酰化茶多酚的大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)研究

林梁鵬，李大偉，張士康， 朱躍進(jìn)*，何普明

（1.中華全國(guó)供銷合作總社杭州茶葉研究院，浙江杭州 310016；2.浙江大學(xué)茶學(xué)系，浙江杭州 310058；3.浙江省茶資源跨界應(yīng)用技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州 310016）

茶多酚（Tea Polyphenols）是茶葉中最主要的生物活性成分之一，因其具有抗氧化、抗癌、抗病毒、抗輻射、降血糖、降血壓等功能而被廣泛應(yīng)用[1-8]。茶多酚已作為一種天然抗氧化劑應(yīng)用于食品等各個(gè)領(lǐng)域，但其水溶性的特點(diǎn)限制了其在油脂體系中的應(yīng)用[9]。?；瓒喾邮歉呒兌炔瓒喾咏?jīng)過改性后的產(chǎn)品，是在茶多酚分子結(jié)構(gòu)上經(jīng)修飾加入親油基團(tuán)。?；瓒喾幽苡行У厝苡谟椭w系中，且有研究表明其仍具有較好的抗氧化活性[10-13]。本研究團(tuán)隊(duì)已對(duì)該?；瓒喾拥募毙远拘约斑z傳毒性進(jìn)行了研究，現(xiàn)通過對(duì)?；瓒喾游桂B(yǎng)大鼠30 d 試驗(yàn)進(jìn)行觀察，了解其短期毒副作用，為其作為食品抗氧化劑等的安全性提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

酰化茶多酚（自制，采用化學(xué)?；╗14～15]），淡棕色粉，其制備為茶多酚 （多酚＞95%，EGCG＞38%）與硬脂酸酰氯（＞95%）在最優(yōu)條件下合成?；瓒喾?，其多酚含量為93.38%。試驗(yàn)時(shí)樣品按劑量拌入大鼠基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)飼料中。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)SD 大鼠由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為 SCXK （浙）2008-0033）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB 14924.1-2001。檢測(cè)環(huán)境條件為環(huán)境溫度20～24℃，相對(duì)濕度50%～70%。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)前在動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)3 d。

1.3 劑量與方法

參照衛(wèi)生部GB 15193-2003 及相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行[16～19]。選用健康、成熟的SD 大鼠80 只，體重為90～110 g，隨機(jī)分為 4組，每組20 只，雌雄各半。?；瓒喾拥?、中、高3個(gè)劑量組樣品按飼料配比10、20、40 g/kg 拌入基礎(chǔ)飼料中，以喂養(yǎng)方式給予。連續(xù)喂養(yǎng)30 d，自由攝食飲水，并記錄大鼠進(jìn)食量，每周稱重一次，并計(jì)算食物利用率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大鼠過夜禁食16 h后取血，進(jìn)行血常規(guī)和血生化檢測(cè)。靜脈取血進(jìn)行血常規(guī)檢查，指標(biāo)包括：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類等。斷頭取血進(jìn)行血生化檢查，指標(biāo)包括：總蛋白、白蛋白、尿素氮、肌酐、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、膽固醇、甘油三酯和葡萄糖。對(duì)每只大鼠進(jìn)行臟器大體解剖觀察。取肝、腎、脾、睪丸（卵巢）稱重并計(jì)算臟體比，留取肝、腎、脾、睪丸或卵巢等臟器切片，H-E 染色進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠的一般狀況

實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠無異常癥狀和體征，亦無死亡。動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育良好，飲食飲水未見明顯異常。

2.2 對(duì)大鼠每周體重的影響

?；瓒喾痈鲃┝拷M對(duì)大鼠每周的體重與雌雄各自的對(duì)照組比較無顯著性差異 （P＞0.05），如圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，?；瓒喾訉?duì)大鼠每周的體重?zé)o明顯影響，雌雄大鼠之間的體重差異是雌雄大鼠正常生長(zhǎng)發(fā)育的結(jié)果。

圖1 ?；瓒喾訉?duì)大鼠每周體重變化的影響（±S，n=10）Fig.1 Effect of acylated tea polyphenols on body weight of rats every week

2.3 對(duì)大鼠增重、進(jìn)食量及總食物利用率的影響

?；瓒喾痈鲃┝拷M大鼠的增重、總進(jìn)食量及食物利用率與各自性別的陰性對(duì)照組大鼠相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），從而表明其對(duì)雌雄兩性大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育沒有明顯的影響，結(jié)果見表1。

表1 ?；瓒喾訉?duì)大鼠總食物利用率的影響（±S，n=10）Table 1 Effect of acylated tea polyphenols on food utilization ratio in rats

表1 ?；瓒喾訉?duì)大鼠總食物利用率的影響（±S，n=10）Table 1 Effect of acylated tea polyphenols on food utilization ratio in rats

性別Sex 劑量（g/kg）Dosage 實(shí)驗(yàn)增重（g）Increase weight 進(jìn)食量（g）Food intake amount 總食物利用率（%）Food utilization ratio雄雌陰性對(duì)照 175.89±13.08567.80±36.6631.03±2.28低173.33±10.78551.51±6.2531.44±2.46中173.85±16.45582.56±10.6929.86±3.12高168.51±18.22574.71±28.3829.33±2.53陰性對(duì)照 91.33±9.16474.98±9.0819.20±1.99低101.42±10.39476.96±9.0421.22±2.10中103.18±9.69479.31±6.3621.53±2.47高100.82±11.29483.37±6.7120.85±2.17

2.4 對(duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響

?；瓒喾訉?duì)大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響如表2所示。?；瓒喾游桂B(yǎng)大鼠30 d后，雌雄各劑量組的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類等各項(xiàng)指標(biāo)均在正常值范圍之內(nèi)。而雄性低劑量組的平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度與對(duì)照組相比有顯著性差異（P＜0.05），但其值在正常值范圍內(nèi)，因此無生物學(xué)意義。?；瓒喾痈鲃┝拷M血常規(guī)其他各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。

表2 酰化茶多酚對(duì)大鼠血常規(guī)的影響（±S，n=10）Table 2 Effect of acylated tea polyphenols on hemogram index of rats

表2 酰化茶多酚對(duì)大鼠血常規(guī)的影響（±S，n=10）Table 2 Effect of acylated tea polyphenols on hemogram index of rats

注：與同性別的對(duì)照組比較有顯著性差異，*P＜0.05。Note:Comparison with negative control,*P＜0.05.

性別Sex單核細(xì)胞百分比（%）MON雄 陰性對(duì)照 7.8±0.37151.6±8.145.4±2.059.3±1.120.30±0.5341.2±3.33.6±0.6313.9±2.081.9±2.12.2±0.80低 7.3±0.46141.8±9.043.0±1.160.0±1.620.13±0.4335.6±3.2* 3.6±0.7113.8±2.282.1±2.62.2±0.94中 7.4±0.54147.1±9.643.8±2.458.7±1.120.11±0.6339.8±4.64.7±0.6913.6±2.982.9±3.22.3±0.94高 7.6±0.40151.0±7.944.0±2.258.2±1.820.00±0.5343.2±4.04.3±1.3512.9±3.782.6±4.12.7±0.92雌 陰性對(duì)照 7.7±0.34154.1±4.744.7±1.757.6±1.320.14±0.4345.0±3.63.2±1.0513.0±2.582.4±2.82.0±0.75低 7.3±0.70146.0±14.342.6±4.058.5±1.120.20±0.6342.8±8.03.7±1.0714.7±2.881.4±3.11.9±0.76中 7.6±0.64152.0±11.344.0±3.258.1±1.320.10±0.6345.3±4.24.1±1.1412.6±3.282.8±3.62.6±0.95高 7.9±0.28157.7±5.745.5±1.557.8±1.320.20±0.6346.8±5.74.2±0.8215.3±3.479.9±3.42.8±0.87劑量（g/kg）Dosage紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（1012/L）RBC血紅蛋白（g/L）Hb紅細(xì)胞壓積（%）HCT平均紅細(xì)胞體積（fL）MCV平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（pg）MCH平均血紅蛋白濃度（g/L）MCHC白細(xì)胞計(jì)數(shù)（109/L）WBC中性粒細(xì)胞百分比（%）NEUT淋巴細(xì)胞百分比（%）LYN

2.5 對(duì)大鼠血生化指標(biāo)的影響

?；瓒喾訉?duì)大鼠血生化指標(biāo)的影響如表3。其中雄性大鼠酰化茶多酚低劑量組的谷草轉(zhuǎn)氨酶與雄性對(duì)照組比較，有顯著性差異（P＜0.05）。但雄性中劑量組和高劑量中的谷草轉(zhuǎn)氨酶含量與對(duì)照組無顯著性差異（P＞0.05），因此不呈劑量效應(yīng)關(guān)系；而且其值均在正常值范圍內(nèi)，認(rèn)為該差異無生物學(xué)意義。而?；瓒喾痈鲃┝拷M其余血生化指標(biāo)與各自性別對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），因此該?；瓒喾訉?duì)大鼠的血生化指標(biāo)無明顯影響。

表3 ?；瓒喾訉?duì)大鼠血生化的影響（±S，n=10）Table 3 Effect of acylated tea polyphenols on blood biochemical components in serum of rats

表3 ?；瓒喾訉?duì)大鼠血生化的影響（±S，n=10）Table 3 Effect of acylated tea polyphenols on blood biochemical components in serum of rats

注：與同性別的對(duì)照組比較有顯著性差異，*P＜0.05。Note:Comparison with negative control,*P＜0.05.

性別S e x甘油三酯（m m o l/L）T G雄 陰性對(duì)照 59.9±2.94 0.1±1.19 5.0±13.01 59.5±15.18.09 ±1.36.97 ±1.28 44.2±4.01.71 ±0.25 0.60 ±0.14 低 58.0±2.13 9.1±1.38 5.40 ±12.31 41.4±14.7* 7.36 ±0.46.43 ±1.11 45.1±5.71.79 ±0.19 0.68 ±0.12 中 58.8±2.03 9.4±1.18 6.80 ±5.71 65.5±17.77.63 ±0.56.47 ±0.54 45.4±3.21.88 ±0.26 0.67 ±0.11 高 58.1±1.03 9.3±0.79 9.30 ±8.11 52.3±15.87.84 ±0.36.03 ±0.45 42.9±3.91.85 ±0.39 0.67 ±0.18 雌 陰性對(duì)照 61.3±1.74 1.0±1.57 8.40 ±20.01 21.5±10.28.25 ±0.46.20 ±0.50 31.6±5.61.88 ±0.17 0.75 ±0.09 低 60.0±2.34 0.2±1.07 0.20 ±7.51 53.1±30.68.18 ±0.45.89 ±0.53 35.3±3.62.04 ±0.26 0.65 ±0.08 中 59.8±2.14 0.0±1.16 9.40 ±11.11 43.6±29.57.84 ±0.45.66 ±0.50 30.6±4.71.93 ±0.18 0.73 ±0.12 高 59.3±1.63 9.8±0.77 3.70 ±11.61 35.9±17.58.23 ±0.45.62 ±0.76 29.8±3.22.11 ±0.23 0.78 ±0.12 劑量（g/k g）D o s a g e總蛋白（g/L）T R P白蛋白（g/L）A L B谷丙轉(zhuǎn)氨酶（U/L）A L T谷草轉(zhuǎn)氨酶（U/L）A S T血糖（m m o l/L）G l c尿素氮（m m o l/L）B U N肌酐（μ m o l/L）C R膽固醇（m m o l/L）T-C H O L

2.6 對(duì)大鼠主要臟器重量及臟體比的影響

?；瓒喾痈鲃┝拷M大鼠的主要臟器 （肝、腎、脾及睪丸或卵巢）重量與對(duì)照組比較無顯著性差異（P＞0.05），且都在正常范圍之內(nèi)。而各主要臟器的臟體比與同性別的對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。因此可認(rèn)為?；瓒喾?0 d 喂養(yǎng)對(duì)大鼠的臟器沒有明顯影響。

2.7 大鼠大體解剖及病理組織學(xué)檢查

各劑量組大鼠大體解剖肉眼觀察，心、肝、脾、腎、腸胃等臟器均未見明顯異常。外觀結(jié)構(gòu)均正常，選擇對(duì)高劑量組和對(duì)照組雌雄大鼠進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。通過鏡檢比較，各主要臟器肝、脾、腎、胃、腸等組織結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞形態(tài)正常。如肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞未見變性；腎小球、腎小管上皮細(xì)胞正常；脾組織完整，胃腸粘膜等也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的病變。結(jié)果表明?；瓒喾訉?duì)大鼠臟器沒有明顯毒性。

表4 ?；瓒喾訉?duì)大鼠臟體比的影響（±S，n=10）Table 4 Effect of acylated tea polyphenols on organic weight/body weight of rats

表4 ?；瓒喾訉?duì)大鼠臟體比的影響（±S，n=10）Table 4 Effect of acylated tea polyphenols on organic weight/body weight of rats

性別Sex睪丸（卵巢）/體系數(shù)（%）Testis （ovary）/body雄陰性對(duì)照 3.34±0.220.88±0.050.23±0.031.38±0.20低3.18±0.140.85±0.020.24±0.011.30±0.22中3.29±0.090.88±0.040.24±0.021.27±0.22高3.17±0.150.86±0.040.24±0.021.33±0.18雌陰性對(duì)照 3.35±0.180.86±0.030.26±0.020.064±0.008低3.27±0.170.87±0.050.25±0.020.067±0.006中3.31±0.110.83±0.100.25±0.020.061±0.009高3.37±0.180.86±0.050.25±0.030.062±0.007劑量（g/kg）Dosage肝/體系數(shù)（%）Liver/body腎/體系數(shù)（%）Kidney/body脾/體系數(shù)（%）Spleen/body

3 討論

近年來，對(duì)脂溶性茶多酚作為食品抗氧化劑的研究也較為深入[12,20]，但將其開發(fā)為食品抗氧化劑或作為保健產(chǎn)品原料等，須進(jìn)行相關(guān)的毒理安全性評(píng)價(jià)。因此本研究對(duì)酰化的脂溶性茶多酚進(jìn)行相關(guān)毒理學(xué)研究，為其實(shí)際開發(fā)應(yīng)用提供相關(guān)依據(jù)。?；瓒喾拥募毙远拘约斑z傳毒性研究試驗(yàn)結(jié)果表明其屬低毒物質(zhì)，無遺傳毒性。

通過給大鼠連續(xù)30 d 喂飼不同劑量的酰化茶多酚，實(shí)驗(yàn)期間各劑量組及對(duì)照組大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育狀況良好，無死亡現(xiàn)象。上述結(jié)果顯示該?；瓒喾訉?duì)大鼠的體重、增重、進(jìn)食量、食物利用率等無不良影響，表明該酰化茶多酚對(duì)大鼠的正常生長(zhǎng)發(fā)育和食物的吸收代謝等無明顯影響。?；瓒喾有坌缘蛣┝拷M的血生化指標(biāo)中的谷草轉(zhuǎn)氨酶明顯低于對(duì)照組，有顯著性差異（P＜0.05），而其余各劑量組的血生化各項(xiàng)指標(biāo)與各自性別對(duì)照組相比均無顯著性差異。?；瓒喾犹幚淼拇笫蟾黜?xiàng)指標(biāo)如血常規(guī)、動(dòng)物臟體比等均在正常值范圍之內(nèi)，且與同性別的對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)臟器病理組織學(xué)檢查也未發(fā)現(xiàn)病理改變。綜上所述，?；瓒喾?0 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明其對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育、代謝無不良影響；對(duì)大鼠增重、進(jìn)食量、食物利用率、血常規(guī)、血生化、臟體比及臟器病理組織學(xué)均未見異常。根據(jù)各項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果，酰化茶多酚4 g/kg（大鼠體質(zhì)量）劑量范圍內(nèi)無短期毒副作用，從而為其作為食品抗氧化劑等提供了一定的依據(jù)。

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