小遠(yuǎn)志中三個(gè)黃酮醇苷*

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小遠(yuǎn)志中三個(gè)黃酮醇苷*

李強(qiáng)，耿圓圓，王軍民，華燕

(西南林業(yè)大學(xué)，云南昆明650224)

摘要：為了研究小遠(yuǎn)志中的黃酮類化學(xué)成分，通過D101大孔樹脂、硅膠、Rp-18、Sephadex LH-20及半制備高效液相等色譜方法對(duì)小遠(yuǎn)志乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離得到三個(gè)黃酮醇苷類化合物。根據(jù)現(xiàn)代波譜學(xué)(NMR和質(zhì)譜MS)技術(shù)，它們的結(jié)構(gòu)分別鑒定為polygalin B(1)，polygalin C(2)和polygalin D(3)。這些化合物均為首次從該植物中分離得到。

關(guān)鍵詞：遠(yuǎn)志屬；小遠(yuǎn)志；黃酮醇苷

小遠(yuǎn)志(PolygalasibiricaL.var.megalophaFr.)是遠(yuǎn)志科(Polygalaceae)遠(yuǎn)志屬植物，又名小萬年青、苦遠(yuǎn)志、小丁香。其生于向陽山坡、荒地或河畔，性苦、微辛、寒，具有清熱解毒和祛風(fēng)止痛之功效，主要治瘡癤、腫痛、小兒支氣管炎、肺炎等各種炎癥及胃痛、痢疾、跌打損傷等[1～3]。目前，從本屬植物中報(bào)道的主要成分為皂苷類[4]、黃酮類[5]、寡糖脂類[6]和生物堿類[7]化合物。同時(shí)藥理活性研究表明，這些化合物具有多方面的生物活性，比如抗氧化[5]、抗癡呆[8]、降血糖[9]和抗抑郁[10]等。然而，迄今為止并沒有小遠(yuǎn)志的化學(xué)成分和藥理活性方面的報(bào)道。因此，為了研究其黃酮類化學(xué)成分，對(duì)采自云南昭通的小遠(yuǎn)志全草的乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離得到3個(gè)黃酮醇苷類的化合物，它們分別鑒定為polygalin B(1)，polygalin C(2)和polygalin D(3)。以上化合物均為首次從該植物中分離得到。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料

植物全草于2012年8月采自云南昭通。由西南林業(yè)大學(xué)杜凡教授鑒定為小遠(yuǎn)志，標(biāo)本保存在西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院植物資源研究與利用教研室。

1.1.2主要儀器和試劑

1D NMR譜用Avance III 600兆超導(dǎo)核磁共振儀測(cè)定，以TMS為內(nèi)標(biāo)，化學(xué)位移δ用Hz表示，耦合常數(shù)J用Hz表示；MS由Bruker HTC/Esquire spectrometer質(zhì)譜儀測(cè)定；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪)；反相色譜用Bruker AM-681制備型中壓液相色譜；分析和半制備用Agilent 1100高效液相色譜儀，半制備色譜柱為Agilent公司的ZORBAX SB-C18反相柱。

薄層層析硅膠板GF254板、D101大孔樹脂和柱層析硅膠(80～100目，200～300目，300～400目及硅膠H)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；凝膠Sephadex LH-20(Amershm生科公司)；反相填充材料Rp-18(40～60 μm,Merck公司產(chǎn)品)。氯仿(工業(yè)純重蒸)；甲醇(工業(yè)純重蒸)；純凈水(娃哈哈公司)；乙腈(色譜純)。10 %硫酸-乙醇溶液。

1.2化學(xué)成分的提取分離

小遠(yuǎn)志干燥全草約5.0 kg，粉碎后用75 %的乙醇回流提取3次，第1次4 h，以后2次各2 h，合并提取液，減壓濃縮回收乙醇，得到浸膏1.7 kg。

1.7 kg浸膏用溫水混溶后，經(jīng)D101大孔吸附樹脂，分別用水、65 %乙醇及95 %乙醇依次洗脫。從65 %洗脫液減壓濃縮后得到480 g粗提樣品。用600 g(80～100目)硅膠拌樣，然后用3.4 kg硅膠(200～300目)干法裝柱，用氯仿-甲醇(1：0→0：1)梯度洗脫后得到8個(gè)組分(Fr.1-8)。

Fr.2(56 g)經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇9：1→0：1)洗脫后得到3個(gè)組分A，B和C。選取組分B(5 g)經(jīng)Rp-18(甲醇-水30：70→70：30)洗脫后得到8個(gè)部分，B5部分(30 mg)經(jīng)過凝膠Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1：1)純化后，再經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水(29：71，v/v)為流動(dòng)相，得到化合物1(4.3 mg)和2(4.5 mg)。B6部分(12 mg)反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析和Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1：1)純化后得到化合物3(3.0 mg)。

2結(jié)果與分析

從小遠(yuǎn)志中分離得到3個(gè)化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1　化合物1-3的化學(xué)結(jié)構(gòu)

化合物1黃色無定型粉末；分子式C28H32O15；ESI-MSm/z:607[M-H]-；1H-NMR(Pyridine-d5,600 MHz)δ:8.25(1H，d，J=9.0 Hz，H-2′)，8.25(1H，d，J=9.0 Hz，H-6′)，7.07(1H，d，J=9.0 Hz，H-3′)，7.07(1H，d，J=9.0 Hz，H-5′),6.74(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.37(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.64(1H,d,J=7.0 Hz,Gal-H-1),5.33(1H,s,Api-H-1),3.87(3H,s,4′-OMe),3.86(3H,s,7-OMe)；13C-NMR(DMSO-d6,150 MHz)δ：178.7(s,C-4),165.6(s,C-7),162.3(s,C-4′),161.8(s,C-5),156.9(s,C-9),156.3(s,C-2),133.7(s,C-3),131.4(s,C-2′),131.4(s,C-6′),122.9(s,C-1′),114.0(s,C-3′),114.0(s,C-5′),110.6(d,Api-C-1),106.2(s,C-10)，98.2(s，C-6)，80.7(d，Api-C-3)，77.9(d，Api-C-2),76.6(d,Gal-C-2),75.7(t,Api-C-4),75.4(d,Gal-C-3),69.9(d,Gal-C-4),66.4(t,Api-C-5),61.5(t,Gal-C-6),55.8(q,7-OMe),55.1(q,4′-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故該化合物鑒定為polygalin B(3,5-二羥基-7,4′-二甲氧基黃酮-3-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷)。

化合物2黃色無定形粉末；分子式C28H32O16；ESI-MSm/z:647[M+Na]+；1H-NMR(DMSO-d6,600 MHz)δ:7.91(1H,dd,J=9.0,2.0 Hz,H-6′),7.57(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),6.99(1H,d,J=9.0 Hz,H-5′),6.71(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.37(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.62(1H,d,J=8.0 Hz,Gal-H-1),5.32(1H,d,J=1.0 Hz,Api-H-1),3.88(3H,s,4′-OMe),3.87(3H,s,7-OMe)；13C-NMR(DMSO-d6,150 MHz)δ:177.5(s,C-4),165.1(s,C-7),160.9(s,C-5),156.1(s,C-9),155.6(s,C-2),150.1(s,C-4′),146.0(s,C-3′),133.8(s,C-3),122.5(s,C-6′),122.1(s,C-1′),115.4(s,C-2′),111.2(s,C-5′),108.7(d,Api-C-1),105.0(s,C-10),98.9(d,Gal-C-1),97.8(s,C-6),92.0(s,C-8),79.2(d,Api-C-3),76.0(d,Api-C-2),75.7(t,Gal-C-5),74.8(d,Gal-C-2),73.8(t,Api-C-4),73.7(d,Gal-C-3),68.2(d,Gal-C-5),64.3(t,Api-C-5),60.0(t,Gal-C-6),56.1(q,7-OMe)和55.6(q,4′-OMe)。以上波普數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故該化合物鑒定為polygalin C(3,5,3′-三羥基-7,4′-二甲氧基黃酮-3-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷)。

化合物3黃色無定型粉末；分子式C28H32O16;ESI-MSm/z:625[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6,600 MHz)δ:7.82(1H,dd,J=9.0,2.0 Hz,H-6′),7.59(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.03(1H,d,J=9.0 Hz,H-5′),6.72(1H,d,J=2.5 Hz,H-8),6.38(1H,d,J=2.5 Hz,H-6),3.88(3H,s,4′-OMe),3.87(3H,s,7-OMe),5.63(1H,d,J=8.0 Hz,Glc-H-1)；13C-NMR(DMSO-d6,150 MHz)δ:177.8(s,C-4),165.1(s,C-7),161.0(s,C-5),156.2(s,C-9),155.7(s,C-2),150.1(s,C-4′),145.0(s,C-3′),133.7(s,C-3),122.5(s,C-6′),121.8(s,C-1′),115.5(s,C-2′),111.1(s,C-5′),108.6(d,Api-C-1),105.0(s,C-10),98.5(d,Glc-C-1),97.8(s,C-6),92.1(s,C-8),79.2(d,Api-C-3),77.5(d,Glc-C-2),77.0(d,Glc-C-3,5),76.1(d,Api-C-2),73.9(t,Api-C-4),70.2(d,Glc-C-4),64.2(t,Api-C-5),60.8(t,Glc-C-6),56.1(q,7-OMe),55.6(q,4′-OMe)。

以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故該化合物鑒定為polygalin D(3,5,3′-三羥基-7,4′-二甲氧基黃酮-3-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷)。

3結(jié)論與討論

通過多種分離材料和分離方法，結(jié)合現(xiàn)代波譜學(xué)技術(shù)，從小遠(yuǎn)志的全草中分離并鑒定了3個(gè)黃酮醇苷類化合物，即polygalin B,polygalin C,polygalins D(1-3)。該類化合物在遠(yuǎn)志屬植物報(bào)道較少，故該研究初步詮釋了小遠(yuǎn)志的黃酮類成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)也為該植物的合理利用提供一定的理論基礎(chǔ)。鑒于遠(yuǎn)志屬植物藥理活性的廣泛性和多樣性，本實(shí)驗(yàn)所得化合成分的生物活性仍需進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1985.

[2]羅獻(xiàn)瑞.實(shí)用中草藥彩色圖集[M].廣州:廣東科技出版社,1995.

[3]徐國(guó)鈞.中草藥彩色圖譜[M].福州:福建科技出版社,1989.

[4]歐陽明安,楊崇仁,汪漢卿.黃花遠(yuǎn)志三萜皂苷成分研究[J].中草藥,1999,30(12):881-887.

[5]SHI Tian-xing,LI Yu-guang,JANG Yong,etal.Isolation of flavonoids from the aerial parts ofPolygalatenuifoliawilld.and their antioxidant activities[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences,2013,22 (1):36-39.

[6]姜勇,劉蕾,屠鵬飛.遠(yuǎn)志的化學(xué)成分研究III[J].中國(guó)天然藥物,2003,1 (3):142-143.

[7]ZHANG Wei-dong,LI Ting-zhao,LIU Run-hui,etal.A new cerebroside fromPolygalajaponica[J].Fitoterapia,2006,77(4):336-337.

[8]Ikeya Y,Takeda S,Tunakawa M,etal.Cognitive improvingand cerebral protective effects of acylated oligosaccharides inPolygalatenuifolia[J].Biol Pharm Bull,2004,27(7):1081-1085.

[9]Kako M,Miura T,Nishiyma Y,etal.Hypoglycemic effect of rhizomes ofPolygalasenegain normal and diabetic mice and its main component,the titerpenoid glycoside senegin II[J].Planta Medica,1996,62(5):440-443.

[10]HU Ying,LIAO Hong-Bo,GUO Dai-hong,etal.Antidepressant-like effects of 3,6’-disinapoyl sucrose on hippocampal neuronal plasticity and neurotrophic signal pathway in chronically mildstressed rats [J].Neurochem Int,2010,56(3):461-465.

[11]LI Ting-zhao,ZHANG Wei-dong,LIU Run-hui,etal.New flavonol glycosides and new xanthone fromPolygalajaponica[J].Journal of Asian Natural Products Research,2006,8(5):401-409.

[12]SONG Yue-lin,ZHOU Guan-shen,ZHOU Si-xiang,etal.Polygalins D-G,four new flavonol glycosides from the aerial parts ofPolygalasibiricaL.(Polygalacease) [J].Natural Product Research,2013,27(13):1220-1227.

[上接第61頁(yè)]

[5]Dick CA，Buenrostro J，Butler T，etal.Arctic Mustard Flower Color Polymorphism Controlled by Petal-Specific down regulation at the Threshold of the Anthocyanin Biosynthetic Pathway[J].PLOS ONE，2011，6(4):18230-18241.

[6]繆福俊，陳劍，孫浩，等.七彩紅竹二氫黃酮醇4-還原酶基因IhDFR1的克隆及表達(dá)分析[J].植物生理學(xué)報(bào)，2014，50(4):447-452.

[7]何聰，劉蕾，董銀卯，等.竹子木質(zhì)素合成酶基因克隆與分析[J].西北植物學(xué)報(bào)，2011，31(2):273-279.

[8]趙文軍，張迪，柴友榮，等.原花青素的生物合成途徑功能基因和代謝工程[J].植物生理學(xué)通訊，2009，28(1):97-105.

[9]符紅艷，于曉英，廖禎妮.觀賞植物DFR基因的研究進(jìn)展[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，18(6):14-19.

[10]李波，梁穎，柴友榮.植物肉桂酰輔酶A還原酶(CCR)基因的研究進(jìn)展[J].分子植物育種，2006，4(3):55-65.

[11]劉娟，馮群芳，張杰.二氫黃酮醇4-還原酶基因(DFR)與花色的修飾[J].植物生理學(xué)報(bào)，2005，41(6):715-719.

[12]宋恩慧，蔡誠(chéng)，魏國(guó)，等.RNA干涉培育低木質(zhì)素楊樹[J].林業(yè)科學(xué)，2010，46(2):39-44.

[13]Rest B，Danoun S，Boudet A M，etal.Down-regulation of cinnamoyl-CoA reductase in tomato (SolanumlycopersicumL.) induces dramatic changes in soluble phenolic pools[J].Journal of Experimental Botany，2006，57(6):1399-1411.

[14]陳塵，王政軍，曹鑫林，等.丹參肉桂酰輔酶A還原酶基因克隆與生物信息學(xué)分析[J].西北植物學(xué)報(bào)，2011，31(10):1963-1968.

Three Flavonol Glycosides from Polygala sibirica var.megalopha

LI Qiang,GENG Yuan-yuan,WANG Jun-min,HUA Yan

(Southwest Forestry University,Kunming Yunnan 650224,P.R.China)

Abstract:In order to study the flavone constituents of Polygala sibirica,a phytochemical investigation on its EtOH extract was carried out.On the basis of various chromatography methods，namely D101 macroporous resin,silica gel,Rp-18,Sephadex LH-20,and semi-HPLC,3 flavonol glycosides were obtained.Their structures were identified as polygalin B (1),polygalin C(2),and polygalin D(3) through spectroscopic analysis (NMR and MS data).All these compounds were isolated from P.Sibirica for the first time.

Key words:Polygala L.;Polygala sibirica var.megalopha;flavonol glycoside

中圖分類號(hào)：R 284

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-8246(2015)05-0072-04

通訊作者簡(jiǎn)介：華燕 (1968-),女，教授，博士生導(dǎo)師，博士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)的教學(xué)與研究工作。E-mail：1026535163@qq.com

作者簡(jiǎn)介：第一李強(qiáng) (1989-),男， 碩士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)方面的學(xué)習(xí)與研究。E-mail：312270163@qq.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (No.31260083)。

收稿日期：*2015-04-01

doi10.16473/j.cnki.xblykx1972.2015.05.014