• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    UPLC-IDMS法測(cè)定配方奶粉中的生物素含量

    2015-12-13 07:02:25梁敏慧崔亞娟全霞陳兆天李菁菁
    食品科學(xué) 2015年4期
    關(guān)鍵詞:生物素同位素奶粉

    梁敏慧,崔亞娟*,葉 潤,李 全霞,陳兆天,李菁菁,李 東

    (1.北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院,北京 100124;2.北京市營養(yǎng)源研究所,北京 100069)

    UPLC-IDMS法測(cè)定配方奶粉中的生物素含量

    梁敏慧1,崔亞娟2,*,葉 潤2,李 全霞2,陳兆天2,李菁菁2,李 東2

    (1.北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院,北京 100124;2.北京市營養(yǎng)源研究所,北京 100069)

    建立一種超高效液相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜法測(cè)定配方奶粉中生物素含量的方法。樣品中加入生物素-D2作為同位素內(nèi)標(biāo),經(jīng)水超聲提取后,以含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸銨溶液和乙腈作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,采用電噴霧正離子模式、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行定性定量分析。結(jié)果表明:生物素在1~50 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,線性范圍內(nèi)對(duì)已知生物素含量樣品3 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)添加水平的平均回收率為89.6%~93.1%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.71%~4.33%。方法檢出限為0.6 μg/100 g,定量限為1.5 μg/100 g,該方法具有靈敏度高、重復(fù)性好、分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn),可以滿足配方奶粉中生物素含量的測(cè)定要求。

    生物素;超高效液相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜;奶粉

    生物素又叫做VB7,是一種水溶性B族維生素。生物素是構(gòu)成羧化酶的重要輔酶[1],參與人體內(nèi)脂肪、糖類和氨基酸的代謝[2],對(duì)于維持機(jī)體正常生理功能有重要的作用。其長期攝入不足會(huì)導(dǎo)致免疫、代謝、基因表達(dá)方面的疾病[3-7]。配方奶粉是嬰幼兒除母乳外主要的營養(yǎng)來源,因此對(duì)其中生物素的檢測(cè)監(jiān)督是十分必要的。

    目前,配方奶粉中生物素的測(cè)定方法主要是微生物法[8-10]。微生物法也是我國分析嬰幼兒食品和乳品中生物素的國標(biāo)分析方法,其檢測(cè)靈敏度高,但是實(shí)驗(yàn)周期長、重復(fù)性差,對(duì)實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境有比較嚴(yán)格的要求。其他常用于生物素檢測(cè)的分析方法還包括生物傳感器法、酶聯(lián)免疫法、高效液相色譜法[1,11-12]等。超高效液相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜(ultra performance liquid chromatographyisotope dilution mass spectrometry,UPLC-IDMS)技術(shù)是一種新型的儀器分析手段,它將色譜良好的分離能力與質(zhì)譜的高選擇性結(jié)合起來,具有靈敏性高、選擇性好、分析速度快并且分析結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),近年來在食品分析中得到了廣泛的應(yīng)用[13-14]。而同位素稀釋技術(shù)[15-16]通過加入穩(wěn)定同位素標(biāo)記物,可有效消除基質(zhì)效應(yīng)及處理過程帶來的較大偏差,盡可能保證了分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。近年來,國內(nèi)已有報(bào)道利用高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定配方奶粉中的生物素[17-19],但采用同位素稀釋法分析測(cè)定奶粉中生物素含量的方法尚未見報(bào)道。

    本實(shí)驗(yàn)采用可以抵消樣品處理過程中損失的同位素稀釋質(zhì)譜法,同時(shí)結(jié)合UPLC-串聯(lián)質(zhì)譜良好的分離能力及高選擇性,對(duì)配方奶粉中的生物素進(jìn)行了定性和定量分析,建立一種結(jié)果準(zhǔn)確、分析速度快、樣品處理簡單的檢測(cè)方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    配方奶粉樣品(樣品A~E、a~e) 市購。

    生物素標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98.0%) 美國Supelco公司;生物素-D2標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.5%) 美國Iso Sciences公司;乙酸銨、甲酸(均為色譜純) 美國Sigma公司;乙腈(色譜純) 美國Fisher公司;硫酸、鹽酸(均為分析純) 北京化學(xué)試劑廠;實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Acquity@UPLC-Xevo TQ型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國Waters公司;BS224S型分析天平德國Sartorius公司。

    1.3 方法

    1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制

    生物素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(100 μg/mL):精確稱取生物素1.0 mg,用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液溶解至10 mL,搖勻,密封、避光保存。生物素-D2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(100 μg/mL):稱取生物素-D21.0 mg,用體積分?jǐn)?shù)50%甲醇溶液溶解至10 mL,搖勻,密封、避光保存。臨用前根據(jù)需要用水稀釋成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

    1.3.2 樣品處理?xiàng)l件的優(yōu)化

    根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)[20-21]和標(biāo)準(zhǔn)[22]選取奶粉經(jīng)0.5 mol/L硫酸、1.0 mol/L鹽酸溶解后在121 ℃,1 MPa條件下水解30 min和水溶解后超聲10 min作為樣品提取方法,考察不同提取方法的提取效果。并通過實(shí)驗(yàn)比較三氯甲烷、調(diào)pH值、乙腈和高氯酸去除蛋白質(zhì)的效果。

    確定樣品處理方法后稱取奶粉樣品7 g(精確至0.000 1 g)于50 mL錐形瓶中,加入與樣品中生物素含量相近的生物素-D2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;瓶中加入30 mL溫水振搖溶解后,超聲提取10 min。冷卻至室溫,用5 mol/L硫酸調(diào)pH值到1.7,再用10 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值到4.6,溶液轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中,用水沖洗3 次,合并溶液于容量瓶中,定容混勻后過濾,濾液過0.2 μm聚丙烯濾膜濾膜,待上機(jī)分析。

    1.3.3 色譜條件優(yōu)化

    色譜柱:實(shí)驗(yàn)比較BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)和Acquity@HSS T3柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm)分離效果的差異;流速0.4 mL/min;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量10 μL;流動(dòng)相A:含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸的10 mmol/L乙酸銨水溶液;流動(dòng)相B:乙腈。梯度洗脫,洗脫條件見表1。

    表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件Table1 Elution conditions of mobile phase

    1.3.4 質(zhì)譜條件優(yōu)化

    電噴霧離子源正離子模式;多反應(yīng)監(jiān)測(cè);毛細(xì)管電壓3 000 V;離子源溫度150 ℃;去溶劑氣溫度500 ℃;去溶劑氣流速(氮?dú)猓? 000 L/h;碰撞氣流速(氬氣)0.18 mL/min。

    在電噴霧源正離子檢測(cè)方式下,生物素的準(zhǔn)分子離子峰為[M+H]+峰。配制0.5 μg/mL的生物素標(biāo)準(zhǔn)溶液,調(diào)節(jié)各個(gè)參數(shù)得到響應(yīng)較強(qiáng)的[M+H]+母離子峰。然后對(duì)母離子進(jìn)行子離子掃描,調(diào)節(jié)碰撞能量,選擇響應(yīng)較高的2 個(gè)子離子作為定性定量離子。2 個(gè)離子中響應(yīng)高的作為定量離子,另一個(gè)作為定性離子。優(yōu)化確定適合本實(shí)驗(yàn)的質(zhì)譜條件。

    1.3.5 方法學(xué)實(shí)驗(yàn)

    1.3.5.1 線性范圍

    準(zhǔn)確吸取生物素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,添加與試樣中生物素含量相近的生物素同位素內(nèi)標(biāo)溶液,用水配制成質(zhì)量濃度為1、5、10、20、30、40、50 ng/mL的生物素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)樣分析,確定生物素的線性范圍。

    1.3.5.2 檢出限與定量限

    選擇木薯淀粉作為空白樣品(經(jīng)測(cè)定不含生物素),對(duì)其進(jìn)行不同水平的加標(biāo)實(shí)驗(yàn),樣品進(jìn)行前處理后,以RSN為3和RSN為10作為生物素的檢出限和定量限。

    1.3.5.3 精密度與回收率

    向已知生物素含量的奶粉樣品中分別添加3 個(gè)不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn),各個(gè)添加水平平行測(cè)定6 次,計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,考察方法的精密度與回收率。

    1.3.5.4 與微生物方法比對(duì)

    選取5 種市購的配方奶粉(樣品A~E),每種樣品平均分成2 份,一份采用微生物法測(cè)定其中的生物素含量,另一份采用UPLC-IDMS測(cè)定其中的生物素含量,每份平行測(cè)定6 次,計(jì)算奶粉中生物素含量,通過2 種方法結(jié)果的比較驗(yàn)證UPLC-IDMS方法的可行性與準(zhǔn)確性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 樣品前處理?xiàng)l件優(yōu)化

    表2 不同前處理方法結(jié)果Table2 Comparison of different sample pretreatment procedures

    不同提取方法的提取效果見表2。結(jié)果顯示,3 種方法最終測(cè)定值并無顯著差異,都可以獲得較好的結(jié)果。但用水超聲提取處理樣品后,儀器峰面積響應(yīng)值要比另外2 種方法高出很多,這可能是由于酸對(duì)生物素及其內(nèi)標(biāo)的離子抑制作用而導(dǎo)致了儀器響應(yīng)值的顯著降低??紤]到分析的準(zhǔn)確性,選擇使用水超聲處理作為樣品的提取方法。

    配方奶粉中含有大量的蛋白質(zhì)存在降低生物素的離子化效率風(fēng)險(xiǎn),從而影響分析的準(zhǔn)確性,并縮短色譜柱的使用壽命[18]。實(shí)驗(yàn)通過比較三氯甲烷、調(diào)pH值、乙腈和高氯酸去除蛋白質(zhì)的效果,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三氯甲烷、調(diào)pH值以及高氯酸法沉淀蛋白效果較好,可以獲得較為澄清的溶液,回收率均為90%以上。但考慮到色譜柱適合的pH值范圍以及不同樣品在水中的pH值差異會(huì)影響生物素在色譜柱上的保留時(shí)間,因此選擇調(diào)pH值法作為去除蛋白質(zhì)的方法。

    2.2 色譜條件優(yōu)化

    實(shí)驗(yàn)中2 種色譜柱的分離效果差異見圖1。C18柱的保留時(shí)間比T3柱提前,2 種柱子對(duì)生物素都有良好的分離效果,但T3柱的響應(yīng)值(6.28×106)要好于C18柱(3.24×106)的響應(yīng)值,因此實(shí)驗(yàn)選擇T3柱。

    2.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化

    質(zhì)譜條件優(yōu)化后確定的生物素定性和定量離子對(duì)分別為m/z 245.1>97.0和m/z 245.1>227.0,生物素-D2的定性和定量離子對(duì)分別為m/z 247.1>99.0和m/z 247.1>229.0。生物素及其同位素的母離子、定量定性離子、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見表3。生物素及其同位素-D2的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖見圖2,子離子掃描圖見圖3。

    表3 生物素及其同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)Table3 Instrumental parameters of biotin and biotin-D

    圖2 生物素及生物素--DD2的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖Fig.2 MRM chromatograms of biotin and biotin-D2

    圖3 生物素和生物素--DD2的離子掃描質(zhì)譜圖Fig.3 Mass spectra of biotin and biotin-D2

    2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

    2.4.1 線性范圍

    以生物素與生物素內(nèi)標(biāo)峰面積比(A生物素/A生物素-D2)和同位素質(zhì)量濃度的乘積為 縱坐標(biāo),生物素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果如圖4所示。生物素在1~50 ng/mL范圍內(nèi),線性回歸方程為Y=1.826 97X+ 0.049 075 6,相關(guān)系數(shù)r大于0.999 8,線性關(guān)系良好,十分適合做定量分析。

    圖4 生物素標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 The calibration curve of biotin

    2.4.2 檢出限與定量限

    以RSN為3作為檢出限,RSN為10作為定量限,得到方法的檢出限為0.4 ng/mL,定量限為1.0 ng/mL。當(dāng)奶粉質(zhì)量為7 g,定容體積為100 mL時(shí),折算成奶粉含量分別為0.6 μg/100 g和1.5 μg/100 g,表明該方法可對(duì)生物素含量較少的奶粉樣品進(jìn)行定性定量分析。

    2.4.3 精密度與回收率

    向奶粉樣品中分別添加3 個(gè)不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn),各個(gè)水平平行測(cè)定6次,計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,結(jié)果見表4。生物素3 個(gè)水平的加標(biāo)回收率在89.6%~93.1%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.71%~4.33%,表明該方法比較準(zhǔn)確,適用于奶粉中生物素的定性定量分析。

    表4 生物素加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table4 Results of recovery and relative standard deviation

    2.4.4 與微生物方法的比對(duì)

    微生物法是我國測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中生物素的國標(biāo)分析方法。實(shí)驗(yàn)比較了UPLC-IDMS法與微生物法之間的差異來驗(yàn)證所建立方法的準(zhǔn)確性。對(duì)5 種配方奶粉樣品同時(shí)做了2 種方法的比對(duì)實(shí)驗(yàn),檢測(cè)結(jié)果見表5。 利用SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果做非參數(shù)Mann-Whitney秩和檢驗(yàn),分析2 種方法測(cè)定結(jié)果之間差異是否顯著:得出P值為0.705(P>0.05),表明2 種方法測(cè)定結(jié)果無顯著差異,證明了實(shí)驗(yàn)建立的方法可以用于配方奶粉中生物素的檢測(cè)。

    表5 微生物法和UPLC-IDMS法對(duì)照實(shí)驗(yàn)Table 5 Comparison of microbiological method and UPLC-IDMS method

    2.5 實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果

    表6 配方奶粉中生物素UPLC-IDMS測(cè)定結(jié)果Table 6 Analytical results for milk powder samples by UPLC-IDMS

    利用所建立的方法對(duì)市售的5 種配方奶粉(樣品a~e)進(jìn)行測(cè)定,每個(gè)樣品平行測(cè)定3 次,計(jì)算平均值,結(jié)果見表6??梢钥闯?,5 種配方奶粉中生物素含量均大于8 μg/100 g的,符合國家標(biāo)準(zhǔn)[23]。

    3 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)建立了一種可以快速檢測(cè)配方奶粉中的生物素含量的方法。奶粉中生物素含量較低且基質(zhì)復(fù)雜,通過加入同位素內(nèi)標(biāo)可消除實(shí)驗(yàn)過程中基質(zhì)效應(yīng)的影響和處理過程生物素?fù)p失帶來的偏差,同時(shí)利用質(zhì)譜的高選擇性,簡化了實(shí)驗(yàn)步驟,獲得了穩(wěn)定良好的測(cè)定結(jié)果。該方法操作過程簡單,分析周期短、靈敏度高、重復(fù)性好,適合奶粉中生物素的分析研究,必將受到廣泛的重視。

    [1] KERGARAVAT S V, GOMEZ G A, FABIANO S N, et al. Biotin determination in food supplements by an electrochemical magneto biosensor[J]. Talanta, 2012, 97: 484-490.

    [2] ZEMPLENI J, MOCK D. Biotin biochemistry and human requirements[ J]. The Journal of Nutritional Biochemistry, 1999, 10(3): 128-138.

    [3] TAKECHI R, TANIGUCHI A, EBARA S, et al. Biotin deficiency affects the proliferation of human embryonic palatal mesenchymal cells in culture[J]. The Journal of Nutrition, 2008, 138( 4): 680-684.

    [4] BAEZ-SALDANA A, GUTIERREZ-OSPINA G, CHIMALMONROY J, et al. Biotin deficiency in mice is associated with decreased serum availability of insulin-like growth factor-Ⅰ[J]. European J ournal of Nutrition, 2009, 48(3): 137-144.

    [5] BAEZ-SALDANA A, DIAZ G, ESPINOZA B, et al. Biotin deficiency induces changes in subpopulations of spleen lymphocytes in mice[J]. The American Journal of Clinical Nutrition, 1998, 67(3): 431-437.

    [6] HERNANDEZ-VAZQUEZ A, OCHOA-RUIZ E, IBARRAGONZALEZ I, et al. Temporal development of genetic and metabolic effects of biotin deprivation. A searc h for the optimum time to study a vi tamin deficiency[J]. Mo lecular Genetics and Metabolism, 2012, 107(3): 345-351.

    [7] WATANABLE T, ENDO A. Teratogenic effects of maternal bi otin deficiency on mouse embryos examined at midges tation[J]. Teratology, 1990, 42(3): 295-300.

    [8] 湯水平, 李冰, 彭燦, 等. 微 生物法測(cè)定嬰幼兒配 方乳粉中游離生物素含量的研究[J]. 食品與機(jī)械, 2008, 24(5): 96-98.

    [9] 王志偉. 嬰幼兒乳粉中生 物素含量的測(cè)定研究[J]. 包裝與食品機(jī)械, 2013, 31(3): 66-68.

    [10] YIN Xiaoh ong, YANG Jinbao, ZHANG Xiaoyu. Determination method for biotin in infants formula food[J]. China Dairy Industry, 2002, 30(5): 117-119.

    [11] INDYK H E, EVANS E A, CASELUNGHE M C B, et al. Determination of biotin and folate in infant fo rmula and milk by optical biosensor-based immunoassay[J]. Journal of AOAC International, 2000, 83(5): 1141-1148.

    [12] THOMPSON L B, SCHMITZ D J, PAN S hangjing. Determination of biotin by high-performance liquid chromatography in infant formula, medical nutritional products, and vitamin premixes[J]. Journal of AOAC International, 2006, 89(6): 1515-1518.

    [13] 孫良 娟, 蔡泓. 液質(zhì)聯(lián)用儀離子源與質(zhì)量分析器的類型及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 檢驗(yàn)檢疫科學(xué), 2008, 18(2): 69-72.

    [14] 周春紅, 朱書強(qiáng), 王榮. LC-MS/MS在食品安全分析中的應(yīng)用[J]. 食品工業(yè)科技, 2011, 32(2): 124.

    [15] DEBIEVRE P. Isotope dilution mass spectrometry as a primary method of analysis[J]. Analytical Proceedings, 1993, 30(8): 328-333.

    [16] 劉衛(wèi)霞, 羅勇, 楊維成. 有機(jī)同位素稀釋質(zhì)譜法在食品安全分析中的應(yīng)用[J]. 化學(xué)世界, 2011(3): 184-187.

    [17] 王鳳玲, 劉愛國, 孫佳佳, 等. 高效液相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中葉酸, VB12和生物素[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(22): 269-272.

    [18] 吳宏, 林玉宙, 黃彩云, 等. 免疫親和柱凈化/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)嬰幼兒配方乳粉中生物素含量[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2013, 32(9): 1135-1138.

    [19] 郎昭濱, 程綱領(lǐng), 馬世波. 嬰幼兒配方食品和乳粉中串聯(lián)四極桿質(zhì)譜的檢測(cè)方法[J]. 中國乳品工業(yè), 2009, 37(9): 39-42.

    [20] 王一紅, 馮家力, 潘振球, 等. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析10 種水溶性維生素[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2007, 17(7): 1160-1162.

    [21] BALL G F M. Vitamins in foods analysis, bioavailability, and stability[M]. New York: Taylor & Francis, 2006: 328-329.

    [22] 衛(wèi)生部. GB 5413.19—2010 嬰幼兒食品和乳品中游離生物素的測(cè)定[S]. 北京: 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2010.

    [23] 衛(wèi)生部. GB 10767—1997 嬰幼兒配方粉及嬰幼兒補(bǔ)充谷粉通用技術(shù)條件[S]. 北京: 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 1997.

    Determination of Biotin in Milk Powder by Using Ultra Performance Liquid Chromatography-Isotope Dilution Mass Spectrometry

    LIANG Minhui1, CUI Yajuan2,*, YE Run2, LI Quanxia2, CHEN Zhaotian2, LI Jingjing2, LI Dong2
    (1. College of Life Science and Bioengineering, Beijing University of Technology, Beijing 100124, China; 2. Beijing Research Institute for Nutritional Resources, Beijing 100069, China)

    An ultra performance liquid chromatography-isotope dilution mass spectrometry (UPLC-IDMS) method has been developed for the determination of biotin in milk powder. After spiking biotin-D2as an internal standard, samples were extracted with water. The mobile phase consisted of 10 mmol/L ammonium acetate with 0.1% f ormic acid and acetonitrile. The biotin was identified under multiple-reaction monitoring (MRM) mode and quantified by an internal standard method. The results showed a good linear calibration in the range of 1–50 ng/mL, the recoveries at three spiked levels and the relative standard deviations were 89.6%–93.1% and 1.71%–4.33%, respectively. T he limit of detection and quantification for biotin were 0.6 μg/100 g and 1.5 μg/100 g, respectively. This method is sensitive, time saving, and accurate for the determination of biotin in milk powder.

    biotin; ultra performance liquid chromatography-isotope dilution mass spectrometry (UPLC-IDMS); milk powder

    TS207.3

    A

    1002-6630(2015)04-0136-05

    10.7506/spkx1002-6630-201504026

    2014-07-02

    北京市科委科技新星計(jì)劃項(xiàng)目(2011059);衛(wèi)生部行業(yè)科研專項(xiàng)(201202012)

    梁敏慧(1992—),女,碩士研究生,研究方向?yàn)槭称贩治觥-mail:lmh29301126@163.com

    *通信作者:崔亞娟(1979—),女,副研究員,博士,研究方向?yàn)槭称贩治?。E-mail:cuiyj66@163.com

    猜你喜歡
    生物素同位素奶粉
    生物素在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的應(yīng)用
    奶粉危機(jī)
    防治脫發(fā)的生物素
    妹妹的奶粉錢
    你家奶粉只能沖著喝?這些媽媽們把奶粉做成了這個(gè)樣子!
    媽媽寶寶(2017年2期)2017-02-21 01:21:06
    新型生物素標(biāo)記的苦杏仁苷活性探針的合成
    生物素的營養(yǎng)功能及其在奶牛飼養(yǎng)中的應(yīng)用
    深空探測(cè)用同位素電源的研究進(jìn)展
    《同位素》(季刊)2015年征訂通知
    同位素(2014年3期)2014-06-13 08:22:28
    硼同位素分離工藝與生產(chǎn)技術(shù)
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:15
    人人澡人人妻人| .国产精品久久| av福利片在线| 久热这里只有精品99| 一本一本综合久久| 久久久精品94久久精品| 亚洲精品亚洲一区二区| 伦精品一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 免费观看的影片在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 这个男人来自地球电影免费观看 | 人妻少妇偷人精品九色| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 天美传媒精品一区二区| 观看美女的网站| 国产男人的电影天堂91| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | a级毛片免费高清观看在线播放| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 成人手机av| 成年人免费黄色播放视频| 日本欧美视频一区| 乱人伦中国视频| 久热久热在线精品观看| 最近手机中文字幕大全| 男女国产视频网站| 亚洲美女视频黄频| 国产精品无大码| 国产成人精品无人区| 色94色欧美一区二区| 国产免费又黄又爽又色| 18禁在线播放成人免费| 久久99精品国语久久久| 国产熟女欧美一区二区| 飞空精品影院首页| 欧美少妇被猛烈插入视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 男女高潮啪啪啪动态图| 久久久久久久久大av| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日本与韩国留学比较| 久久久国产精品麻豆| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲欧美一区二区三区国产| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 街头女战士在线观看网站| 欧美三级亚洲精品| 看十八女毛片水多多多| 日韩成人伦理影院| 免费少妇av软件| 国产高清三级在线| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产成人精品婷婷| 观看av在线不卡| 日本免费在线观看一区| 日本黄色日本黄色录像| 午夜视频国产福利| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产老妇伦熟女老妇高清| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 午夜免费鲁丝| 777米奇影视久久| 精品久久久久久电影网| 欧美精品一区二区免费开放| 久久99精品国语久久久| 免费高清在线观看视频在线观看| 在线天堂最新版资源| 亚洲经典国产精华液单| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久久久欧美国产精品| 中文字幕久久专区| 国产日韩欧美在线精品| 久久久国产欧美日韩av| 乱人伦中国视频| 国产精品一二三区在线看| 日本与韩国留学比较| 99国产精品免费福利视频| 亚洲色图综合在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久精品久久久久久久性| 国精品久久久久久国模美| 人人妻人人澡人人看| 少妇人妻久久综合中文| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久久国产欧美日韩av| 涩涩av久久男人的天堂| 久久人人爽人人片av| 下体分泌物呈黄色| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人影院久久| 国产精品人妻久久久影院| 少妇被粗大猛烈的视频| 制服诱惑二区| 久久久久久久久大av| 色哟哟·www| 99九九线精品视频在线观看视频| 一级a做视频免费观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 3wmmmm亚洲av在线观看| 男人操女人黄网站| 成人手机av| 日本午夜av视频| 国产精品一国产av| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产精品成人在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人精品福利久久| 不卡视频在线观看欧美| 麻豆成人av视频| 丝袜喷水一区| 亚洲三级黄色毛片| 97超碰精品成人国产| 免费看不卡的av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品久久久久久精品电影小说| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 免费观看的影片在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 18禁在线播放成人免费| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 欧美精品亚洲一区二区| 婷婷色综合www| 欧美日韩av久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久精品区二区三区| 亚洲人成网站在线播| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲综合精品二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 免费av中文字幕在线| 欧美日韩精品成人综合77777| 男女免费视频国产| 亚洲av欧美aⅴ国产| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 天天影视国产精品| 国产日韩欧美在线精品| 中文天堂在线官网| 亚洲第一av免费看| 在线观看免费视频网站a站| 国产不卡av网站在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 日本黄色日本黄色录像| 91精品三级在线观看| 午夜福利,免费看| 在线播放无遮挡| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品不卡视频一区二区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久久久人妻| 18禁动态无遮挡网站| 插阴视频在线观看视频| 在现免费观看毛片| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久久网色| 免费黄色在线免费观看| 性色av一级| 国产老妇伦熟女老妇高清| a 毛片基地| 成人二区视频| videos熟女内射| 赤兔流量卡办理| 免费看光身美女| 成人毛片a级毛片在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 七月丁香在线播放| 久久久久久久精品精品| 91精品伊人久久大香线蕉| 日韩欧美精品免费久久| 午夜老司机福利剧场| 最近2019中文字幕mv第一页| 特大巨黑吊av在线直播| 少妇精品久久久久久久| 成人综合一区亚洲| 考比视频在线观看| 少妇高潮的动态图| 男女免费视频国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 最近手机中文字幕大全| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 精品国产国语对白av| 日韩 亚洲 欧美在线| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品一区www在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲av免费高清在线观看| 高清不卡的av网站| 午夜老司机福利剧场| 亚洲色图综合在线观看| 中国国产av一级| 精品国产国语对白av| 日韩免费高清中文字幕av| a级毛片黄视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 熟女av电影| 精品熟女少妇av免费看| 久久99蜜桃精品久久| 色哟哟·www| 丰满少妇做爰视频| 国产精品久久久久久久久免| 久久久精品免费免费高清| 亚洲人成77777在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看 | 久久久亚洲精品成人影院| 中文天堂在线官网| 大香蕉久久成人网| 亚洲av成人精品一二三区| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲天堂av无毛| 在线观看三级黄色| xxxhd国产人妻xxx| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩一区二区视频免费看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产成人精品福利久久| 我的老师免费观看完整版| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 一区二区三区精品91| 人人澡人人妻人| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产免费又黄又爽又色| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 成人国产av品久久久| 韩国高清视频一区二区三区| 国产在线一区二区三区精| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 午夜福利网站1000一区二区三区| 精品国产一区二区久久| 久久久久久久精品精品| 国产黄色视频一区二区在线观看| 中文字幕制服av| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲av日韩在线播放| av免费在线看不卡| videossex国产| 中文字幕亚洲精品专区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 男女免费视频国产| 十分钟在线观看高清视频www| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品第二区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美最新免费一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产一区二区在线观看日韩| 日韩伦理黄色片| 一级二级三级毛片免费看| 国产精品女同一区二区软件| 一本大道久久a久久精品| 热99国产精品久久久久久7| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产亚洲一区二区精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产欧美亚洲国产| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| √禁漫天堂资源中文www| 2021少妇久久久久久久久久久| 新久久久久国产一级毛片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美日韩视频精品一区| 黑人猛操日本美女一级片| 黄色视频在线播放观看不卡| a级毛色黄片| 午夜福利视频精品| 日韩一区二区三区影片| 成人综合一区亚洲| 99国产精品免费福利视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 少妇的逼好多水| 欧美日韩av久久| 亚洲精品国产av蜜桃| 考比视频在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产一区二区在线观看av| 国产高清有码在线观看视频| 最近2019中文字幕mv第一页| h视频一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 国产一区二区三区av在线| 欧美另类一区| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲不卡免费看| 免费大片黄手机在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av在线app专区| 老司机影院毛片| 国产精品偷伦视频观看了| 97在线视频观看| 春色校园在线视频观看| 国产在线一区二区三区精| 亚洲精品美女久久av网站| 日韩人妻高清精品专区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 黄片播放在线免费| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品视频人人做人人爽| 老司机影院毛片| 中国三级夫妇交换| 一本久久精品| 久久精品国产a三级三级三级| 成人亚洲精品一区在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 久久鲁丝午夜福利片| 日本vs欧美在线观看视频| 国模一区二区三区四区视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 男的添女的下面高潮视频| 久久久精品94久久精品| 秋霞在线观看毛片| 久久久久国产网址| 亚洲怡红院男人天堂| 热99国产精品久久久久久7| 免费少妇av软件| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日本vs欧美在线观看视频| 中国国产av一级| 女性被躁到高潮视频| 亚洲av不卡在线观看| 考比视频在线观看| 亚洲成人av在线免费| 国产极品天堂在线| 日韩大片免费观看网站| 青青草视频在线视频观看| 一级黄片播放器| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久国产精品麻豆| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| a级毛色黄片| 免费大片黄手机在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 日韩免费高清中文字幕av| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品 国内视频| 制服人妻中文乱码| 亚洲av综合色区一区| 久久久久久久久久久免费av| 国产一区二区在线观看av| 国产在视频线精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 人成视频在线观看免费观看| 97在线视频观看| 下体分泌物呈黄色| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av二区三区四区| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲成人一二三区av| 99国产精品免费福利视频| 婷婷色综合大香蕉| 国产高清有码在线观看视频| 性色av一级| 国产一区二区三区综合在线观看 | 成人手机av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 看十八女毛片水多多多| 日本vs欧美在线观看视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 乱码一卡2卡4卡精品| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 激情五月婷婷亚洲| 秋霞在线观看毛片| 九草在线视频观看| 色吧在线观看| 在线 av 中文字幕| 国产成人午夜福利电影在线观看| 满18在线观看网站| 少妇的逼好多水| 人妻系列 视频| 久久久久国产网址| 亚州av有码| 久久久精品区二区三区| 免费av不卡在线播放| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品国产a三级三级三级| 两个人的视频大全免费| 国产视频首页在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 国产精品.久久久| 精品久久久久久电影网| 国产精品久久久久成人av| 午夜福利,免费看| 亚洲国产av新网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 午夜福利,免费看| 极品人妻少妇av视频| 国产亚洲精品久久久com| 久久久欧美国产精品| 99热国产这里只有精品6| 美女国产高潮福利片在线看| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲国产av影院在线观看| a级毛片黄视频| 色网站视频免费| 免费大片18禁| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一本一本综合久久| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一本色道久久久久久精品综合| 国产日韩欧美视频二区| 伦理电影大哥的女人| 国产成人精品婷婷| 自线自在国产av| 久久久亚洲精品成人影院| 好男人视频免费观看在线| a级片在线免费高清观看视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久久久人妻| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 日韩一区二区三区影片| 免费av不卡在线播放| 黑人猛操日本美女一级片| 飞空精品影院首页| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 一级片'在线观看视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 精品国产露脸久久av麻豆| 多毛熟女@视频| 中文字幕制服av| 制服丝袜香蕉在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 丁香六月天网| 久久99蜜桃精品久久| 一区二区三区乱码不卡18| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲综合色惰| 婷婷成人精品国产| 九九在线视频观看精品| 国产高清国产精品国产三级| 特大巨黑吊av在线直播| 久久精品人人爽人人爽视色| 2018国产大陆天天弄谢| 国产深夜福利视频在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 综合色丁香网| 久久久国产欧美日韩av| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲四区av| videosex国产| 黄片播放在线免费| 天天影视国产精品| 久久久久精品久久久久真实原创| a 毛片基地| 色94色欧美一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品一区二区三卡| 视频区图区小说| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲色图综合在线观看| 考比视频在线观看| 桃花免费在线播放| 国产69精品久久久久777片| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久久久久久精品精品| 男女无遮挡免费网站观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 最近的中文字幕免费完整| 久久人妻熟女aⅴ| av电影中文网址| 免费大片黄手机在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 成年av动漫网址| av播播在线观看一区| 久久久久精品性色| 在线天堂最新版资源| 国产av国产精品国产| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 日韩欧美一区视频在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产成人精品无人区| 日韩欧美精品免费久久| 成年人免费黄色播放视频| 精品一区在线观看国产| 一级爰片在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 日本av手机在线免费观看| 丝袜在线中文字幕| 亚洲av日韩在线播放| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线观看一区二区三区激情| 蜜臀久久99精品久久宅男| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 人妻 亚洲 视频| 精品国产一区二区久久| 国产乱来视频区| 午夜日本视频在线| 亚洲国产精品成人久久小说| 波野结衣二区三区在线| xxxhd国产人妻xxx| kizo精华| 精品久久蜜臀av无| 十八禁高潮呻吟视频| 久久精品国产自在天天线| 欧美丝袜亚洲另类| 18在线观看网站| 最近2019中文字幕mv第一页| 高清黄色对白视频在线免费看| 午夜91福利影院| 看十八女毛片水多多多| 国产黄片视频在线免费观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩av免费高清视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲不卡免费看| 国产精品一国产av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久 成人 亚洲| 看十八女毛片水多多多| 亚洲高清免费不卡视频| av在线老鸭窝| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 91成人精品电影| 极品人妻少妇av视频| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久久久网色| 寂寞人妻少妇视频99o| 在现免费观看毛片| 国产有黄有色有爽视频| 精品少妇内射三级| 女性生殖器流出的白浆| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 尾随美女入室| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 99国产精品免费福利视频| 亚洲国产精品一区三区| 蜜桃在线观看..| 国产视频首页在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲内射少妇av| 在线观看免费视频网站a站| 黑人高潮一二区| 久久久a久久爽久久v久久| www.色视频.com| 亚洲不卡免费看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 九九爱精品视频在线观看| 日韩伦理黄色片| 晚上一个人看的免费电影| 一区在线观看完整版| 国产一级毛片在线| 制服诱惑二区| 久久精品久久久久久久性| 大香蕉久久成人网| 啦啦啦啦在线视频资源| 大香蕉久久成人网| 999精品在线视频| 日韩精品有码人妻一区| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲美女视频黄频| 乱人伦中国视频| 久久久久久久久大av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久久久久伊人网av| 乱码一卡2卡4卡精品| 十分钟在线观看高清视频www| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 一本色道久久久久久精品综合| 久久久久久久亚洲中文字幕| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 丁香六月天网| 各种免费的搞黄视频| av在线老鸭窝| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 精品一区二区三卡| a级毛片免费高清观看在线播放| 熟女av电影| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 在线观看三级黄色| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 在线天堂最新版资源| 美女国产高潮福利片在线看| 男女边摸边吃奶| 国产精品久久久久久精品古装| 久久精品国产自在天天线| 亚洲精品一区蜜桃|