防治草莓灰霉病殺菌劑的篩選和復(fù)配作用研究

王 睿，湯智鵬，李茜，陳朝東，高成康，楊春平

(1．四川省成都市青白江區(qū)農(nóng)村發(fā)展局，四川青白江610300;2．四川省出入境檢驗(yàn)檢疫局，四川成都610000;3．四川省漢源縣農(nóng)業(yè)局，四川雅安625300;4．四川省天全縣農(nóng)業(yè)局，四川雅安6255003;5．四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，四川溫江611130)

由灰霉菌(Botrytis cinerea Pers．)引起的草莓灰霉病是草莓栽培的最重要病害。近幾年來，隨著草莓的廣泛種植，灰霉病問題也是日趨突出［1－4］?；颐咕鸀榘胫鷣嗛T葡萄孢屬真菌，腐生性強(qiáng)，寄主范圍廣，廣泛侵染番茄、韭菜、甜瓜、葡萄等果蔬作物［5－7］。該病菌主要為害草莓果實(shí)，嚴(yán)重時(shí)還為害果柄、花梗，感病品種的病果率在30%左右，嚴(yán)重的可達(dá)60%以上。草莓灰霉病不僅引起田間損失，且對草莓采后貯藏的危害極大［8－10］。

目前尚無高抗灰霉病的品種，草莓灰霉病的防治仍以化學(xué)防治為主，輔以農(nóng)業(yè)防治、生物防治及生態(tài)防治［11－13］。生產(chǎn)上防治草莓灰霉病的藥劑主要有百菌清、甲霉靈、多霉靈等，但灰霉菌適應(yīng)力強(qiáng)，極易產(chǎn)生抗藥性［14－15］，使用常用殺菌劑防治效果大大降低。為了延緩病原菌的抗藥性、擴(kuò)大殺菌譜和提高藥效，多采用新的殺菌劑品種以及殺菌劑間的混配來防治該病害［16－17］。筆者選擇常用的腐霉利、烯唑醇、三唑酮和嘧菌酯4種真菌殺菌劑，進(jìn)行了室內(nèi)離體篩選和復(fù)配作用研究，以期為防治草莓灰霉病復(fù)配制劑的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 供試菌種。草莓灰霉病菌由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)無公害農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室提供。

1．1．2 供試藥劑。98．4%腐霉利原藥(遼寧省沈陽市紅旗林藥有限公司)、96．99%三唑酮原藥(四川省化工研究設(shè)計(jì)院)、91．6%烯唑醇原藥(四川省化工研究設(shè)計(jì)院)和98．8%嘧菌酯原藥(安徽省瑞特農(nóng)化有限公司)。

1．2 方法

1．2．1 單劑室內(nèi)毒力測定。參照農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗(yàn)準(zhǔn)則［18］，采用生長速率抑制法［19］測定。分別測定各處理對草莓灰霉菌菌絲生長的抑制作用，用十字交叉法測定菌落直徑，計(jì)算抑制率。

抑制率=(對照組菌落直徑－藥劑組菌落直徑)/對照組菌落直徑×100%

將生長抑菌率換成抑制機(jī)率值并作為縱坐標(biāo)，藥劑質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)化為對數(shù)值作為橫坐標(biāo)，根據(jù)抑菌率進(jìn)行機(jī)率值(y)與質(zhì)量濃度對數(shù)(x)之間的線性回歸關(guān)系，求毒力回歸方程，計(jì)算 EC50值及相關(guān)系數(shù)(r)等［20－21］。

1．2．2 復(fù)配藥劑最佳配比篩選。根據(jù)“1．2．1”試驗(yàn)結(jié)果選出毒力較高的2種藥劑，按比例混合法進(jìn)行復(fù)配，然后采用生長速率抑制法對草莓灰霉病菌進(jìn)行生物測定。將藥劑先配成一定濃度(腐霉利和烯唑醇都是 20．000、10．000、5．000、2．500、1．250、0．625 μg/ml)，再按照體積比為1∶1、1∶2、2∶1、1∶4、4∶1進(jìn)行復(fù)配，5個(gè)復(fù)配比例和2個(gè)單劑各對應(yīng)濃度依次倍半稀釋5個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度3次重復(fù)，以無菌水作為對照。在25℃下培養(yǎng)5～7 d后，用十字交叉法測定菌落直徑，計(jì)算出各自的抑制率，求出混劑及單劑的毒力回歸方程和EC50，并按照孫云沛等［22］提出用CTC來判斷藥劑混配的增效作用，通過毒性指數(shù)求出CTC。

2 結(jié)果與分析

2．1 4種殺菌劑對草莓灰霉菌菌絲生長的毒力測定 由表1可知，腐霉利抑制草莓灰霉病菌菌絲生長的毒力最高，其EC50為 0．595 1 μg/ml;其次為烯唑醇，其 EC50為 0．763 1 μg/ml;三唑酮效果較差，其 EC50為 6．748 0 μg/ml;嘧菌酯毒力略高于三唑酮，其EC50為6．558 0 μg/ml。因此，選用腐霉利和烯唑醇進(jìn)行下一步的復(fù)配研究。

2．2 腐霉利、烯唑醇對草莓灰霉病菌的復(fù)配比例篩選 由表2可知，不同配比的腐霉利和烯唑醇混劑均對草莓灰霉菌有抑菌效果，但不同配比的菌絲抑制率不同，且都表現(xiàn)出相加作用。CTC最高的為腐霉利和烯唑醇配比為4∶1的處理，值為 111．737 4，其 EC50為0．557 1 μg/ml;其次為腐霉利和烯唑醇配比為 2∶1處理，CTC 值為 103．965 4，其 EC50為 0．617 7 μg/ml;腐霉利和烯唑醇配比為 1∶1、1∶2、1∶4處理的 CTC 值分別為102．822 0、98．430 9、96．204 7，其EC50分別為0．650 3、0．708 5、0．750 7 μg/ml。

表1 4種殺菌劑對草莓灰霉病菌的室內(nèi)毒力

表2 腐霉利與烯唑醇復(fù)配對草莓灰霉病菌的室內(nèi)毒力

3 結(jié)論與討論

單劑篩選結(jié)果顯示，腐霉利和烯唑醇的EC50值最大，分別為 0．521 2 和 0．752 8 μg/ml，對草莓灰霉病病菌的抑制效果明顯。從生產(chǎn)上考慮，腐霉利屬于保護(hù)、治療性殺菌劑，而烯唑醇為三唑類脫甲基抑制劑，抑制菌體麥角甾醇的生物合成，該2種藥劑作用機(jī)理不同，在病害防治上使用范圍較廣且目前沒有腐霉利和烯唑醇單劑復(fù)配產(chǎn)生交互抗性的報(bào)道，所以選取腐霉利和烯唑醇作為復(fù)配篩選的藥劑。

由腐霉利和烯唑醇的復(fù)配篩選結(jié)果可知，各比例復(fù)配對草莓灰霉菌均有抑菌活力，都表現(xiàn)為相加作用，其中以腐霉利和烯唑醇配比為4∶1處理的抑菌活性最好，共毒系數(shù)為111．737 4。與腐霉利和烯唑醇單劑相比，該混劑具有殺菌譜廣、應(yīng)用范圍擴(kuò)大、可降低用量、克服單一用藥易產(chǎn)生抗藥性的問題、延長農(nóng)藥使用壽命等優(yōu)點(diǎn)，可為進(jìn)一步研究其復(fù)配制劑的田間實(shí)際應(yīng)用提供參考。

［1］高九思，張安全．保護(hù)地草莓灰霉病發(fā)生規(guī)律及綜合防治技術(shù)［J］．現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2006(7):85－86．

［2］李龍，梁曉鵬，徐亞秋．保護(hù)地草莓灰霉病防治方法［J］．吉林農(nóng)業(yè)，2004(2):13．

［3］曾光輝，金秀敏．草莓灰霉病綜合防治技術(shù)［J］．溫州農(nóng)業(yè)科技，2009(1):37－38．

［4］李國元．湖北省草莓病害發(fā)生特點(diǎn)及防治技術(shù)［J］．湖北植保，200l(4):17－19．

［5］李科孝，謝宏偉．大棚韭菜灰霉病的發(fā)生規(guī)律與防治［J］．植物保護(hù)，2001，27(2):46．

［6］倪秀紅，趙杰．防治甜瓜灰霉病的藥劑篩選試驗(yàn)研究［J］．上海農(nóng)業(yè)科技，2009(1):105－107．

［7］朱麗梅，張長青，陳浩，等．百合灰霉病高效殺菌劑的篩選和聯(lián)合作用研究［J］．金陵科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，27(3):1．

［8］劉琳．大棚草莓灰霉病的綜合防治［J］．山東林業(yè)科技，2004(4):16－17．

［9］朱孔華，李本良，廖開志，等．草莓灰霉病的發(fā)生與防治［J］．農(nóng)業(yè)科技學(xué)報(bào)，2009(9):22．

［10］張建人．南方草莓灰霉病的發(fā)生與防治［J］．植物保護(hù)，1991，17(4):32－33．

［11］楊敬輝，陳宏州，吳琴燕，等．啶酰菌胺對草莓灰霉病菌的毒力測定及田間防治［J］．江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，22(9):94 －95．

［12］袁坤，吳光旭，郭春林，等．艾蒿提取物對草莓灰霉菌的抗菌活性研究［J］．安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，12(13):55 －56．

［13］劉玉連，焦瑞蓮．日光溫室草莓灰霉病的無公害防治［J］．農(nóng)業(yè)工程技術(shù)(溫室園藝)，2008(9):42 －43．

［14］劉波，葉鐘音，劉經(jīng)芬．速克靈抗灰霉病菌菌株性質(zhì)的研究［J］．植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1992，19(4):297 －301．

［15］張傳博，易萌，孫云子，等．幾種殺菌劑及其復(fù)配劑對草莓灰霉病菌的室內(nèi)毒力測定［J］．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52(14):3299 －3305．

［16］張京莉，李繼軍．劑型改造光明前途［J］．現(xiàn)代科技譯叢，2003(2):11－15．

［17］徐漢虹．植物化學(xué)保護(hù)［M］．4版．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2007:229－233．

［18］朱春雨，吳文平，張弘，等．農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗(yàn)準(zhǔn)則(殺菌劑)第2部分:抑制病原真菌菌絲生長試驗(yàn)平皿法［S］．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2006．

［19］黃彰欣．植物化學(xué)保護(hù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)［M］．北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1993:57．

［20］張長青，馬躍峰，馬國良，等．防治春小麥赤霉病的室內(nèi)藥劑篩選［J］．農(nóng)業(yè)與技術(shù)，2005，25(3):62 －65．

［21］慕立義．植物化學(xué)保護(hù)研究方法［M］．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1994．

［22］SUN Y P，JOHNSON E R．Analysis of insecticides against houseflies［J］．Entomology，1960(5):887 －892．