿子花、勒馬回（陜西），為罌粟科禿瘡花屬植物，通常為兩年或多年生草本。19世紀后期，俄國植物學家C.J.Maximwicz根據(jù)1876年Potaini采自甘肅的標本，發(fā)表為Glaucum leptopodumMaxim.，并結合1909年德國植物學家F.Fedde的姓名，組合成為Dicranostigma leptopodum(Maxim.)Fedde.該植物生長于海拔400～2900（～3700）m的丘陵、草坡、路旁、田埂、墻頭、屋頂?shù)忍?，耐旱、耐瘠薄，有一定的抗逆性。[1]主要分布于我國青海東南部、甘肅南部至東南部、陜西秦嶺北坡至西南，在山西南部、河北西南部、河南西北部、云南西北部、四川西部和西藏南部有零星分布。因其盛花期蒴果成熟后，植株莖端呈暗紅色，故甘陜地區(qū)稱其為紅茂草。該草味苦、澀、性涼，民間全草入藥，能清熱解毒、消腫止痛、殺蟲，治療扁桃腺炎、咽喉痛、淋巴結核、禿疤、疥癬等癥。[1-3]

從20世紀80年代開始，對紅茂草藥理作用的研究一直沒有間斷，但對其主要生物堿化學成分的分離和鑒定卻報道不多。本實驗從紅茂草主要生物堿的提取、分離及鑒定入手，利用Al2O3柱層析用對紅茂草主要生物堿進行柱色譜分離，以TLC法檢測，合并流份、濃縮純化，并利用超導核磁共振等技術鑒定其化合物的結構，以期為野生藥用植物紅茂草的進一步深入研究提供了實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材

紅茂草（采自甘肅省天水市秦州區(qū)北山自然生長的紅茂草，天水師范學院王廷璞研究員鑒定。自然干燥、粉碎、過篩。）

1.1.2 儀器與試劑

RE52-99型旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；UV-9200型紫外可見光分光光度計（北京瑞利儀器分析有限公司）；SGWX-4型顯微熔點儀（上海精密科學儀器有限公司）；Lambda 35型紫外可見光光度計（Perkin Elmer Precisely產品）；Spectrum one B型傅立葉變換紅外光譜儀（Perkin Elmer Precisely產品）；核磁1D NMR和2D NMR：Varian INOVA-400MHz核磁共振儀，溶劑為CDCl3或DMSO-d6；質譜 ESI-MS：Bruker APEX II；341 型旋光儀；AB104-S型電子分析天平、紫外燈等。

異紫堇堿標準品（ABCR GmbH&CO.KG(Germany)，批號：166401，規(guī)格：10mg），紫堇堿標準品 （ABCR GmbH&CO.KG(Germany)， 批 號 ：260599，規(guī)格：10mg）、原阿片堿標準品（Shanghai tautd biotech CO.LTD(China)，批號：E-0411，規(guī)格：10mg），白屈菜堿標準品（Pure-one Bio Technology，CO.LTD(China)，批號：060306，規(guī)格：20mg）、95%乙醇、無水乙醇、冰乙酸、氨水、層析用Al2O3（200～300目）、薄層色譜硅膠G、CMC-Na、氯仿、甲醇、氨水、三乙胺、NaOH、鹽酸、三重蒸餾水等，其余試劑均為國產或進口分析純。

1.2 方法

準確稱取紅茂草干草粉末500g，置于3000mL錐形瓶中，加入400mL 95%乙醇，振蕩搖勻，封口浸泡2～3d.超聲波振蕩1h后，減壓、濃縮，得浸膏18g.將浸膏紗布包裹，懸于水溶液中，加2%NaOH，調至pH在9～10，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得提取部分A.水溶液加入稀鹽酸，調至pH=6，用氯仿萃取，萃取液減壓濃縮，得提取部分B.層析用Al2O3干法裝柱，氯仿-甲醇-三乙胺（8︰1︰0.5）為洗脫劑對A部分提取物進行梯度洗脫，收集不同時間段的流份，以95%乙醇︰冰乙酸︰水︰氨水（3︰0.1︰0.5︰0.1）展開劑，在硅膠G薄板上點樣，紫外燈下觀察，合并Rf值相同流份，依次濃縮，得化合物Ⅰ（3.02mg）和Ⅱ（0.91mg）。同理，逐漸加大洗脫劑中氯仿的比例，得化合物Ⅲ（0.83mg）。依上法，用無水乙醇-氯仿-氨水（1︰1︰0.1）為洗脫劑，對B部分提取物進行洗脫，經處理濃縮的化合物Ⅳ（0.46mg）。

圖1 紅茂草生物堿分離路線

2 結果與分析

化合物Ⅰ：無色柱狀結晶，mp：170～185℃;ESI-MS：m/z342[M+H]+;[ɑ]+195.4°(MeOH);UV(MeOH)304，267，220nm，IR(KBr)3689，3558，3467，3150，2926，2910，2840，1765，1384cm-1;1H-NMR(400 MHz，CDCl3) δ：8.90(1H，s)，6.82(1H，d，J=8.0 Hz)，6.79(1H，d，J=8.0 Hz)，6.67(1H，s)，3.91(3H，s)，3.88(3H，s)，3.67(3H，s)，3.11(1H，dd，J=16.4，3.6 Hz)，3.00(2H，s)，2.82(1H，s)，2.67(1H，dd，J=16.4，3.6 Hz)，2.52(3H，s)，2.49(3H，s)，2.43(2H，s);13C-NMR(100 MHz，CDCl3) δ：151.2，149.4，143.9，142.0，141.7，129.9，129.2，125.8，120.1，118.9，111.0，110.8，62.8，62.0，55.8，55.4，52.7，43.9，35.9，29.3.以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致，[4-5]經鑒定該化合物為異紫堇堿（C20H23NO4）。

化合物Ⅱ：白色針狀結晶，mp：135～148℃;ESI-MS：m/z370[M+H]+;[ɑ]+216°(EtOH);UV(MeOH)282，205nm;IR(KBr)3481，3413，2494，1777，1763，1696，1637，1440，1227，854cm-1;1H-NMR(400 MHz，CDCl3) δ：6.98(1H，d，J=8.0 Hz)，6.95(1H，s)，6.91(1H，d，J=8.2Hz)，6.88(1H，d，J=8.0Hz)，6.69(1H，s)，6.61(1H，s)，4.20(1H，d)，3.85(3H，s)，3.79(3H，s)，3.69(1H，dd，J=16.4，3.6 Hz)，3.64(3H，s)，3.16(1H，s)，3.15(3H，s)，3.11(1H，dd，J=16.4，3.6 Hz)，3.00(2H，s)，2.62(2H，s)，0.95(3H，dd，J=6.9 Hz);13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：152.4，148.7，147.8，144.0，143.7，128.5，126.9，126.2，124.7，122.9，118.9，118.8，111.6，111.4，62.0，61.6，61.2，55.9，51.2，43.4，31.7，25.5，18.4。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致，[6-7]經鑒定該化合物為紫堇堿（C22H27NO4）。

化合物Ⅲ：白色柱狀結晶，mp：207～210℃;ESI-MS：m/z354[M+H]+;[ɑ]+284.9°(MeOH)，UV(MeOH)：290nm;IR(KBr)2776，1667，1658，1492，1265，1047，943，717 cm-1;1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.94(1H，s)，6.93(1H，s)，6.89(1H，d，J=8.4，Hz)，6.77(1H，d，=8.4 Hz)，6.61(1H，s)，5.92(2H，s)，3.83(3H，s)，3.76(3H，s)，3.60(2H，s)，3.46～3.32(2H，m)，3.45～2.78(2H，m)，1.96(3H，s)，1.86(3H，s);13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：192.8，151.5，148.0，147.3，146.1，135.7，132.6，129.3，128.4，127.6，117.9，110.6，110.3，109.2，108.1，101.2，60.7，57.4，55.6，50.3，46.0，41.2，32.2.以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致，[8]經鑒定該化合物為原阿片堿（C20H19NO5）。

化合物Ⅳ：淡黃色粉末，mp：133～136℃;ESI-MS：m/z354[M+H]+;[ɑ]+119°(EtOH);UV(MeOH)：345，310，280，272，220nm;IR(KBr)3620，2910，1625，1585，1450，1280，1105cm-1;1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.76(1H，d，J=7.9Hz)，6.73(1H，d，J=7.9Hz)，6.66(1H，s)，6.64(1H，s)，5.99(1H，d，J=1.5Hz)，5.95(1H，d，J=1.3Hz)，5.93(1H，d，J=1.5Hz)，5.92(1H，d，J=1.5Hz)，4.23(1H，brs)，4.08(1H，d，J=15.7Hz)，3.57(1H，brs)，3.43(1H，d，J=15.7Hz)，3.21(1H，d，J=17.5Hz)，3.08(1H，dd，J=17.5，4.3Hz)，2.98(1H，t，J=2.8Hz)，2.27(3H，s);13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ：145.6，145.3，143.2，143.1，131.4，128.9，125.8，120.4，111.9，117.1，109.6，107.4，101.4，101.1，72.4，62.9，53.9，42.4，42.1，39.7.以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致，[9]經鑒定該化合物為白屈菜堿（C20H19NO5）。

圖2 化合物結構

3 結 論

我國西北地區(qū)野生藥用植物紅茂草化學成分研究已經開展了十多年，由于其有明顯的生物活性作用，近年來又相繼發(fā)現(xiàn)有新的藥理學作用，因此對紅茂草生物堿化學成分及藥效物質研究又引起了新的關注。[10-14]在研究紅茂草生物堿成分的過程中，采用柱色譜分離和超導核磁共振等技術，共分離鑒定得到4種主要生物堿成分，分別鑒定為異紫堇堿、紫堇堿、原阿片堿和白屈菜堿。其中異紫堇堿含量最高，白屈菜堿為首次從該屬植物中分離得到。通過對野生藥用植物紅茂草中4種主要生物堿化學成分的研究，可以更好地開發(fā)和利用其藥物資源，為其有效部位質量標準的建立和藥理作用的深層次研究，奠定很好的理論基礎。

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