高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)飼料中6種農(nóng)藥殘留

何叢薇 ， 李亞麗 ， 高文惠 *

（1.河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北石家莊 050018；2.河北省發(fā)酵工程技術(shù)研究中心，河北石家莊 050018）

三唑類殺菌劑為分子結(jié)構(gòu)式上帶有三唑環(huán)的高效殺菌劑，其具有良好的適用性和殺滅效果，主要通過(guò)抑制病原體細(xì)胞膜來(lái)達(dá)到殺菌的效果。目前被廣泛地應(yīng)用于蔬菜、水果、糧谷等病蟲(chóng)害的防治（胡艷云等，2014；高文惠等，2013）。菊酯類農(nóng)藥是目前廣泛應(yīng)用的一類殺蟲(chóng)劑，具有高效、低毒等特點(diǎn)。三嗪類殺菌劑是一類能夠抑制植物進(jìn)行光合作用的高效除草劑，可能引起人類癌癥及先天性缺陷，同時(shí)能干擾激素的正常功能（王曉春等，2011）。隨著三唑類、菊酯類、三嗪類殺菌劑長(zhǎng)期、大量使用，危害愈發(fā)凸顯，因此引起了人們的高度關(guān)注。

三唑類、菊酯類、三嗪類殺蟲(chóng)劑殘留量常用的檢測(cè)方法有固相萃取-高效液相色譜法、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、固相萃取-氣相色譜法等（胡靜等，2012；黃超群，2011）?，F(xiàn)今社會(huì)，食品安全問(wèn)題倍受關(guān)注，單一檢測(cè)某一種農(nóng)藥殘留已經(jīng)不能滿足各行業(yè)的要求，因此建立高效、快速、靈敏，同時(shí)測(cè)定多種農(nóng)藥殘留的方法尤為重要。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法同時(shí)分離檢測(cè)飼料樣品中三唑類 （戊唑醇、烯唑醇）、菊酯類（胺菊酯、三氟氯氰菊酯）、三嗪類（西瑪津、特丁津）等常用農(nóng)藥的殘留，為飼料中農(nóng)殘的監(jiān)測(cè)提供快速、可靠的分離檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 LC-20A高效液相色譜儀 （日本島津公司）；SHZ-82A型恒溫水浴振蕩器 （國(guó)華企業(yè)）；EVOLUTION 220紫外檢測(cè)器（THERMO，USA）；LD5-2A低速離心機(jī) （北京雷勃爾離心機(jī)有限公司）；KH5200型超聲波清洗器 （昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；SZ-93自動(dòng)雙純水蒸餾器（上海亞容生化儀器廠）。

1.1.2 試劑 甲醇、乙腈，均為色譜純，天津市康科德科技有限公司。

標(biāo)準(zhǔn)品：戊唑醇（98%）、烯唑醇（98%），均為北京金寶在線科技有限公司；胺菊酯（97%）、三氟氯氰菊酯（96%），均為濟(jì)寧天盛化工有限公司；西瑪津（99%）、特丁津（98%），均為浙江省長(zhǎng)興縣中山化工有限公司。

標(biāo)準(zhǔn)液的配制：分別準(zhǔn)確稱取6種標(biāo)準(zhǔn)品各150 mg，用甲醇溶解后分別定容于100 mL容量瓶中，使用時(shí)根據(jù)需要用乙腈稀釋。

樣品：雞飼料、豬飼料、牛飼料，均為市售。

1.2 樣品處理 準(zhǔn)確稱取10.00 g飼料樣品，用20 mL甲醇提?。ㄌ崛纱?，每次 10 mL），超聲20 min后，10000 r/min離心10 min，合并2次上清液，濃縮，用甲醇定容至10 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，待上機(jī)測(cè)定。

1.3 色譜條件 色譜柱Promosil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；進(jìn)樣量：20 μL；流動(dòng)相：甲醇-水（90∶10，V/V）；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)范圍：210 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 6種農(nóng)藥的紫外光譜掃描圖見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，6種農(nóng)藥的最大吸收波長(zhǎng)為204～220 nm，綜合考慮各物質(zhì)及流動(dòng)相溶劑的紫外吸收情況，檢測(cè)波長(zhǎng)選定為210 nm。

圖1 6種農(nóng)藥的紫外光譜掃描圖

2.2 分離條件的選擇 分離條件對(duì)樣品的分離效果和分析時(shí)間有很大影響，因此實(shí)驗(yàn)對(duì)6種農(nóng)藥的分離條件進(jìn)行了優(yōu)化。當(dāng)以100%甲醇作為流動(dòng)相時(shí)，6種農(nóng)藥不能實(shí)現(xiàn)良好的分離，于是考慮向流動(dòng)相中加入水。隨著甲醇的減少，色譜峰逐漸分開(kāi)，當(dāng)甲醇∶水=95∶5（V/V）時(shí)，6 種農(nóng)藥仍不能完全分離，即特丁津和戊唑醇色譜峰、烯唑醇和胺菊酯色譜峰不能分開(kāi)，如圖2a所示。于是，繼續(xù)減少甲醇的比例，當(dāng)甲醇-水體積比為90∶10時(shí)，6種農(nóng)藥可實(shí)現(xiàn)完全分離，且分析時(shí)間短（圖2c）。而當(dāng)甲醇-水體積比為85∶15時(shí)，雖然6種農(nóng)藥可實(shí)現(xiàn)完全分離，但是分析時(shí)間大大增長(zhǎng)（圖2b）。因此，選用甲醇-水體積比為90∶10。由圖2c看出，各種物質(zhì)色譜峰尖銳對(duì)稱，分離效果好，分析速度快。

圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的分離色譜圖

2.3 線性關(guān)系和檢測(cè)限 將6種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液配制成濃度為0.01～100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，在1.3的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以峰面積對(duì)濃度作圖，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，6種農(nóng)藥有良好的線性相關(guān)性，其線性相關(guān)系數(shù)為0.9992～0.9999，檢測(cè)限為0.5～20 ng/mL。

表1 6種農(nóng)藥的線性關(guān)系及檢測(cè)限

2.4 樣品測(cè)定 飼料樣品按照1.2中樣品處理方法處理，在1.3色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)中測(cè)定的飼料樣品未檢出該6種農(nóng)藥，圖3是典型雞飼料樣品和牛飼料樣品的色譜分離圖。

圖3 飼料樣品色譜分離圖

2.5 加標(biāo)回收率及精密度實(shí)驗(yàn) 對(duì)雞飼料、牛飼料、豬飼料樣品進(jìn)行低水平和高水平的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，樣品中6種農(nóng)藥的平均回收率為87.3%～104.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.35% ～3.62%（n=5）。

表2 樣品加標(biāo)回收率和精密度（n=5） %

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法同時(shí)快速分離檢測(cè)飼料中西瑪津、特丁津、戊唑醇、烯唑醇、胺菊酯、三氟氯氰菊酯6種農(nóng)藥殘留的分析方法，該方法簡(jiǎn)便、快速，可用于飼料及其他樣品中多種農(nóng)藥的檢測(cè)。在最佳條件下6種農(nóng)藥在7 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了基線分離，其線性相關(guān)系數(shù)為0.9992～0.9999，檢測(cè)限為0.5～20 ng/mL。樣品加標(biāo)平均回收率（AR）為 87.3% ～ 104.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.35% ～ 3.62%（n=5）。

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