中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應(yīng)用

劉培洪

(遵義市第一人民醫(yī)院 藥劑科，貴州 遵義 563000)

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中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應(yīng)用

劉培洪

(遵義市第一人民醫(yī)院 藥劑科，貴州 遵義 563000)

目的：探究中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應(yīng)用及有效性。方法：回顧性分析中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應(yīng)用效果。結(jié)果：與傳統(tǒng)中藥藥材鑒定方法比較，特征圖譜法具有明顯優(yōu)勢，尤其在準(zhǔn)確率方面意義深遠(yuǎn)，藥物鑒定過程不會受到藥品形態(tài)的限制，穩(wěn)定性、精準(zhǔn)度、可靠性能夠得到極大的保證。結(jié)論：中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中值得推廣應(yīng)用。

中藥；特征圖譜技術(shù)；中藥材鑒定

近年來，中藥特征圖譜技術(shù)從模糊理念的角度出發(fā)，為中藥鑒別提供了有效的參考依據(jù)。中藥特征圖譜技術(shù)是指藥材經(jīng)一定手段處理后，通過某些分析儀和檢測儀獲得藥材中各種成分的群體特征圖譜，是一種采用量化方法的重要真?zhèn)伪鎰e方式[1]。在藥材質(zhì)量評定方面該技術(shù)穩(wěn)定性較好，一般分為生物特征圖譜和化學(xué)特征圖譜兩類，其中生物特征圖譜通過分子標(biāo)記技術(shù)對藥材的遺傳性特征進(jìn)行分析，化學(xué)特征圖譜通過色譜及光譜等技術(shù)對藥材化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行鑒定。

1 生物特征圖譜

生物特征圖譜主要有蛋白質(zhì)電泳特征圖譜和DNA特征圖譜兩種，目前醫(yī)學(xué)界多采用后者進(jìn)行中藥鑒定。DNA特征圖譜根據(jù)生物所獨(dú)有的DNA序列特性，在現(xiàn)代生物科學(xué)先進(jìn)技術(shù)的支持下利用特異DNA線條將生物DNA序列表示出來。DNA序列的優(yōu)勢在于信息量較大，且不會受到外界的干擾(如隨著生物的發(fā)育和發(fā)展器官組織的變化)，也就是說某一特定生物的DNA具有穩(wěn)定性且任一細(xì)胞的DNA是相同的，即含同樣的信息[2]，可通過DNA實(shí)現(xiàn)物種種類的區(qū)分，還能從DNA信息中分析生物是否發(fā)生變異。因此，DNA特征圖譜在中藥材鑒定中具有重要價(jià)值，應(yīng)用前景廣闊。

1.1 隨機(jī)擴(kuò)增性多臺DNA技術(shù)

隨機(jī)擴(kuò)增性DNA技術(shù)是指采用隨機(jī)合成的方式對某一引物在低溫環(huán)境下進(jìn)行DNA序列模板的隨機(jī)配對完成擴(kuò)增操作，得到中藥藥材DNA特征圖譜，對顯示藥材基因的特征圖譜進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析。有研究學(xué)者利用隨機(jī)擴(kuò)增性DNA技術(shù)對植物基因樣本進(jìn)行分析后得到較清晰的特征圖譜，并根據(jù)瓊脂上顯示的DNA帶型分別確定偽造品、凹葉厚樸和厚樸及混淆品，基本沒有鑒定方面誤差，在研究中藥材的真?zhèn)涡苑矫婢哂袠O高的實(shí)用性價(jià)值。目前，隨機(jī)擴(kuò)增性DNA技術(shù)是使用最為廣泛的DNA特征圖譜手段。

1.2 DNA直接測序法

DNA直接測序法是指把提取到的DNA微量樣本通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，得到的樣品進(jìn)行電泳和染色操作，在紫外線燈管照射下觀察擴(kuò)增后DNA特異區(qū)域帶，利用雙脫氧鏈終止法分析DNA序列，與偽造藥材DNA序列進(jìn)行比對，觀察差異。該技術(shù)可應(yīng)用于真假藥材的鑒定與辨別，使用較多的DNA序列主要包括12S rRNA、18S rRNA和26S rRNA等。劉玉萍等[3]通過DNA直接測序法對山藥和其他地區(qū)幾種慣用土山藥(包括廣山藥、放山藥和土山藥等)的12S rRNA的核苷酸基因序列進(jìn)行比較，結(jié)果表明該方法可對不同品種的山藥進(jìn)行區(qū)別和分類，且可較清晰反映同組但不同種類近緣植物的差異，最終達(dá)到近似藥物區(qū)分的目的。

2 化學(xué)特征圖譜

化學(xué)特征圖譜法是在中藥成分研究基礎(chǔ)上建立起來的中藥鑒定法，在實(shí)際操作中采用化學(xué)分析手段和軟件分析法對同一種藥材的群體化學(xué)成分進(jìn)行分析，能有效確定中藥材的品種、產(chǎn)地及真?zhèn)涡?，還能幫助確定藥品的主要特征，如特征峰峰值面積、相似度、比例等。中藥材化學(xué)特征圖譜鑒定方法主要有色譜法、光譜法。

色譜法為中藥材化學(xué)成分測定的最常見方法，其中效果最好的是高效液相色譜法(HPLC)，具有分離效果好、精準(zhǔn)度高等特點(diǎn)，是一種封閉性分析法，受到外界影響較小，色譜圖像穩(wěn)定，因此藥品鑒別能力也高于其他方法。李淼等[4]利用高效液相色譜法鑒定紅蓼花、葉莖醋酸乙酯部位，研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)所采用的7個(gè)樣品形似度高于0.95，其他3個(gè)偽造品相似度不足0.9，說明正品和偽造品的差異較為明顯[5]，可有效區(qū)分正品和偽造皮。

光譜法主要包括紅外線光譜法和核磁共振譜法，其中紅外線光譜法應(yīng)用范圍較廣。中藥材紅外線光譜法鑒定中，對研究樣品各種化學(xué)成分的紅外線光譜予以疊加操作，比例較穩(wěn)定時(shí)其紅外線光譜也趨于穩(wěn)定，研究表明紅外線圖譜具有較優(yōu)越的指紋特性。學(xué)者專家在利用紅外線光譜指紋特性進(jìn)行山藥樣品真?zhèn)涡澡b定時(shí)，發(fā)現(xiàn)構(gòu)建的紅外線圖譜對山藥化學(xué)性征的提取具有顯著效果，可直接根據(jù)圖譜區(qū)分正品和次品。

3 中藥特征圖譜技術(shù)應(yīng)用存在的問題及發(fā)展趨勢

與傳統(tǒng)中藥材鑒定方法比較，特征圖譜法具有較大優(yōu)勢，尤其在準(zhǔn)確率方面意義深遠(yuǎn)，藥物鑒定過程不會受到藥品形態(tài)的限制，不論是原藥還是粉末狀、片狀藥物，只需極少樣品即可檢測，穩(wěn)定性、精準(zhǔn)度、可靠性得到極大的保證[6]。我國中藥材檢測技術(shù)的發(fā)展較晚，關(guān)于藥物鑒定方面的研究仍以實(shí)驗(yàn)性的論證為主，尚處于探索研究方法和積累研究經(jīng)驗(yàn)的過程，系統(tǒng)的指導(dǎo)理論、方法體系和數(shù)據(jù)庫體系并未形成，實(shí)際應(yīng)用與推廣尚有距離。

因此，為促使我國中藥特征圖譜技術(shù)得到進(jìn)一步發(fā)展，應(yīng)進(jìn)行更深一步的努力與探索。首先，需建立一個(gè)操作簡便、快捷合理的系統(tǒng)性特征圖譜方法理論體系。其次，應(yīng)開發(fā)有助于中藥特征圖譜技術(shù)順利使用的中藥材鑒定和分類評估計(jì)算機(jī)支持軟件。最后，應(yīng)建立相應(yīng)的科學(xué)權(quán)威的中藥圖譜數(shù)據(jù)庫，以便于中醫(yī)藥工作人員參考和利用。

4 結(jié)語

綜上所述，目前我國中藥材特征圖譜技術(shù)仍處于起步階段，已取得一定的成績，在生物特征圖譜和化學(xué)特征圖譜等方面的研究正趨于成熟。隨著科學(xué)技術(shù)水平的不斷提升，中藥材特征圖譜技術(shù)在中藥鑒定領(lǐng)域?qū)l(fā)揮積極而重要的作用。

[1] 孫素琴,白雁.道地山藥紅外指紋圖譜和聚類分析的鑒別研究[J].光譜學(xué)與光譜分析,2013,23(12):258-261.

[2] 胡妮娜,田淑琴,于景偉,等.傳統(tǒng)中藥鑒定方法的研究發(fā)展概況[J].中醫(yī)藥信息,2012,21(3):789-791.

[3] 劉玉萍,何報(bào)作,曹暉.基因測序技術(shù)在中藥質(zhì)量研究中的應(yīng)用—山藥基原的DNA測序鑒[J].中草藥,2011,32(11):126-130.

[4] 李淼,樓一層,林鑫,等.紅蓼花、葉莖醋酸乙酯部位的高效液相色譜特征圖譜[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2012,15(1):234-236.

[5] 朱秀卿,閻克里,趙麗.白術(shù)揮發(fā)油中極性和非極性成分的高效液相色譜法特征圖譜研究[J].中國藥物與臨床,2011,31(8):83-84.

[6] 張永鑫,劉曉,楊欣文,等.黃連4種飲片特征圖譜研究及生物堿含量測定[J].藥物分析雜志,2012,39(11):126-128.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-03-04

劉培洪(1970-)，男，貴州省遵義市第一人民醫(yī)院主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴庤b定、中藥制劑。

R284.1

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1673-2197(2015)12-0061-02

10.11954/ytctyy.201512027