汕頭市性病門(mén)診HPV感染分析

方小嫻方 苗蔡翁義郭義龍楊啟平

汕頭市性病門(mén)診HPV感染分析

方小嫻1方 苗2蔡翁義3郭義龍1楊啟平1

目的: 明確汕頭地區(qū)性病門(mén)診就診者中HPV感染及其亞型的分布。方法: 采用PCR方法對(duì)性病門(mén)診就診者進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè)。結(jié)果: 共檢出HPV陽(yáng)性1263例，陽(yáng)性率為63.15%。HPV23種基因亞型均有檢出 (高危型HPV 1083例，低危型HPV 1367例)，其中陽(yáng)性率HPV6最高(47.90%)，HPV44最低(0.08%)，單項(xiàng)HPV亞型感染的有683例，其中515例為低危型。在HPV單一亞型感染中，肛周拭子的陽(yáng)性率最高(78.95%)，宮頸拭子最低(49.30%)。結(jié)論: 性病門(mén)診就診者中HPV感染率高，主要感染類(lèi)型為單一低危型HPV感染。

性病門(mén)診； 人乳頭瘤病毒； 基因分型

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一種小DNA病毒，通常引起生殖器疣、子宮頸及肛門(mén)、生殖道癌。目前已完全鑒別到的HPV有80多種型，型與型之間的差異在于基因結(jié)構(gòu)的不同，基因結(jié)構(gòu)的差異決定其存在部位及可能導(dǎo)致的皮膚病變類(lèi)型。1約有30多型HPV可以感染生殖道，根據(jù)被感染細(xì)胞是否能轉(zhuǎn)變成癌的狀況，分為高危及低危二組病毒。2目前國(guó)內(nèi)關(guān)于HPV的分型研究主要集中在HPV6、11、16和18四個(gè)基因型，3對(duì)少見(jiàn)基因亞型的報(bào)道多只是針對(duì)CA患者或單一性別人群研究，對(duì)于性病門(mén)診患者HPV基因型較全的流行病學(xué)調(diào)查鮮有報(bào)道，3－6為了解汕頭地區(qū)性病門(mén)診就診者中HPV的感染及其亞型的分布情況，我們對(duì)2012年4月至2014年3月到我院性病門(mén)診就診患者HPV基因分型檢測(cè)情況及患者資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2012年4月至2014年3月到我院性病門(mén)診就診患者，HPV基因分型檢測(cè)情況及患者資料，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中男1420例，女580例，年齡15～84歲?；颊呔驮\原因主要為:(1)有疣狀贅生物；(2)有不潔性行為；(3)患有其它性傳播疾病；(4)配偶有HPV感染；(5)健康體檢。就診前半年內(nèi)用過(guò)免疫調(diào)節(jié)劑及抗病毒藥物患者除外。

1.2 標(biāo)本采集 ①對(duì)于生殖器或肛周有疣狀體增生，懷疑為CA的患者，用無(wú)菌生理鹽水浸潤(rùn)的棉拭子，用力來(lái)回擦拭疣狀組織表面3次，采集疣體表皮脫落細(xì)胞，或直接采集疣體組織，將取樣后的樣本置入無(wú)菌玻璃管，密閉送檢。②對(duì)于丘疹、紅斑、囊腫、結(jié)節(jié)潰瘍等病變部位，用無(wú)菌生理鹽水浸潤(rùn)的棉拭子，用力來(lái)回擦拭病變部位，獲取病變部位表皮脫落細(xì)胞，將取樣后棉拭子置入無(wú)菌玻璃管，密閉送檢。③對(duì)于有可疑癥狀者，用無(wú)菌生理鹽水浸潤(rùn)的棉拭子，反復(fù)擦拭包皮、龜頭、陰莖、陰部等部位采集可疑部位脫落細(xì)胞，置入無(wú)菌玻璃管，密閉送檢。④對(duì)于無(wú)癥狀就診者，男性用無(wú)菌生理鹽水浸潤(rùn)的棉拭子采集男性尿道分泌物、女性以窺陰器暴露宮頸，用無(wú)菌

棉拭子反復(fù)擦拭，取宮頸部位分泌物，置入無(wú)菌玻璃管，密閉送檢。所有標(biāo)本采集后立即送檢，集中保存于－20℃冰箱待檢。

1.3 試劑與儀器 杭州博日科技有限公司生產(chǎn)LIFE EXPRESS基因擴(kuò)增儀；德國(guó)產(chǎn) Eppendorf Centrifuge 5417CR高速冷凍離心機(jī)；韓國(guó)FNEPCR公司生產(chǎn)雜交孵育箱。人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 PCR－反向點(diǎn)雜交法(PCR－RDB)采用RCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的DNA芯片技術(shù)，利用HPV的基因特點(diǎn)設(shè)計(jì)特異引物，可以擴(kuò)增出包含23種HPV基因型的目標(biāo)片段，再將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜條上的包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4等18種高危型和HPV6、11、42、43、44等5種低危型在內(nèi)的分型探針進(jìn)行雜交，依據(jù)雜交信號(hào)的有無(wú)判斷是否有這些HPV基因型的存在。實(shí)驗(yàn)過(guò)程包括HPVDNA的提取、PCR擴(kuò)增、雜交、洗膜、顯色等步驟，實(shí)驗(yàn)操作及結(jié)果判斷嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用Excel建立數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及資料分析，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.01有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05為無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 HPV檢測(cè)結(jié)果 2000例患者共檢出HPV陽(yáng)性1263例，總檢出率為63.15%，其中男性檢出954例，感染率為67.18%(954/1420)，女性檢出309例，檢出率為53.28%(309/580)，男性HPV檢出率明顯高于女性，兩者檢出率有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2＝34.23，P＜0.01)。

檢測(cè)的23種基因亞型均有檢出，感染率最高的是低?；騺喰?HPV6，共檢出 605例，感染率為30.25%，其次是 HPV11，共檢出 390例，感染率為19.50%，感染率最低的為HPV44，僅檢出1例，感染率為0.05%。高?；騺喰蜋z出率最高的為HPV16，共檢出162例，感染率為8.10%。

表1 1263例HPV陽(yáng)性標(biāo)本基因亞型的分布情況

2.2 HPV陽(yáng)性標(biāo)本基因亞型的分布 23種基因亞型中5種低危型HPV共檢出1367例(多亞型感染者重復(fù)計(jì)數(shù)，如一亞型感染以1計(jì)，二亞型感染以2計(jì)，以此類(lèi)推)，檢出的亞型與陽(yáng)性人數(shù)比為108.23%，18種高危型HPV共檢出1083例(多亞型感染者重復(fù)計(jì)數(shù)，如一亞型感染以1計(jì)，二亞型感染以2計(jì)，以此類(lèi)推)，檢出的亞型與陽(yáng)性人數(shù)比為85.74%，1263例HPV陽(yáng)性標(biāo)本基因亞型的分布情況，見(jiàn)表1。

2.3 HPV感染類(lèi)型分布情況 1263例HPV陽(yáng)性標(biāo)本中單項(xiàng)HPV亞型感染的有683例，占所有陽(yáng)性病例54.08%，單一亞型感染以低危型感染為主，683例標(biāo)本中共有515例為低危型HPV單一亞型感染，占單一亞型感染的75.40%，其中HPV6單一感染最多，共291例，占515例低危單一亞型感染的56.50%，二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染有580例，占所有陽(yáng)性病例的45.92%，二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染以高、低危HPV亞型混合感染為主，共檢出462例高、低危HPV亞型混合感染病例，占多重HPV亞型感染的79.66%，單一HPV亞型感染明顯高于二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染(兩者檢出率有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，χ2＝16.80，P＜0.01)。二項(xiàng)以上多亞型感染最高在同一標(biāo)本中檢出11種亞型的多亞型感染，1263例HPV陽(yáng)性標(biāo)本感染類(lèi)型情況見(jiàn)表2。1263例HPV陽(yáng)性標(biāo)本單一亞型感染與二項(xiàng)及以上多亞型感染分布情況，見(jiàn)表3。

表2 1263例HPV陽(yáng)性標(biāo)本感染類(lèi)型情況

表3 1263例HPV陽(yáng)性標(biāo)本單一亞型感染與二項(xiàng)及以上多亞型感染分布情況

表4 2000例接受HPV檢測(cè)患者各年齡段HPV感染情況

2.4 2000例接受HPV檢測(cè)患者各年齡段HPV感染情況 2000例患者中20歲＞男≥60歲HPV感染率最高，兩者感染率均為75.00%，女性50～59年齡段患者，感染率為81.82%，其次是≥60歲患者檢出率最高，為66.67%，2000例接受HPV檢測(cè)患者各年齡段HPV感染情況，見(jiàn)表4。

2.5 不同類(lèi)型、不同部位標(biāo)本HPV檢出情況 采集標(biāo)本中以肛周拭子的陽(yáng)性率最高，為78.95%，其次是贅生物，陽(yáng)性率為73.57%，陽(yáng)性率最低的為宮頸拭子為49.30%，不同類(lèi)型、部位標(biāo)本HPV檢出情況，見(jiàn)表5。

表5 不同類(lèi)型、不同部位標(biāo)本HPV檢出情況

3 討論

HPV的流行病學(xué)研究雖有較多報(bào)道，但因缺乏可檢測(cè)大量基因型的方法學(xué)、目前多數(shù)地區(qū)尚未建立HPV基因型較全的流行病學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，該現(xiàn)狀直接制約HPV感染的防治，3HPV不僅是常見(jiàn)的性傳播疾病病原體，而且還與多種惡性腫瘤及癌前病變密切相關(guān)，7，8目前許多研究表明，持續(xù)性高危型HPV感染是發(fā)生宮頸癌的必要條件，9Madsen等10對(duì)37例陰莖癌標(biāo)本研究發(fā)現(xiàn)高危型HPV陽(yáng)性率為65%，盡管大多數(shù)HPV感染是良性的，但HPV持續(xù)感染會(huì)導(dǎo)致女性宮頸癌和男性肛門(mén)生殖器癌，因此了解HPV的感染狀況對(duì)HPV相關(guān)疾病的防治具有重要意義。

本研究采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的DNA芯片技術(shù)，可以一次性對(duì)23種臨床常見(jiàn)HPV進(jìn)行基因分型，其中包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4等18種高危型和HPV6、11、42、43、44等5種低危型。

研究結(jié)果顯示，2000例性病門(mén)診受檢者共檢出HPV陽(yáng)性1263例，總檢出率為63.15%，其中男性檢出954例，感染率為67.18%(954/1420)，高于薛耀華等4報(bào)道的2011年廣東地區(qū)性病門(mén)診男性患者HPV總陽(yáng)性率43.7%及2010年莊文豪等11報(bào)道的福州地區(qū)性病門(mén)診男性患者感染率，低于許媛等122011年報(bào)道的南充地區(qū)皮膚性病門(mén)診及泌尿外科就診患者79.3%感染率，與杜江等13報(bào)道的基本相符。女性檢出309例，檢出率為53.28%(309/580)，結(jié)果明顯高于柯吳堅(jiān)等16報(bào)道天津性病門(mén)診女性患者HPV感染率及羅招云等14、何桂蓉等15報(bào)道的婦科門(mén)診女性患者HPV感染率。因未能找到性病門(mén)診患者HPV總的陽(yáng)性率類(lèi)似檢測(cè)的報(bào)道，因而本文未能做出比較，但檢測(cè)結(jié)果總的顯示，性病門(mén)診男女性別患者HPV的感染率明顯高于婦科、計(jì)劃生育門(mén)診等人群HPV感染率，14－17提示性病門(mén)診患者作為HPV感染與傳播的高危人群應(yīng)引起重視，本報(bào)道與同為性病門(mén)診患者HPV陽(yáng)性率比較的差異可能是因?yàn)槭軝z人群、檢測(cè)方法及地區(qū)的差別引起。

本次研究1263例陽(yáng)性結(jié)果中，以低危型HPV6感染率最高為 47.90%，其次是 HPV11感染率為30.88%，再次為HPV43感染率為20.67%；高危型感染以HPV16最高，感染率為12.83%，其次是HPV52、HPV58，二者感染率分別為10.93%及7.28%，與劉繼鋒等3、薜耀華等4報(bào)道的杭州、廣東地區(qū)性病門(mén)診人乳頭瘤病毒感染常見(jiàn)的基因亞型基本相符。1263例陽(yáng)性標(biāo)本中單一HPV亞型感染的有683例，占所有陽(yáng)性病例54.08%，二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染580例，占所有陽(yáng)性病例的45.92%，其中男性單一HPV亞型感染 508例，占男性 HPV陽(yáng)性標(biāo)本53.25%，二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染446例，占男性HPV陽(yáng)性標(biāo)本46.75%，與阮建波等18報(bào)道的單一型感染率相比略低，二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染略高于其報(bào)道結(jié)果，女性單一HPV亞型感染175例，占女性陽(yáng)性病例56.63%二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染134例，占女性HPV陽(yáng)性標(biāo)本43.37%，與劉聰?shù)?9報(bào)道的相比，亦是單一型感染率略低，二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染略高。鄒同安等20報(bào)道的女性單一型感染率則更高一些，男女性別患者雖跟其它報(bào)道略有差異，但所有的結(jié)果均顯示，單一HPV亞型感染在HPV陽(yáng)性標(biāo)本中占有主要的比例。

618例單一HPV亞型感染中低危型感染515例，占單一亞型感染的83.33%，顯示HPV單一型感染以低危型為主，508例男性單一亞型感染標(biāo)本中，有98例為高危型感染，所占比例為19.29%，175例女性單一亞型感染標(biāo)本中，有70例為高危型感染，所占比例為40.00%，女性高危型感染明顯高于男性，兩者比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2＝31.02，P＜0.01)，顯示在單一HPV亞型感染中女性高危型的感染占有更高比例。580例二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染標(biāo)本中，高低危型混合感染病例有462例，所占比率為79.66%，單獨(dú)低危亞型混合感染63例，所占比例為13.64%，單獨(dú)高危亞型混合感染55例，所占比例為11.90%，高低危型混合感染明顯高于單獨(dú)低危亞型混合感染及單

獨(dú)高危亞型混合感染(高低危型混合感染與兩者比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與單獨(dú)低危亞型混合感染比較χ2＝562.88，P＜0.01，與單獨(dú)高危亞型混合感染比較χ2＝578.02，P＜0.01)，以上結(jié)果顯示二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染以高低危型混合感染為主，本次調(diào)查結(jié)果中男女在二項(xiàng)及以上多重HPV亞型感染中各類(lèi)感染型別并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異。

本次研究結(jié)果顯示，男性各年齡段患者都有超過(guò)60%的感染率，其中又以小于20歲及大于等于60歲男性患者HPV感染率最高，這可能因小于20歲男性開(kāi)始處于性活躍期，又多為非婚性生活，老年人機(jī)體免疫力下降抵抗力較差，而二者防病意識(shí)又較差，性交過(guò)程中不注重自我防護(hù)有關(guān)。而女性則以50～59歲年齡段患者感染率最高，感染率為81.82%，其次是大于等于60歲患者檢出率高，為66.67%，這可能與50歲后的女性生殖道環(huán)境開(kāi)始出現(xiàn)變化，生殖道抗病菌能力開(kāi)始下降有關(guān)。總的來(lái)說(shuō)，無(wú)論男女性，50歲后的受檢者都有高于其它年齡段的HPV感染率，由于該年齡段人群機(jī)體免疫力開(kāi)始下降，我們應(yīng)重視對(duì)該年齡段人群性防護(hù)知識(shí)的宣傳及HPV感染的篩查工作。

一項(xiàng)調(diào)查顯示，通過(guò)縫隙雜交(slot)發(fā)現(xiàn)76.6%的男性尿道及19.8%的婦女宮頸中有HPV DNA，對(duì)50例就診于STD門(mén)診的高?；颊叩腜CR檢查發(fā)現(xiàn)，72%的婦女宮頸、外陰、陰道HPV陽(yáng)性，63%的男性陰莖、陰囊及尿道陽(yáng)性。1我們對(duì)于不同類(lèi)型、部位標(biāo)本HPV檢出情況的調(diào)查結(jié)果與之基本相符，HPV感染具有很強(qiáng)的地域性，而且因?yàn)闄z測(cè)方法及受檢人群不同而顯示不同的感染率和感染類(lèi)型，亞臨床感染和潛伏感染率至少是臨床HPV感染的3倍，如果重復(fù)檢測(cè)數(shù)次，上升至3到5倍，9性病門(mén)診患者做為HPV感染及傳播的高危人群，重視對(duì)該人群HPV的檢測(cè)及防治，有利于早期預(yù)防和消除HPV感染、減少HPV的傳播及女性宮頸癌、男性肛門(mén)生殖器癌的發(fā)生。

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(收稿:2014－09－18 修回:2014－10－21)

Analysis of human papilloma virus infection in STD clinic attendees in Shantou

FANG Xiao-xian，F(xiàn)ANGMiao，CAIWeng-yi，et al.Shantou Hospital of Skin Disease Prevention and Cure，Shantou，515041

Objective:To determine the prevalence and genotype of human papilloma virus(HPV)in Shantou.M ethods:The HPV in STD clinic attendeeswas detected by PCR.Resu lts:Out of2000 STD clinic attendees detected，HPV was positive in 1263 patients(63.15%).Twenty three HPV gene subtypeswere detected(1083 patients with high risk HPV，1367 patientswith low risk HPV)and the positivity rate of HPV6 was the highest(47.90%)and HPV44 was the lowest(0.08%).There were 683 patients(54.08%)with single HPV subtype infection and among them 515 patientswere infected with low risk HPV.The positivity rates of HPV were the highest(78.95%)in anus swabs and the lowest(49.30%)in cervical swabs.Conclusion: The HPV infection is high and the common type was low risk single HPV subtype in Shantou city.

outpatients of venereal diseases；human papilloma virus；gene subtype

2012年度汕頭市醫(yī)療重點(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目－汕府科(編號(hào): 2012－113－1)

1汕頭市皮膚性病防治院，廣東汕頭，515041 2汕頭市中心醫(yī)院，廣東汕頭，515041 3汕頭市出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東汕頭，515041