痤瘡丙酸桿菌對(duì)米諾環(huán)素的敏感性研究

梅 嬛沈永年呂桂霞蔡 晴劉維達(dá)?

·論著·

痤瘡丙酸桿菌對(duì)米諾環(huán)素的敏感性研究

梅 嬛1沈永年1呂桂霞1蔡 晴2劉維達(dá)1?

目的: 明確痤瘡丙酸桿菌對(duì)米諾環(huán)素的敏感性。方法: 收集236例尋常性痤瘡患者并給予米諾環(huán)素口服。治療前采用需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)的方法，對(duì)患者皮損進(jìn)行病原菌分離。治療前后利用抗菌藥敏紙片對(duì)痤瘡丙酸桿菌進(jìn)行藥物(米諾環(huán)素、四環(huán)素、羅紅霉素和替硝唑)耐藥性檢測(cè)。肉湯稀釋法測(cè)定米諾環(huán)素的最低抑菌濃度。結(jié)果: 病原菌分離結(jié)果示:前3位病原菌分別為痤瘡丙酸桿菌(32.45%)、金黃色葡萄球菌(19.95%)和表皮葡萄球菌(13.83%)；治療前痤瘡丙酸桿菌對(duì)米諾環(huán)素、四環(huán)素、羅紅霉素和替硝唑的耐藥率分別為0、20.93%、83.72%和98.8%，治療后為0、47.22%、86.11%和100%。米諾環(huán)素對(duì)痤瘡丙酸桿菌的MIC50和MIC90分別為0.125 μg/mL和0.25 μg/mL。結(jié)論: 痤瘡丙酸桿菌對(duì)米諾環(huán)素仍然敏感。

痤瘡丙酸桿菌； 米諾環(huán)素； 尋常性痤瘡； 體外藥物敏感試驗(yàn)

尋常性痤瘡是一種常見(jiàn)的累及毛囊皮脂腺的慢性炎癥性疾病，1其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前研究表明主要與皮脂分泌過(guò)多、毛囊皮脂腺導(dǎo)管開(kāi)口處角化過(guò)度、痤瘡丙酸桿菌的繁殖以及炎癥反應(yīng)等因素有關(guān)。2研究表明，痤瘡丙酸桿菌(P.acnes)在痤瘡的多種致病機(jī)制中起核心作用。P.acnes可以誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)和局部炎癥的發(fā)生，促進(jìn)P.acnes和其他革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的繁殖，同時(shí)也參與了毛囊導(dǎo)管上皮的角化過(guò)度。3本研究擬分離236例面部尋常性痤瘡患者的致病菌，并針對(duì)檢出的致病菌進(jìn)行體外藥敏分析，尤其是米諾環(huán)素(MNO)在治療前后對(duì)臨床分離的P.acnes的抑制作用，進(jìn)而為臨床上治療尋常性痤瘡的抗生素選擇提供一定的參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 病例來(lái)源 收集2012年1月至2013年1月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院、四川大學(xué)華西醫(yī)院、四川省人民醫(yī)院、第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院、重慶市第一人民醫(yī)院、上海長(zhǎng)海醫(yī)院、山東省皮膚病醫(yī)院和廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院的尋常性痤瘡患者共236例。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株 痤瘡丙酸桿菌ATCC6919，購(gòu)自廣東省微生物菌種保藏中心。

1.3 試驗(yàn)藥物 抗菌藥敏紙片米諾環(huán)素(minocycline，MNO)、四環(huán)素(tetracycline，TCY)、羅紅霉素(roxithromycin，ROX)和替硝唑(tinidazole，TIN)均購(gòu)自北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 病原菌的分離和鑒定 參考相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)分離細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)和生理生化鑒定，具體操作流程，見(jiàn)圖1。4

2.2 藥物敏感試驗(yàn) 采用瓊脂擴(kuò)散法對(duì)檢出的P.acnes及其標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，結(jié)果判定參照2008年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(Clinical and Labortatory Standards Institute，CLSI)文件規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)折點(diǎn)進(jìn)行判定。

2.3 MNO體外抗菌活性檢測(cè) 采用肉湯稀釋法對(duì)MNO進(jìn)行最低抑菌濃度(MIC，minimum inhibitory concentration)測(cè)定，其操作與判斷方法按照文獻(xiàn)要求進(jìn)行。5將新鮮菌落在無(wú)菌生理鹽水中調(diào)至0.5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫?，接種在按梯度稀釋的含藥(MNO)液體培養(yǎng)基中，設(shè)置MNO藥物濃度為4 μg/mL、2 μg/mL、1 μg/mL、0.5 μg/mL、0.25 μg/mL、0.125 μg/mL、0.06 μg/mL、0.03 μg/mL。并設(shè)置溶媒對(duì)照(1%DMSO)和空白對(duì)照。

圖1 病原菌的分離和鑒定操作流程

3 結(jié)果

3.1 病原菌分離鑒定結(jié)果 服用鹽酸MNO緩釋片前(V0期)檢測(cè)236例面部尋常性痤瘡患者樣本，其中服藥后(V1期)140例(96例失訪)。V0期檢出P. acnes 86株，V1期36株，見(jiàn)表1。檢出的病原菌見(jiàn)圖2。結(jié)果顯示，P.acnes V0期的檢出率大于V1期的檢出率，總檢出率為32.4%。在面部尋常性痤瘡患者中，檢出排在前3位的病原菌分別是P.acnes、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，占總體檢出病原菌的66.1%，除P.acnes外，病原細(xì)菌中革蘭氏陽(yáng)性球菌感染率遠(yuǎn)高于革蘭氏陰性桿菌檢出率(44.1%，8.2%)。

3.2 藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果 痤瘡丙酸桿菌對(duì)MNO最為敏感，無(wú)耐藥現(xiàn)象；對(duì)TCY次之，其中有87株為敏感，35株表現(xiàn)為耐藥；對(duì)TIN最為耐藥，122株中僅有1株敏感，其他均為耐藥；對(duì)ROX的耐藥率相對(duì)較高，122株中有103株耐藥。藥敏試驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表2。由表2見(jiàn)，除MNO外其他3種藥物在受試后，P.acnes的耐藥性都有所提高，其中以TCY最為明顯，耐藥率由20.93%提高至47.22%。而MNO在受試前后均未有耐藥情況出現(xiàn)。

表1 痤瘡丙酸桿菌檢出率

圖2 面部尋常性痤瘡檢出病原菌種類及數(shù)量

表2 122株痤瘡丙酸桿菌對(duì)4種抗菌藥物耐藥率

3.3 MNO的體外抗菌活性檢測(cè)結(jié)果 根據(jù)藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果顯示，P.acnes對(duì)MNO的最低抑菌濃度檢測(cè)(MIC)范圍在0.06 μg/mL～4 μg/mL之間，見(jiàn)表3。根據(jù)表3可見(jiàn) MIC50為0.125 μg/mL，MIC90為0.25 μg/mL。

表3 MNO對(duì)122株痤瘡丙酸桿菌的MIC值范圍

4 討論

針對(duì)痤瘡病原菌的抗菌藥物的使用已成為痤瘡治療的重要手段，6因此關(guān)于痤瘡患者進(jìn)行表皮病原菌的分離和藥敏檢測(cè)具有重要的臨床參考價(jià)值。本次試驗(yàn)對(duì)236例面部尋常性痤瘡患者進(jìn)行了感染病原菌的檢測(cè)，其中P.acnes檢出占比最高為32.4%，可見(jiàn)P.acnes是尋常性痤瘡的主要病原菌；同時(shí)革蘭氏陽(yáng)性球菌的分離檢出率遠(yuǎn)高于革蘭氏陰性桿菌，其中葡萄球菌屬中的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌等仍然是僅次于P.acnes的病原菌，而大腸埃希菌是革蘭氏陰性桿菌中檢出率最高的細(xì)菌，這與以往文獻(xiàn)基本一致。7，8這些條件致病菌或共生細(xì)菌在表皮微生態(tài)環(huán)境被改變的條件下，會(huì)過(guò)量繁殖從而造成感染，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。通過(guò)橫向比較發(fā)現(xiàn)，在所選的4種藥物當(dāng)中，TIN和ROX的耐藥率較高，而四環(huán)素類藥物的抑菌效果相對(duì)較好，其中MNO敏感性最佳，達(dá)到100%；縱向?qū)Ρ蕊@示，經(jīng)過(guò)鹽酸MNO緩釋片治療后，P.acnes的檢出率有所降低，說(shuō)明MNO對(duì)尋常性痤瘡具有一定的抑菌殺菌作用；同時(shí)經(jīng)藥敏試驗(yàn)分析，盡管使用了鹽酸MNO緩釋片治療，但除MNO之外，用藥后相比用藥前檢出的P.acnes對(duì)TCY、ROX以及TIN的耐藥性都有所升高，反而MNO未因其為受試藥而有耐藥現(xiàn)象的發(fā)生，由此可見(jiàn)，MNO為一種相對(duì)安全的抗生素；在耐藥率升高方面，TCY的變化最為顯著，推測(cè)可能是由于TCY和MNO同屬于四環(huán)素類藥物，而ROX和TIN因不同類而未產(chǎn)生明顯升高。另外，結(jié)合本次試驗(yàn)的體外抗菌活性檢測(cè)顯示MIC50和MIC90分別為0.125 μg/mL和0.25 μg/mL，與之前文獻(xiàn)報(bào)道的針對(duì)P.acnes的其他多種抗菌藥物比較有較好的體外抗菌活性。9

1張學(xué)軍.皮膚性病學(xué).5版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001.144.

2 Layton AM.Optinal management of acne to prevent scarring and psychological sequelae.Am J Clin Dematol，2001，2(3):135.

3 Jappe U.Pathological mechanisms of acne with special enphasis on Prolonib－acterlumacnes and related therapy.Acta Derm Venereol，2003，83(4):241.

4陳東科，孫長(zhǎng)貴.實(shí)用臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)與圖譜.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011.514.

5葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006.896.

6龐勤，涂穎，何黎.含青刺果油及馬齒莧提取物護(hù)膚品輔助治療尋常型痤瘡臨床觀察.臨床皮膚科雜志，2012，41(6):380.

7 Duckney P，Wong HK，Serrano J，et al.The role of the skin barrier in modulating the effects of common skin microbial species on the inflammation，differentiation and proliferation status of epidermal keratinocytes.BMC Research Notes，2013，6:474.

8 Christensen GJ，Brüggemann H.Bacterial skin commensals and their role as host guardians.Beneficial Microbes，2014，5(2): 201.

9徐修禮，劉家云，高天文，等.痤瘡丙酸桿菌對(duì)抗菌藥物的體外抗菌活性分析.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2010，35(7):881.

(收稿:2014－11－14 修回:2014－11－25)

Sensitivity of Propionibacterium acnes to minocycline

MEI Huan，SHEN Yong-nian，LV Gui-xia，et al.Institute of Dermatology，Chinese Academy of Medical Sciences，Nanjing，210042

Objective:To determine the sensitivity of Propionibacterium acnes(P.acnes)to minocycline (MNO).Methods:Two hundred and thirty－six patients with acne vulgaris were treated with MNO.Pathogens from the patients were isolated and identified through the method of aerobic and anaerobic cultivation before the treatment.The drug－resistance of P.acnes to minocycline(MNO)，tetracycline(TCY)，roxithromycin (ROX)and tinidazole(TIN)was tested by disk agar diffusion method before and after the treatment.The minimum inhibiting concentration(MIC)of MNO to P.acnes was detected by broth dilution method.Results: The main pathogens were P.acnes(32.45%)，Staphylococcus aureus(19.95%)and Staphylococcus epidermidis(13.83%).The drug－resistance of P.acnes to MNO，TCY，ROX and TIN before the treatment was 0，20.93%，83.72%and 98.8%and after the treatment was 0，47.22%，86.11%and 100%.The MIC50and MIC90of MNO to P.acnes were 0.125 μg/mL and 0.25 μg/mL.Conclusion:P.acnes still remain sensitivity to MNO.

Propionibacterium acnes；minocycline；acne vulgaris；drug sensitive test in vitro

1中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病醫(yī)院，南京，210042 2上海市皮膚病醫(yī)院，200050

?通信作者