水霉菌感染鯉誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生的研究

黃建　湯茜　姚卓鳳　張俊梅　顧澤茂　袁軍法

摘要：以感染水霉病的鯉（Cyprinus carpio）為研究對象，測定了患病鯉血漿中氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，包括總抗氧化能力（T-AOC）、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、還原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和過氧化氫酶（CAT），同時隨機取患病組鯉的肝胰臟、脾臟和腎臟組織進行組織病理分析，旨在探討氧化應(yīng)激同水霉菌致病機理的關(guān)聯(lián)。結(jié)果表明，①患病組相對于對照組，魚體血漿T-AOC極顯著降低（P<0.01）；MDA含量和GSH含量無顯著變化；SOD和CAT活性極顯著降低（P<0.01）；GPx活性顯著升高（P<0.05），表明鯉患水霉病后魚體內(nèi)氧化水平-抗氧化水平失衡，魚體產(chǎn)生氧化應(yīng)激。②組織病理學(xué)分析顯示患水霉病鯉的肝臟細(xì)胞相對于對照組出現(xiàn)嚴(yán)重的急性壞死癥狀，細(xì)胞出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象嚴(yán)重；脾臟和腎臟細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的炎癥，細(xì)胞開始凋亡。

關(guān)鍵詞：水霉?。货帲–yprinus carpio）；氧化應(yīng)激；組織病理

中圖分類號：S965.116；S941.43+1 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）22-5677-05

Abstract：In this study， plasma from diseased or healthy common carps （Cyprinus carpio） was collected to evaluate the effect of infection with Saprolegniasis on oxidative stress. Several bio-chemical markers of oxidative stress， including the total antioxidant capacity （T-AOC），lipid peroxidation- malondialdehyde （MDA），superoxide dismutase （SOD）， glutathione （GSH），glutathione peroxidase （GPx），and catalase （CAT） were measured among controls and infected common carps. Compared with the healthy common carps，some biomarkers of the common carps infected with Saprolegniasis， including T-AOC，SOD and CAT，were decreased significantly （P<0.01），and the plasma GPx was increased significantly （P<0.05）. Other biomarkers of plasma MDA and GSH showed no significant change after the infection with Saprolegniasis. These results indicated that oxidative stress has occurred upon Saprolegniasis infection. The histopathology damage of liver， spleen， and kidney tissues from diseased fish were also observed after hematoxylin and eosin （HE） staining. Liver cells of common carps infected with Saprolegniasis was presented with the symptom of acute necrosis， and became vacuolization seriously；spleen and kidney cells was presented with inflammations of different severity，senescence and apoptosis.

Key words：Saprolegniasis；common carp（Cyprinus carpio）；oxidative stress；histopathology

水霉?。⊿aprolegniasis）由寄生于水生魚類體表及卵上的真菌引起，現(xiàn)已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之一，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[1]。常見的種類主要是卵菌綱（Oomycetes）水霉目（Saprolegniales）水霉科（Saprolegniaceae）的一些成員，包括水霉屬（Saprolegnia）、綿霉屬（Achlya）、絲囊菌屬（Aphanomyces）[2，3]?；疾∷~類食欲減退、行動呆滯；頭部、吻端、尾部、軀干或鰭條，甚至鰓部有水霉菌寄生，并黏附污泥和藻類，其狀如覆蓋棉絮，故俗稱“白毛病”。在魚卵孵化過程中，該病也經(jīng)常發(fā)生，內(nèi)菌絲侵入卵膜內(nèi)，叢生大量外菌絲，為“卵絲病”。被寄生的魚卵，內(nèi)外菌絲呈放射狀，有“太陽子”之稱[4]。在生產(chǎn)中一直以孔雀石綠治療該病，療效較好，但孔雀石綠具有高毒性、高殘留、高致癌和致畸性。2002年中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的193號公告以及NY5072-2002標(biāo)準(zhǔn)《無公害食品漁用藥物使用準(zhǔn)則》中明確規(guī)定在漁業(yè)領(lǐng)域禁用孔雀石綠，但目前還缺乏安全有效的替代藥物[5]。

水霉菌溫度適應(yīng)范圍廣，分布范圍大，無宿主特異性[6]。當(dāng)魚類體表受傷或者免疫力降低、水溫驟變等時，水霉菌寄生在傷口處，通過傷口吸收營養(yǎng)，將菌絲侵入到肌肉、真皮等組織，造成組織壞死，從而誘發(fā)水霉病[7]。研究表明，感染水霉菌后可上調(diào)促炎相關(guān)因子的表達[8]；也有研究表明，水霉菌感染大西洋鮭后可抑制先天性免疫相關(guān)基因的表達，從而使魚體產(chǎn)生嚴(yán)重的炎癥[9]。

氧化應(yīng)激是微生物感染導(dǎo)致的組織損傷的病理機制之一[10，11]，氧化應(yīng)激和炎癥在維持機體穩(wěn)態(tài)的免疫反應(yīng)過程中密切相關(guān)[12]。氧化應(yīng)激參與了肥胖、癌癥、衰老和腫瘤等病理過程[13，14]，阻斷氧化應(yīng)激的發(fā)生，成為對抗微生物感染和減少組織損傷的新思路[15，16]。氧化應(yīng)激是指當(dāng)機體遭受有害刺激時，體內(nèi)活性氧自由基和活性氮自由基產(chǎn)生過多，氧化程度超過抗氧化物質(zhì)的清除能力，導(dǎo)致機體內(nèi)氧化抗氧化水平失衡[17]。關(guān)于魚類感染微生物誘導(dǎo)氧化應(yīng)激發(fā)生的報道很少，僅見石斑魚神經(jīng)壞死病毒（Grouper nervous necrosis virus，RGNNV）和草魚呼腸孤病毒（Grass carp reovirus，GCRV）感染誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)的報道[18，19]。鯉春病毒血癥病毒（Spring viremia of carp virus，SVCV）感染可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激[20，21]。為此，本研究通過測定感染水霉菌的鯉血漿中氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，并結(jié)合患病魚的組織病理學(xué)分析，初步探討了鯉水霉病誘發(fā)氧化應(yīng)激及其介導(dǎo)的病理變化，為水霉病的防治提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗魚類 健康鯉和患水霉病鯉取自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院實驗教學(xué)基地。

1.1.2 試驗試劑 總抗氧化能力T-AOC檢測試劑盒（碧云天S0116）、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛MDA檢測試劑盒（碧云天S0131）、超氧化物歧化酶SOD檢測試劑盒（南京建成A001-1）、還原性谷胱甘肽GSH檢測試劑盒（南京建成A006-1）、過氧化氫酶CAT檢測試劑盒（南京建成A007-1）、谷胱甘肽過氧化物酶GPx檢測試劑盒（南京建成A005），波恩試液購自武漢博洪生物科技有限公司，組織病理切片由武漢谷歌生物科技有限公司制作。

1.2 方法

1.2.1 患病鯉體表水霉菌絲的顯微觀察 用鑷子輕輕刮取患病鯉體表水霉菌絲置于培養(yǎng)皿中，用70%乙醇漂洗3 s，用無菌水沖洗2次，然后用微吸管吸取水霉菌絲置于載玻片上顯微鏡觀察。

1.2.2 患水霉病鯉和健康鯉血漿氧化應(yīng)激指標(biāo)的測定 采集患病組和對照組鯉的全血（加肝素鈉抗凝）4 ℃ 2 500 r/min，離心得到血漿，分別測定血漿總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量、還原性谷胱甘肽（Glutathione，GSH）含量、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性、過氧化氫酶（Catalase，CAT）活性和谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathion peroxidase，GPx）活性。具體測定方法按照試劑盒說明書進行，結(jié)果以SPSS（17.0）進行Duncan法單因素ANONA分析。

1.2.3 患病鯉的組織病理學(xué)分析 隨機取患病組和對照組的鯉各3尾，分別取其肝胰臟、腎臟和脾臟組織固定于波恩試液（飽和苦味酸∶甲醛∶冰醋酸=15∶5∶1，V/V/V）中，以常規(guī)法制作石蠟切片，并進行蘇木精-伊紅（HE）染色，顯微鏡下觀察組織病理變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 患病鯉體表水霉菌絲的形態(tài)觀察

患病鯉體表水霉菌絲為透明管狀結(jié)構(gòu)，中間無橫隔，分枝較少，菌絲細(xì)長（圖1A）。其游動孢子囊多呈棒狀，游動孢子發(fā)育成熟后從孢子囊頂端釋放出來， 并迅速游離（圖1B）。

2.2 患水霉病鯉和健康鯉血漿氧化應(yīng)激指標(biāo)的測定

測定魚體的氧化及抗氧化系統(tǒng)兩方面的指標(biāo)來評估鯉遭受水霉菌感染后是否誘發(fā)氧化應(yīng)激?；妓共□幣c健康鯉相比，血漿總抗氧化能力T-AOC極顯著降低（P<0.01），超氧化物歧化酶SOD和過氧化氫酶CAT活性極顯著降低（P<0.01），谷胱甘肽過氧化物酶GPx活性顯著升高（P<0.05），還原型谷胱甘肽GSH含量無顯著變化，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-MDA含量無顯著變化，鯉感染水霉菌后機體抗氧化水平極顯著降低，氧化水平無顯著變化（表1）。結(jié)果表明，鯉遭受水霉菌侵襲后機體的氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡，遭受氧化應(yīng)激脅迫，可能同其致病性相關(guān)。

2.3 組織病理學(xué)觀察

與對照組相比，患水霉病鯉肝臟組織細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)溶解，細(xì)胞界限模糊，出現(xiàn)嚴(yán)重的急性壞死癥狀，細(xì)胞空泡化現(xiàn)象嚴(yán)重（圖2A、圖2B）；腎小球腫脹，間質(zhì)細(xì)胞核變大，染色質(zhì)凝集，細(xì)胞嗜堿性增強，腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核變大，部分腎小球結(jié)構(gòu)喪失（圖3A、圖3B）；脾臟組織細(xì)胞出現(xiàn)嗜中性粒細(xì)胞炎癥，未成熟紅細(xì)胞處于衰老狀態(tài)，含鐵血黃素逐漸形成（圖4A、圖4B），腎臟和脾臟組織出現(xiàn)不同程度的炎癥和衰老癥狀，細(xì)胞開始凋亡。

3 小結(jié)與討論

微生物感染能引起氧化應(yīng)激的發(fā)生，如風(fēng)疹病毒（Rubella virus，RV）[22]、人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）[23]以及白色念珠菌（Candida barbicans）[24]和炭黑曲霉菌（Aspergillus carbonarius）[25]等，這些研究都表明微生物感染機體后會產(chǎn)生大量ROS。機體的抗氧化應(yīng)激信號通路會被激活，產(chǎn)生抗氧化物質(zhì)，用于清除ROS，避免機體因過度氧化損傷導(dǎo)致的死亡。如細(xì)菌內(nèi)毒素（Lipopolysaccharides，LPS）可以通過產(chǎn)生大量活性氧ROS，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子ATF3（Activating transcription factor3，ATF3）的上調(diào)來抑制高遷移率族蛋白B1（High-mobility group protein B1，HMGB1）的表達以保護機體[26]。若機體內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)的失衡，會導(dǎo)致ROS在胞內(nèi)的積聚，產(chǎn)生氧化應(yīng)激，最終造成脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子的損傷。氧化應(yīng)激作為微生物感染的致病機理之一，參與了許多疾病的病理過程。

本試驗測定了患病鯉的氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，表明鯉在感染水霉菌后也誘發(fā)了氧化應(yīng)激。衡量機體氧化應(yīng)激狀態(tài)有兩方面，一方面是氧化水平，主要包括活性氧自由基（Reactive oxygen species， ROS）、活性氮自由基（Reactive nitrogen species， RNS）、總抗氧化能力（Total antioxidant capacity， T-AOC）、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、蛋白質(zhì)氧化損傷產(chǎn)物-蛋白質(zhì)羰基含量和DNA氧化損傷產(chǎn)物-8-OHdG等；二是抗氧化水平，主要包括抗氧化酶類-超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathion peroxidase，GPx）和過氧化氫酶（Catalase，CAT），非酶類抗氧化劑-還原性谷胱甘肽（Glutathione，GSH）、維生素E和維生素C等[27]?；妓共□幣c健康鯉相比，血漿總抗氧化能力T-AOC極顯著降低，超氧化物歧化酶SOD和過氧化氫酶CAT活性極顯著降低，谷胱甘肽過氧化物酶GPx活性顯著升高，還原型谷胱甘肽GSH含量無顯著變化；脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-MDA含量無顯著變化。鯉感染水霉菌后遭受不同程度的氧化損傷，由于DNA和蛋白的氧化損傷，合成抗氧化酶類的機制受損[28]，從而使超氧化物歧化酶SOD和過氧化氫酶CAT活性極顯著降低，最終造成總抗氧化能力T-AOC極顯著降低。抗氧化水平的降低，又進一步加重組織細(xì)胞損傷[29]。谷胱甘肽過氧化物酶GPx活性顯著升高，可能是代償性升高，由于氧化應(yīng)激的產(chǎn)生激活核轉(zhuǎn)錄因子NRF2，從而導(dǎo)致下游抗氧化基因的表達，避免組織細(xì)胞遭受過度氧化損傷[30，31]。GPx能降解脂質(zhì)過氧化物，防止細(xì)胞脂質(zhì)過氧化損傷，在GPx作用下脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為較為穩(wěn)定的羥基化合物（ROH），阻斷了脂質(zhì)過氧化的自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從而導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛的含量沒有顯著性變化[32]。GPx在清除ROS和脂質(zhì)過氧化的過程需要將大量的還原型谷胱甘肽氧化成氧化型谷胱甘肽GSSG，機體為了保證充足的底物供應(yīng)，在谷胱甘肽還原酶的作用下，將GSSG還原成GSH，因而GSH含量無顯著性變化[33]。水霉菌感染鯉后機體的氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡，抗氧化水平極顯著降低，不能有效清除機體內(nèi)產(chǎn)生的ROS，機體產(chǎn)生了氧化應(yīng)激[34]。

組織病理學(xué)分析表明，感染水霉菌的鯉呈現(xiàn)出明顯的病理變化，其中腎臟和脾臟細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的炎癥和衰老癥狀，細(xì)胞開始凋亡。炎癥反應(yīng)能促進ROS的產(chǎn)生，同時激活相關(guān)炎性細(xì)胞，導(dǎo)致相關(guān)促炎因子的表達，并且ROS也能激活NF-κB，從而上調(diào)各種炎癥介質(zhì)和促炎因子的表達。ROS在機體內(nèi)的蓄積誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生，造成機體嚴(yán)重的氧化損傷，又進一步加重了機體的炎癥反應(yīng)[12]。細(xì)胞凋亡在機體生長發(fā)育和衰老等許多生理和病理過程中有著重要作用，研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激能通過多種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生[35]。組織病理變化分析表明水霉菌感染鯉機體后產(chǎn)生嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，可能是由于機體產(chǎn)生氧化應(yīng)激激活了核轉(zhuǎn)錄因子-κB（Nuclear factor-κB，NF-κB），NF-κB調(diào)控機體炎癥反應(yīng)，能夠上調(diào)各種炎癥介質(zhì)和相關(guān)促炎因子的表達，其中環(huán)氧合酶2（Cyclooxygenase -2，COX-2）的表達上調(diào)又可以合成前列腺素E2（Prostaglandin E2）來介導(dǎo)炎癥病理過程[8，9，36，37]。患病鯉組織出現(xiàn)的細(xì)胞凋亡也與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，氧化應(yīng)激產(chǎn)生的ROS的蓄積導(dǎo)致NF-κB的活化也能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[35]。NF-κB的活化能夠促進相關(guān)促炎因子的表達，從而激活絲裂原活化蛋白激酶細(xì)胞凋亡信號通路[38]，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。氧化應(yīng)激指標(biāo)測定結(jié)果表明，感染水霉菌的鯉機體抗氧化水平極顯著降低，不能有效清除機體產(chǎn)生的ROS，造成機體內(nèi)ROS的蓄積，誘發(fā)了氧化應(yīng)激，同時組織病理學(xué)分析表明機體產(chǎn)生了嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。這些都說明水霉菌感染鯉后產(chǎn)生大量的ROS，機體遭受氧化應(yīng)激脅迫，造成機體組織細(xì)胞氧化損傷[39]。

鯉感染水霉菌后，氧化應(yīng)激的產(chǎn)生誘導(dǎo)了炎癥和細(xì)胞凋亡的發(fā)生，共同介導(dǎo)了其病理過程，因此，可以通過阻斷氧化應(yīng)激的發(fā)生來預(yù)防和治療真菌感染，通過提高機體的抗氧化水平來清除機體內(nèi)產(chǎn)生的大量ROS，從而避免組織細(xì)胞遭受過度的氧化損傷，并且也能一定程度上緩解炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡的發(fā)生。如在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，通過添加抗氧化劑，可增強魚體的抗氧化能力。后續(xù)將進一步評價抗氧化劑或抗氧化應(yīng)激信號通路的激活劑抵抗水霉菌的作用[20，40]。

參考文獻：

[1] 周志明，朱俊杰.水霉病研究概況[J].現(xiàn)代漁業(yè)信息，2009，24（5）：9-12，27.

[2] 王 浩，張 楠，楊先樂，等.水霉菌環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測方法的建立[J].微生物學(xué)通報，2012，39（12）：1835-1843.

[3] 熊 剛，尹思璐，梁永增，等.河鱸水霉病病原菌的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（8）：3411-3413，3439.

[4] 尹倫甫，陳昌福.水霉病的預(yù)防與診治方法[J].科學(xué)養(yǎng)魚，2009（1）：76.

[5] 張世奇.抗水霉藥物的篩選及其制劑的應(yīng)用效果研究[D].上海：上海海洋大學(xué).2011.

[6] 陳本亮，張其中.水霉及水霉病防治的研究進展[J].水產(chǎn)科學(xué)，2011，30（7）：429-434.

[7] 曹海鵬，衛(wèi)若鵬.關(guān)于水產(chǎn)養(yǎng)殖動物水霉病防治的探討[J].當(dāng)代水產(chǎn)，2011，36（4）：76-78.

[8] BRUIJIN I D， BELMONTE R， ANDERSON V L， et al. Immune gene expression in trout cell lines infected with the fish pathogenic oomycete Saprolegnia parasitica[J]. Dev Comp Immunol， 2012，38（1）：44-54.

[9] BELMONTE R，WANG T，DUNCAN G J，et al.Role of pathogen-derived cell wall carbohydrates and prostaglandin E2 in immune response and suppression of fish immunity by the oomycete Saprolegnia parasitica[J]. Infection and Immunity， 2014， 82（11）： 4518-4529.

[10] CICCAQLIONE A R， MARCANTONIO， TRITARELLI E， et al. Activation of the ER stress gene gadd153 by hepatitis C virus sensitizes cells to oxidant injury[J]. Virus Research，2007， 126（1-2）： 128-138.

[11] GOODY R J， HOYT C C， TYLER K L. Reovirus infection of the CNS enhances iNOS expression in areas of virus-induced injury[J]. Exp Neurol， 2005， 195： 379-390.

[12] 俞卓偉，保志軍，阮清偉，等.氧化應(yīng)激-炎癥-衰老及其與ApoE基因相關(guān)性研究進展[J].生理學(xué)報，2013，65（3）：338-346.

[13] BHIMARAJ K， TANQ W H. Role of oxidative stress in disease progression in Stage B， a pre-cursor of heart failure[J]. Heart Fail Clin， 2012， 8（1）： 101-111.

[14] FUJII H， NAKAI K， FUKAGAWA M. Role of oxidative stress and indoxyl sulfate in progression of cardiovascular disease in chronic kidney disease[J]. Ther Apher Dial， 2011， 15（2）：125-128.

[15] BOLFA PF， LEROUX C， PINTEA A， et al. Oxidant-antioxidant imbalance in horses infected with equine infectious anaemia virus[J]. The Veterinary Journal， 2012， 192（3）： 449-454.

[16] VLAHOS R， STAMBAS J， SELEMIDIS S. Suppressing production of reactive oxygen species （ROS） for influenza A virus therapy[J]. Trends Pharmacol Sci， 2012， 33（1）： 3-8.

[17] 施志慧，史訓(xùn)龍，周海燕，等.病毒感染與氧化應(yīng)激的關(guān)系[J].復(fù)旦學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2012（1）：80-85.

[18] CHANG C W， SU Y C， HER G M， et al. Betanodavirus induces oxidative stress-mediated cell death that prevented by anti-oxidants and zfcatalase in fish cells[J]. PLoS ONE， 2011， 6（10）： e25853.

[19] JIA R， CAO L P， DU J L， et al. Grass carp reovirus induces apoptosis and oxidative stress in grass carp （Ctenopharyngodon idellus） kidney cell line[J]. Virus Research， 2014， 185（25）： 77-81.

[20] YANG Y， HUANG J， LI L， et al. Up-regulation of nuclear factor E2-related factor 2 upon SVCV infection[J]. Fish & Shellfish Immunology， 2014， 40（1）： 245-252.

[21] YUAN JF， SU N， WANG M， et al. Down-regulation of heme oxygenase-1 by SVCV infection[J]. Fish & Shellfish Immunology， 2012， 32（2）： 301-306.

[22] CLAUS C， SCHONEFELD K， HUBNER D， et al. Activity increase in respiratory chain complexes by rubella virus with marginal induction of oxidative stress[J]. Journal of Virology， 2013， 87（15）： 8481-8492.

[23] DESHMANE SL， MUKERJEE R， FAN S， et al. Activation of the oxidative stress pathway by HIV-1 Vpr leads to induction of hypoxia-inducible factor 1alpha expression[J]. J Biol Chem， 2009， （17）： 11364-11373.

[24] DANTAS A D S， DAY A， LKEH M， et al. Oxidative stress responses in the human fungal pathogen，Candida albicans[J]. Biomolecules， 2015， 5（1）： 142-165.

[25] SHELEF A， CHIN B. Effect of phenolic antioxidants on the mutagenicity of aflatoxin B1[J]. Applied and Environmental Microbiology， 1980， 40（6）： 1039-1043.

[26] LAI P F， CHENG C F， LIN H， et al. ATF3 protects against LPS-Induced inflammation in mice via inhibiting HMGB1 expression[J/OL]. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine： ECAM，http：//dx.doi.org/1o.1155/2013/716481， 2013， 20（4）： 301-301.

[27] 王秋林，王浩毅，王樹人.氧化應(yīng)激狀態(tài)的評價[J].中國病理生理雜志，2005，21（10）：2069-2074.

[28] 叢曉楠，王府民，邢少華，等.PCV2感染對仔豬抗氧化功能的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2011，43（9）：51-54.

[29] 易 勤，張誼芝.病毒感染患者的氧化應(yīng)激狀態(tài)的研究[J].國際皮膚性病學(xué)雜志，2004，30（6）：384-386.

[30] 王艷艷，姚俊杰，梁正其，等.Pb2+對建鯉幼魚抗氧化酶活性和總抗氧化能力的影響[J].淡水漁業(yè)，2013，43（1）：55-58.

[31] 謝飛舟，施冬云，肖 玲，等.2型糖尿病葡萄糖應(yīng)激與抗氧化代償?shù)淖兓痆J].復(fù)旦大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2009，36（1）：23-27.

[32] 陳興祥.PCV2感染、氧化應(yīng)激與硒的相互作用關(guān)系及其機理研究[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[33] 李 航.Nrf2-ARE信號通路對Ⅰ型糖尿病小鼠腎臟氧化應(yīng)激的影響及其作用機制的研究[D]. 石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)， 2010.

[34] YIN J，REN W，LIU G， et al.Birth oxidative stress and the development of an antioxidant system in newborn piglets[J].Free Radical Research，2013， 47（12）： 1027-1035.

[35] 田曉華.氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡[J].國外醫(yī)學(xué)（衛(wèi)生學(xué)分冊），1997（2）：302-305.

[36] 官 媛，鄭強蓀，單兆亮，等.炎癥和氧化應(yīng)激標(biāo)志物在犬心房顫動模型中的變化及意義[D].西安：第四軍醫(yī)大學(xué)，2010.

[37] 周 敬.慢性間歇低氧大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙及N-乙酰半胱氨酸干預(yù)作用的機制研究[D].上海：復(fù)旦大學(xué)， 2009.

[38] KARIN M，CHANG L， HONDA S， et al. Reactive oxygen species promote TNFα-induced death and sustained JNK activation by inhibiting MAP kinase phosphatases[J].Cell，2005，120：649-661.

[39] 楊紅英.實驗性糖尿病大鼠腦組織病變與氧化應(yīng)激關(guān)系的研究[D].昆明：昆明醫(yī)學(xué)院，2009.

[40] GAO J， KOSHIO S， ISHIKAWA M， et al. Effect of dietary oxidized fish oil and Vitamin C supplementation on growth performance and reduction of oxidative stress in red sea bream pagrus major[J]. Aquaculture Nutrition， 2012， 19（1）： 35-44.

（責(zé)任編輯 屠 晶）