柱前衍生氣相色譜測(cè)定土壤和糙米中的三乙磷酸鋁殘留

萬(wàn) 宇，陶 靜，王 軍，王華鼎，蔣 閎

（安徽省化工研究院，安徽合肥230041）

三乙磷酸鋁（Fosethyl-Al）俗名疫霉靈、疫霜靈、乙磷鋁、霉疫凈、克霉靈、霉菌靈等，是一種廣譜、低毒、安全的磷酸鹽類(lèi)內(nèi)吸性殺菌劑，有雙向內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，在植物體內(nèi)能上下傳導(dǎo)，具有保護(hù)和治療作用。它對(duì)霜霉屬、單軸霉菌屬、疫霉屬引起的病害有良好的防治效果，是目前國(guó)內(nèi)外防治多種果樹(shù)、蔬菜霜霉病、疫病應(yīng)用較多的藥劑，適用于水稻、蔬菜、棉花、煙草、橡膠、胡椒、瓜類(lèi)等作物，對(duì)水稻紋枯病、穗頸瘟等亦有一定的防效。

對(duì)于三乙磷酸鋁的測(cè)定，文獻(xiàn)報(bào)道有采用離子色譜法[1]、分光光度法[2-3]、絡(luò)合滴定法[4]、頂空氣相色譜法[5]、毛細(xì)管電泳[6]等進(jìn)行含量及殘留量分析，也有采用液相色譜質(zhì)譜進(jìn)行殘留量檢測(cè)[7-8]。本研究選擇重氮甲烷作為衍生試劑，在酸性條件下水解三乙磷酸鋁，水解后形成亞磷酸與衍生試劑反應(yīng)以及甲酯化柱前衍生反應(yīng)[9-10]，采用氣相色譜FPD方法進(jìn)行樣品檢測(cè)，建立了一種快速、簡(jiǎn)便的土壤和糙米樣品中三乙磷酸鋁殘留氣相色譜分析方法。該方法所用試劑簡(jiǎn)單，所用儀器常規(guī)，滿足大多數(shù)殘留試驗(yàn)室要求，且方法準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好，可以滿足土壤和糙米樣品中三乙磷酸鋁農(nóng)藥殘留檢測(cè)的需要。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

三乙磷酸鋁標(biāo)準(zhǔn)品（95.6%，上海安譜科學(xué)儀器公司）、異丙醇（分析純）、硫酸、重氮甲烷（安徽省化工產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站制）。

1.1.2 儀器

氣相色譜儀SHIMAZHUGC-2014C,配FPD（Flame Photometric Detector）檢測(cè)器,日本島津科技有限公司；十萬(wàn)分之一電子天平XA105DU,梅特勒托利多；渦漩振蕩混合器,英國(guó)STUARTSA8；精密移液器,德國(guó)Eppendorf；氮吹儀,天津恒奧科技發(fā)展有限公司;水浴鍋，江蘇金壇醫(yī)療儀器廠；TDL-40型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；超聲波清洗器,德國(guó)Elma P系列專(zhuān)家型；FA25調(diào)整式勻漿器，上海弗魯克。

1.2 方法

1.2.1 測(cè)定原理

三乙磷酸鋁用稀硫酸溶液進(jìn)行提取，渦漩，取部分提取清液用異丙醇稀釋?zhuān)诘獨(dú)饬飨录尤胫氐淄?，?5℃恒溫下進(jìn)行水浴，柱前衍生試驗(yàn)，衍生后溶液進(jìn)行濃縮定容，用于氣相色譜FPD測(cè)定。

1.2.2 提取

1.2.2.1 土壤

準(zhǔn)確稱(chēng)取10.0g土壤樣品于50mL離心管中，加入1%稀硫酸溶液10mL，在渦漩振蕩混合器上渦漩2min，超聲波提取5min，在4000r/min離心5min，收集上層清液，待柱前衍生。

1.2.2.2 糙米

準(zhǔn)確稱(chēng)取5.0g糙米樣品于50mL離心管中，加入1%稀硫酸溶液10mL，在18000r/min調(diào)整式勻漿器上勻漿 2min，超聲波提取 5min，在 4000r/min離心 5min，收集上層清液，待柱前衍生。

1.2.3 柱前衍生試驗(yàn)

用精密移液槍移取1.2.2.1和1.2.2.2中清液100μL于5mL刻度試管中，加入5μL 5%稀硫酸，振蕩搖勻，再加入895μL異丙醇，搖勻。在氮?dú)饬飨录尤脒^(guò)量的重氮甲烷，蓋緊瓶塞在35℃下水浴中反應(yīng)30min，后用氮?dú)饬鞔抵猎嚬苤幸后w小于1mL（黃色褪去），異丙醇定容至1mL，用于氣相色譜FPD檢測(cè)。

1.2.4 儀器分析條件

氣相色譜儀：島津GC2014C，F(xiàn)PD（P模式）檢測(cè)器；色譜柱：AgilentDB-FFAP聚乙二醇?xì)庀嗌V柱，30m×0.53mm×1.0μm；進(jìn)樣口溫度160℃，檢測(cè)器溫度200℃；程序升溫，初始溫度 60℃，保持 1min，以 10℃/min升至160℃，保持2min，再以20℃/min升至200℃，保留5min；柱壓50kPa，氫氣載壓75kPa，空氣載壓50kPa，尾吹50kPa；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1.0μL。在上述色譜條件下，三乙磷酸鋁衍生物保留時(shí)間約為6.2min（圖 1）。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精確稱(chēng)取0.01mg三乙磷酸鋁標(biāo)準(zhǔn)品于100mL容量瓶中，用10mL的純水溶解，超聲處理5min，用異丙醇定容至刻度，渦漩混勻，此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為100mg/L。吸取10mL該標(biāo)準(zhǔn)溶液放入100mL容量瓶中，加入25μL 1%的硫酸，用異丙醇∶水（9∶1/V∶V）稀釋至刻度，進(jìn)一步稀釋制成由 0.01、0.05、0.5、1.0、5.0mg/L組成的標(biāo)準(zhǔn)工作液，按1.2.3進(jìn)行衍生后氣相色譜FPD檢測(cè)。外標(biāo)法定量，以標(biāo)準(zhǔn)樣品的質(zhì)量濃度（X）與峰面積（Y）作線性回歸分析。結(jié)果表明：在0.01～1.0mg/L濃度范圍內(nèi)三乙磷酸鋁質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=678564X-249.75，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，其中Y為三乙磷酸鋁衍生物峰面積，X為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（圖2）。

2.2 最低檢測(cè)量與最低檢測(cè)濃度

根據(jù)添加回收試驗(yàn)得出土壤中的三乙磷酸鋁最低檢測(cè)量為0.01ng，最低檢測(cè)濃度為0.01mg/kg；糙米中三乙磷酸鋁最低檢測(cè)量為0.05ng，最低檢測(cè)濃度為0.05mg/kg。

2.3 色譜柱的選擇

筆者分別選擇了Agilent的DB-1、DB-5、DB-17和DB-FFAP在相同的色譜條件對(duì)氣相衍生物進(jìn)行色譜分析，使用AgilentDB-FFAP色譜柱進(jìn)行分離的色譜峰形相對(duì)較好，峰形對(duì)稱(chēng)、尖銳、不拖尾，這可能與衍生物的酸性或強(qiáng)極性有關(guān)，而DB-FFAP是硝苯對(duì)苯二酸改性的聚乙二醇，對(duì)分離酸性、極性化合物及其酯有較好效果。從空白和添加譜圖中可看出（圖3～圖6），雜質(zhì)峰與三乙磷酸鋁峰完全分離，相互不干擾，滿足氣相色譜分析的要求。

2.4 添加回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

在空白土壤和糙米中添加0.01、0.1、1.0mg/L和0.05、0.1、1.0mg/L不同濃度的三乙磷酸鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)添加濃度5次重復(fù)，按1.2.2和1.2.3提取、轉(zhuǎn)化和衍生，按1.2.4色譜分析條件進(jìn)行檢測(cè)和分析。由表1知土壤中的回收率為72.6%～98.3%，變異系數(shù)為3.88%～8.35%；糙米中的回收率為82.1%～97.6%，變異系數(shù)為4.79%～6.52%。

表1 樣品的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

3 結(jié)論

根據(jù)三乙磷酸鋁在酸性條件下水解產(chǎn)生亞磷酸的特點(diǎn)，采用合適的衍生試劑，使得三乙磷酸鋁轉(zhuǎn)化成氣相色譜（FPD）能夠檢測(cè)的甲基化衍生物，進(jìn)而計(jì)算出三乙磷酸鋁的殘留量。該方法采用氣相色譜FPD檢測(cè)，樣品前處理方法簡(jiǎn)單，無(wú)需復(fù)雜的凈化，方法靈敏度高，抗干擾能力強(qiáng)，使用常規(guī)的試劑和設(shè)備，不僅滿足大多數(shù)殘留試驗(yàn)室的要求，而且滿足農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則的要求。

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