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    枳實(shí)薤白桂枝顆粒對異丙腎上腺素所致心肌缺血大鼠血液流變學(xué)和抗氧化作用的影響

    2015-12-22 07:00:33韓玉生侯志濤宮鑫梅
    中外醫(yī)療 2015年2期
    關(guān)鍵詞:枳實(shí)模型

    韓玉生 侯志濤 宮鑫梅 田 明

    1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江哈爾濱 150040;2.黑龍江省旅游職業(yè)技術(shù)學(xué)院,黑龍江哈爾濱 150040

    枳實(shí)薤白桂枝顆粒對異丙腎上腺素所致心肌缺血大鼠血液流變學(xué)和抗氧化作用的影響

    韓玉生1侯志濤1宮鑫梅2田 明1

    1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江哈爾濱 150040;2.黑龍江省旅游職業(yè)技術(shù)學(xué)院,黑龍江哈爾濱 150040

    目的 研究枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血模型大鼠血流變指標(biāo)和抗氧化作用的影響,為新藥開發(fā)和臨床應(yīng)用提供藥效學(xué)依據(jù)。方法經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖篩選合格的雄性SD大鼠,隨機(jī)分成正常組、模型組、枳實(shí)薤白桂枝顆粒高劑量組、中劑量組和低劑量組、陽性對照組。各組先連續(xù)7天灌胃給予相應(yīng)藥物,從第5天開始,除正常組外其余各組同時腹腔注射異丙腎上腺素(5 mg/kg),連續(xù)3 d,制備心肌缺血模型。檢測大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)變化,分光光度法檢測血中MDA、SOD、GSHPx和NO水平。結(jié)果與正常組相比,模型組大鼠的全血粘度、血漿粘度和纖維蛋白原水平明顯升高,MDA和GSH-Px水平顯著升高,SOD、NO水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,各治療組上述指標(biāo)均有不同程度改善,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 枳實(shí)薤白桂枝顆??赡芡ㄟ^清除氧自由基、提高機(jī)體抗氧化能力,從而改善心肌缺血大鼠血液粘濃凝聚的狀態(tài),起到保護(hù)心肌的目的。

    枳實(shí)薤白桂枝顆粒;心肌缺血;血液流變學(xué);抗氧化

    枳實(shí)薤白桂枝湯是東漢張仲景治療胸痹名方,由枳實(shí)、薤白、桂枝、瓜蔞、厚樸5味藥組成,具有通陽開結(jié),泄?jié)M降逆功效?,F(xiàn)代臨床上已廣泛用于心血管、呼吸和消化系統(tǒng)疾病的預(yù)防及治療,療效顯著[1-3]。在前期工作中,將枳實(shí)薤白桂枝湯其改良為顆粒劑型[4],解決了傳統(tǒng)水煎劑服用劑量上難以控制、儲存和攜帶不便等缺點(diǎn)。該研究采用異丙腎上腺素復(fù)制心肌缺血大鼠模型,觀察不同劑量的枳實(shí)薤白桂枝顆粒對模型大鼠血流變指標(biāo)和抗氧化作用的影響,進(jìn)一步探討枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血的保護(hù)作用與機(jī)制。

    表1 枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血大鼠的血液流變學(xué)的影響(,n=8)

    表1 枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血大鼠的血液流變學(xué)的影響(,n=8)

    注:與正常組比較*P<0.05,與模型組比較#P<0.05。

    組別 全血粘度高切(mpa.s) 全血粘度中切(mpa.s) 全血粘度低切(mpa.s) 血漿粘度(mpa.s) 纖維蛋白(g/L)正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組陽性藥組4.39±0.78(7.05±0.53)*(4.60±0.36)#(5.12±0.29)#(6.11±0.65)#(5.62±0.43)#7.04±0.96(9.71±1.78)*(7.77±0.79)#(8.20±0.73)#8.63±1.25(7.79±1.15)#14.55±0.99(18.19±1.08)*(15.42±1.04)#(16.59±0.77)#(17.21±0.89)#(15.89±0.86)#1.34±0.05(1.49±0.08)*(1.34±0.05)#(1.36±0.07)#(1.42±0.06)#(1.39±0.05)#2.26±0.40(3.29±0.25)*(2.58±0.30)#3.08±0.16 2.99±0.43(2.72±0.42)#

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動物與儀器

    清潔級雄性SD大鼠,體重(220±20)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供(實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許合格證號:SCXK黑2008004)。實(shí)驗(yàn)期內(nèi),大鼠均自由飲水。

    BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),HX-200動物呼吸機(jī);全自動血液流變分析儀;756PC型紫外可見分光光度計(jì)。

    1.2 藥品與試劑

    枳實(shí)薤白桂枝顆粒:由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供(批號:20110906);復(fù)方丹參片;鹽酸異丙腎上腺素注射液;戊巴比妥鈉、肝素鈉;丙二醛(MDA)、總超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮試劑盒(NO)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 模型制備及分組給藥 實(shí)驗(yàn)于2014年4月—7月進(jìn)行,取健康大鼠 72只,腹腔注射1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)麻醉,采用BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)檢測標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖,篩選出正常心電圖大鼠60只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分成6組,每組10只,即正常組、模型組、枳實(shí)薤白桂枝顆粒高劑量組、中劑量組和低劑量組、陽性對照組(復(fù)方丹參片)。

    枳實(shí)薤白桂枝顆粒高、中和低劑量組及陽性對照組給藥濃度分別為1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg和0.15 g/kg,按10 mL/kg灌胃給予相應(yīng)藥物,正常組及模型組灌服同體積蒸餾水,每天1次,連續(xù) 7 d。第5天開始,除正常組腹腔注射同體積生理鹽水外,其余各組參照文獻(xiàn)[5]均于灌胃給藥后1 h腹腔注射異丙腎上腺素(ISO)注射液(5 mg/kg)連續(xù)注射3 d,時間間隔均為 24 h。

    1.3.2 指標(biāo)檢測 末次腹腔注射異丙腎上腺素6小時后,各組大鼠用1%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔麻醉,腹主動脈取血,分別用肝素鈉和枸櫞酸鈉抗凝,測定血流變指標(biāo)及纖維蛋白原。另取血2 mL,3 500 r/min-1離心15 min,分離血清。用756PC型紫外可見分光光度計(jì)檢測MDA、SOD、GSH-Px和NO,按試劑盒說明書操作。

    1.4 統(tǒng)計(jì)方法

    采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理,計(jì)量資料以()表示,組間比較用t檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果

    2.1 枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血大鼠的血液流變學(xué)的影響

    與正常組相比,模型組全血粘度、血漿粘度和纖維蛋白原顯著升高(P<0.05);與模型組相比,枳實(shí)薤白桂枝顆粒高劑量組、中劑量組與陽性對照組上述指標(biāo)顯著降低(P<0.05)。提示,枳實(shí)薤白桂枝顆粒能使心肌缺血大鼠異常升高的全血粘度、血漿粘度和纖維蛋白原水平明顯降低,改善血液粘濃凝聚的狀態(tài)。見表1。

    2.2 枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血大鼠氧自由基的影響

    與正常組相比,模型組MDA含量顯著升高,SOD、NO含量明顯降低,GSH-Px活性顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組相比,各治療組上述指標(biāo)均有不同程度改善,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。表明枳實(shí)薤白桂枝顆粒能通過清除氧自由基、提高機(jī)體抗氧化能力,從而改善心肌缺血狀態(tài),起到保護(hù)心肌的目的。見表2。

    表2 枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血大鼠MDA、SOD、GSH-Px及NO的影響(,n=8)

    表2 枳實(shí)薤白桂枝顆粒對心肌缺血大鼠MDA、SOD、GSH-Px及NO的影響(,n=8)

    注:與正常組比較,*P<0.05,與模型組比較,#P<0.05。

    組別MDA(nmol/mL)SOD(U/mL)GSH-Px(酶活力單位)NO (μmol/L)正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組陽性藥組4.07±0.57(7.02±0.74)*(4.44±0.62)#(4.59±0.63)#(5.19±0.67)#(4.39±0.53)#161.88±11.64(120.93±7.89)*(154.26±6.20)#(148.24±9.96)#(140.73±7.94)#(154.47±10.52)#672.38±70.09(507.18±43.30)*(634.76±81.57)#(616.94±75.66)#(588.55±58.29)#(624.89±92.29)#45.44±2.75(30.67±4.39)*(44.99±3.97)#(42.41±3.26)#(38.39±3.16)#(44.18±3.49)#

    3 討論

    缺血性心臟病是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病 (coronary heart disease,CHD)的簡稱,在我國CHD的發(fā)病率及死亡率呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢,是危害人類健康的主要疾病之一。CHD屬中醫(yī)學(xué)“胸痹”和“心痛”范疇,中醫(yī)藥在抗心肌缺血和防治冠心病方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢日益受到學(xué)者的重視。

    枳實(shí)薤白桂枝湯出自漢代張仲景《金匱要略》,是治療胸痹證的名方,后世醫(yī)家用來治療冠心病心絞痛療效顯著。研究表明,枳實(shí)薤白桂枝湯可明顯降低高脂血癥大鼠血脂水平,改善血液流變學(xué)指標(biāo)和抗氧化作用[6-7];并發(fā)現(xiàn)枳實(shí)薤白桂枝湯中橙皮苷、新橙皮苷和圣草酚具有心肌細(xì)胞保護(hù)作用,而圣草酚的活性最強(qiáng),且呈良好的量效關(guān)系[8]。臨床研究表明枳實(shí)薤白桂枝湯可進(jìn)一步改善不穩(wěn)定型心絞痛患者M(jìn)MP-9、TIMP-1水平及其基因表達(dá),促進(jìn)粥樣斑塊的穩(wěn)定性[9]。

    心肌急劇的暫時性缺血與缺氧導(dǎo)致冠狀動脈供血不足,是冠心病基本的病理生理過程,改善心肌缺血狀態(tài)是防治冠心病的關(guān)鍵。血液粘滯性的增加是使冠脈血流量減少的重要因素之一,全血粘度是反映血液流變性的最重要的指標(biāo)。血液流變學(xué)的異常改變可導(dǎo)致紅細(xì)胞攜氧能力減弱,血流阻力增加,因而加重心肌缺血缺氧,促進(jìn)心律失常的發(fā)生。該研究結(jié)果表明模型組全血粘度、血漿粘度和纖維蛋白原顯著升高;枳實(shí)薤白桂枝顆粒能使心肌缺血大鼠異常升高的全血粘度、血漿粘度和纖維蛋白原水平明顯降低,從而改善了血液粘濃凝聚的狀態(tài)。

    此外,CHD的病因與氧自由基的生成、代謝密切相關(guān)。研究證實(shí),機(jī)體脂質(zhì)過氧化水平增高與冠心病發(fā)病率呈正相關(guān),而機(jī)體抗氧化水平與CHD發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)[10]。NO是一種血管活性物質(zhì),具有擴(kuò)血管活性作用,在缺血過程中起到重要的的調(diào)節(jié)作用[11]。內(nèi)皮來源的NO能調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng),對缺血心肌具有保護(hù)作用[12]。心肌缺血狀態(tài)下引起中性粒細(xì)胞大量聚集于缺血區(qū),使氧自由基過量堆積,機(jī)體脂質(zhì)過氧化作用增強(qiáng),引起細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能損害,從而加劇缺血組織損傷[13-14]。該研究結(jié)果顯示:模型組大鼠血清中MDA含量明顯升高,SOD、NO和GSH-Px活力明顯降低,說明異丙腎上腺素使大鼠體內(nèi)氧自由基代謝發(fā)生障礙,脂質(zhì)過氧化作用增強(qiáng),與相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)果一致[13-14];而枳實(shí)薤白桂枝顆粒高、中和低劑量均能使心肌缺血模型大鼠血清MDA含量明顯降低,血清SOD、NO和GSH-Px活力顯著提高,尤其以高劑量組作用最為明顯。提示枳實(shí)薤白桂枝顆粒具有明顯的抗氧化作用,可能通過提高機(jī)體清除氧自由基的能力來防治CHD的發(fā)生與發(fā)展。

    綜上所述,枳實(shí)薤白桂枝顆粒不僅能改善心肌缺血引起的血液流變學(xué)的異常狀態(tài),還可以提高機(jī)體的抗氧化能力,抑制脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生,對CHD的發(fā)生具有很好的治療作用。

    [1]王金鎖.枳實(shí)薤白桂枝湯治療竇性心動過緩45例療效觀察[J].實(shí)用全科醫(yī)學(xué),2005,3(1):86.

    [2]顧慶華,黃棟.枳實(shí)薤白桂枝湯加味治療氣滯痰阻型反流性食管炎臨床觀察[J].中國中醫(yī)急癥,2012,21(1):140-141.

    [3]魏慧淵,陳浩,蘇蕾,等.枳實(shí)薤白桂枝湯治療不穩(wěn)定性心絞痛30例[J].中國中醫(yī)急癥,2011,20(3):462-463.

    [4]張楠.枳實(shí)薤白桂枝顆粒的制備工藝研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),2012.

    [5]閻艷麗,于永軍,宋曉宇,等.當(dāng)歸芍藥散及煎劑對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志,2006,33(9):1203-1204.

    [6]夏寒星,張業(yè).枳實(shí)薤白桂枝湯對高脂血癥大鼠血脂及血管內(nèi)皮功能的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(10):224-226.

    [7]夏寒星,張業(yè).枳實(shí)薤白桂枝湯對高脂血癥大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)及抗氧化作用的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(11):170-172.

    [8]王程,張玉峰,趙筱萍.枳實(shí)薤白桂枝湯抗心肌細(xì)胞損傷活性成分的發(fā)現(xiàn)研究[J].中國中藥雜志,2013,38(10):1601-1605.

    [9]戴飛,陸曙,蘇偉,等.枳實(shí)薤白桂枝湯對不穩(wěn)定型心絞痛患者M(jìn)MP-9/ TIMP-1的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(14):307-310.

    [10]Dem acker PN,et al.Indications for the presence of circulating peroxidized low density lipoproteins in WHHL rabbits treated with antioxidants[J].A thero sclerosis,1993,102(1):691.

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    Effect of Zhishi Xiebai Guizhi-Tang on Hermorrheology and Oxygen Free Radicals in Acute Myocardial Ischemia Induced by Isoproterenol in Rat

    Han yusheng1Hou zhitao1Gong xinmei2Tian ming1★
    1 Heilongjiang University of Chinese Medicine;2 Heilongjiang Vocational College of Tourism,Haerbin,Heilongjiang province, 150040,China

    Objective To investigate the effects of Zhishi Xiebai Guizhi Tang on hermorrheology and oxygen free radicala in Acute Myocardial Ischemia Induced by Isoproterenol in Rat.Methods The health SD rats were randomly divided into blank group,model group,three dose groups of Zhishi Xiebai Guizhi Tang.Myocardial injury model was induced by subcutaneous injection of isoproterenol(5 mg·kg-1).The electrocardiogram ECG was recorded,were detected,Then indexes of hermorrheology,levels of MDA, SOD,GSH-Px and NO in the blood were assayed.Results Compared with the blank group,the whole blood viscosity and plasma viscosity in the model group were increased,the levels of MDA and GSH-Px were increased,the level of SOD and NO were decreased obviously.Compared with model group,the level of the whole blood viscosity and plasma viscosity in Zhishi Xiebai Guizhi Tang group were decreased,the level of MDA and GSH-Px were decreased,the level of SOD and NO were increased.Conclusion The Zhishi Xiebai Guizhi Tang can improve hermorrheology,clean oxygen free radical in rat with Acute Myocardial Ischemia Induced by Isoproterenol.

    Acute Myocardial Ischemia;blood rheology;antioxidatio;Zhishi Xiebai Guizhi Tang

    R4

    A

    1674-0742(2015)01(b)-0159-03

    2014-09-28)

    韓玉生(1973-),男,山東曹縣人,碩士,高級實(shí)驗(yàn)師,主要從事中醫(yī)藥防治心腦血管病基礎(chǔ)研究。

    田明(1963-),男,黑龍江牡丹江人,學(xué)士,教授,碩士研究生導(dǎo)師,主要從事中藥制劑工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

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