高效多靶點的抗過敏中藥復(fù)方研究開發(fā)※

黃 裕 周錦珂

高效多靶點的抗過敏中藥復(fù)方研究開發(fā)※

黃 裕 周錦珂

過敏性疾病已成為世界公眾衛(wèi)生問題，目前抗過敏化學(xué)藥物均具有較大的毒副作用，容易引起新的過敏癥狀或?qū)θ梭w造成損害。本方根據(jù)中醫(yī)扶正祛邪、辨證論治的理論精髓，進(jìn)行高效多靶點的抗過敏中藥復(fù)方的配伍研究。采用以“低溫高壓差集成多級膜分離”為核心的關(guān)鍵技術(shù)，進(jìn)行提取、分離、濃縮、純化和精制的工藝技術(shù)研究。對抗過敏效果在致敏性基因表達(dá)的調(diào)控、分子信號通路、細(xì)胞介質(zhì)作用等5個靶點進(jìn)行驗證，結(jié)果表明，開發(fā)的中藥復(fù)方在應(yīng)用濃度1.0%時抗炎、抗過敏效果明顯。

中藥復(fù)方；多靶點；抗炎；抗過敏；基因調(diào)控；低溫高壓差；膜分離

過敏性疾病在過去幾十年中發(fā)病率明顯上升，已成為舉世關(guān)注的公眾衛(wèi)生問題。據(jù)統(tǒng)計[1]，我國至少有37%過敏性疾病患者。面對過敏性疾病的流行，迫切需要一種高效、安全的藥物進(jìn)行防治。但是，目前抗過敏化學(xué)藥物普遍存在較大的不良反應(yīng)，不恰當(dāng)?shù)氖褂梅炊鴷鹦碌倪^敏癥狀或?qū)θ梭w造成損傷。如馬來酸氯苯那敏引起嗜睡、苯海拉明引起眼干和視力模糊、氯雷他定服用后會有嚴(yán)重的心臟毒性等[2]。傳統(tǒng)中藥用于治療過敏性疾病，具有廉價、有效、不良反應(yīng)少等優(yōu)點，越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。筆者根據(jù)中醫(yī)扶正祛邪、辨證論治的理論精髓，深入開展了高效多靶點的抗過敏中藥復(fù)方的配伍研究，并采用以“低溫高壓差集成多級膜分離”為核心的關(guān)鍵技術(shù)，進(jìn)行提取、分離、濃縮、純化和精制的工藝技術(shù)研究。在致敏性基因表達(dá)的調(diào)控、分子信號通路、細(xì)胞介質(zhì)作用等5個靶點上進(jìn)行抗過敏功效實驗驗證。結(jié)果表明，開發(fā)的中藥舒敏復(fù)方在應(yīng)用濃度1.0%時抗炎、抗過敏效果明顯。

1 復(fù)方組合優(yōu)化

中醫(yī)認(rèn)為，過敏體質(zhì)的外在表現(xiàn)都是由于其氣虛衛(wèi)表不固，血熱易于風(fēng)動，易受風(fēng)邪侵襲的內(nèi)在本質(zhì)而造成[4]。比如過敏性鼻炎，其病在肺，與脾關(guān)系較為密切；過敏性哮喘多是由于本身的肺、脾、腎三臟虛弱。皮膚過敏包括蕁麻疹、濕疹、過敏性皮炎等多種疾病，屬于濕熱內(nèi)蘊(yùn)或陰虛血燥。中醫(yī)治療講究既要“驅(qū)除風(fēng)邪，又要固表”，關(guān)閉皮膚的門戶，防止風(fēng)邪侵襲。

本研究根據(jù)單味藥材的前期篩選研究，選用 6味中藥作為舒敏復(fù)方的組成藥物，其中君藥為黃芪，具有補(bǔ)氣升陽、防御肌表；臣藥為白術(shù)、防風(fēng)，健脾益氣、助黃芪益氣固表、袪風(fēng)解表作用；佐藥為洋甘菊、合歡皮，鎮(zhèn)靜抗敏、緩和肌膚、涼血消腫之作用；甘草，調(diào)和諸藥、緩和各位之急燥之性，為使藥。諸藥合用，傳承“不治已病治未病”的中醫(yī)防治理念精髓，針對血虛、血燥生風(fēng)，衛(wèi)氣不固、無力祛風(fēng)，脾虛濕滯、濕濁化熱所致的過敏癥具有明顯效果。

2 提取純化研究

中藥復(fù)方傳統(tǒng)的提取方法主要是水煎煮法，其存在有效成分損失較多，容易引起熱敏性有效成分的大量分解等問題。本研究采用“低溫高壓差提取與多級膜分離集成系統(tǒng)”的技術(shù)進(jìn)行該項目的研究開發(fā)，低溫高壓差提取技術(shù)是在常溫下將一定細(xì)度的中草藥或植物原料與選定有一定溫度的溶媒混合均勻；通過瞬時的真空——加壓——真空的循環(huán)變化，高壓差變化產(chǎn)生強(qiáng)大的機(jī)械力，并形成高速流，使原料組織細(xì)胞破裂；胞內(nèi)相關(guān)成分與溶媒充分接觸、直接溶解，從而達(dá)到高效提取的效果。采用多級膜分離及濃縮技術(shù)，通過微濾膜、超濾膜、納濾膜及反滲透的有機(jī)結(jié)合，在分子水平上進(jìn)行選擇性的分離，從而可最大程度濃集有效成分。

3 效果驗證

經(jīng)脂多糖（LPS）刺激人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1），24 h后加入定量的舒敏復(fù)方提取物進(jìn)行培養(yǎng)，通過觀察THP-1細(xì)胞中白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、免疫球蛋白IgE的免疫反應(yīng)、細(xì)胞核因子-κB基因調(diào)控的表達(dá)及細(xì)胞顯微情況進(jìn)行抗過敏效果分析研究。

3.1 抑制脂多糖刺激誘導(dǎo)的人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞中的IL-8、TNF-α、lgE活性表達(dá)，核因子-κB基因調(diào)控，見圖1～4。

3.2 細(xì)胞顯微觀察 見圖5。

圖1 抑制IL-8的合成分泌

3.3 結(jié)果 隨著舒敏復(fù)方提取物加入量的增加，LPS誘導(dǎo)的IL-8、TNF-α、lgE表達(dá)活性明顯減少。在加入量1.0%時，基本能夠抑制IL-8、TNF-α、lgE

活性表達(dá)。說明舒敏復(fù)方提取物具有良好的抗炎、抗過敏效果。THP-1細(xì)胞加入LPS刺激后，核因子-κB表達(dá)增值87.1%，加入舒敏復(fù)方提取物培養(yǎng)后，不同加入量均表現(xiàn)抑制LPS刺激的核因子-κB活性表達(dá)；當(dāng)舒敏復(fù)方提取物加入量在0.5%時，可降低77.4% LPS誘導(dǎo)的核因子-κB活性表達(dá)；在加入量1.0%時，能完全消除LPS誘導(dǎo)的核因子-κB活性表達(dá)。

圖2 抑制IgE的合成分泌

圖3 抑制TNF-α的合成分泌

圖4 核因子-κB p65的表達(dá)

圖5 細(xì)胞微觀情況

4 討論

人體過敏是一個復(fù)雜的過程，過敏原進(jìn)入機(jī)體后，可產(chǎn)生免疫球蛋白 IgE。當(dāng)相同的過敏原再次進(jìn)入機(jī)體時，過敏原與上述細(xì)胞表面IgE分子形成過敏原-IgE復(fù)合物（抗原-抗體復(fù)合物的一種特殊類型），使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)發(fā)生異常改變，顆粒釋放，同時核因子-κB的信號通路，從而增強(qiáng)各種細(xì)胞因子的表達(dá)。而被釋放的顆粒和細(xì)胞膜的脂質(zhì)代謝進(jìn)一步釋放一系列生物活性介質(zhì)，如組胺、激肽，以及IL-8、TNF-α等物活性物質(zhì)作用下，使人體某些組織的毛細(xì)血管擴(kuò)張、血管通透性增加、平滑肌收縮、腺體分泌增多，引起局部或全身過敏反應(yīng)。若發(fā)生在皮膚，則出現(xiàn)紅腫、尋麻疹等；若發(fā)生在呼吸道，則出現(xiàn)流涕、噴嚏、哮喘、呼吸困難等；若發(fā)生在消化道，則出現(xiàn)嘔吐、腹痛、腹瀉等。個別病情嚴(yán)重者，可因支氣管痙攣、窒息或過敏性休克而導(dǎo)致患者病死。

與現(xiàn)有報道的抗過敏中藥復(fù)方相比，本研究的中藥抗過敏復(fù)方在人體 5個主要致敏途徑所起防治作用，具體通過抑制 IgE活性表達(dá)，阻止組胺的釋放，阻斷核因子-κB的激活，抑制 IL-8和TNF-α活性表達(dá)，同時具有抗炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等效果。

本研究提取工藝?yán)玫蜏馗邏翰钐崛?，其技術(shù)原理是利用約0.2 s瞬間的－0.1～35.0 mPa壓差變化產(chǎn)生強(qiáng)大的機(jī)械力，并形成高速流，使原料組織細(xì)胞破裂，使胞內(nèi)有效成分與溶媒充分接觸、直接溶解。此提取方法能有效防止藥材復(fù)雜成分變化，同時通過膜濃縮分離，除去大部分雜質(zhì)，使有效成分高度富集，提高了藥材的利用率，使產(chǎn)品質(zhì)量可控，整個生產(chǎn)過程時間短，耗能少。功效實驗表明，本復(fù)方提取物抗過敏、抗刺激功效明顯，安全性高，可大力推廣應(yīng)用。

[1] 華曉東,尹春暉.抗過敏中藥及其作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué),2009,21(6):69-72.

[2] 伏興,萬莉,袁萍,等.抗過敏藥物的發(fā)展與應(yīng)用[J].化學(xué)教育, 2013(6):3-6.

[3] 張承烈.抗過敏中藥研究進(jìn)展[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2005, 15(4):253-255.

[4] 楊世英.中醫(yī)病因風(fēng)邪與過敏原的相關(guān)性研究[D].浙江.浙江中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文,2010.

Research on Anti-allergic effects of Multiple Target in compound Chinese medicine

Huang Yu Zhou Jinke

Allergic disease has become a problem of public health at present world diseases,anti allergic chemical

Traditional Chinese Medicine formula;Multiple target;Anti-inflammatory;Anti-allergic;Gene regulation; Low temperature high pressure difference;Membrane separation

R286

A

1673-5846(2015)06-0034-03

廣州市絡(luò)捷生物科技有限公司，廣東廣州 510663

2014年廣州市科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新資金初創(chuàng)項目

黃裕，制藥工程師。E-mail：huangyu@logicos.cn

drug strong side effects,easy to cause allergy symptoms new or cause harm to the human body.The essence of the theory according to traditional Chinese health,treatment based on syndrome differentiation,compatibility of the study on anti allergic traditional Chinese medicine compound efficient multiple target.Use "low temperature high pressure differential integrated multistage membrane separation"key technology as the core,carry out technology research and refinement of extraction,separation,concentration,purification.Anti allergy effect in the regulation of gene expression, sensitization of molecular signaling pathway,cell medium effects such as the 5 target for verification,the results show that the compound Chinese medicine development in the application of the concentration of 1.0% anti-inflammatory, anti allergic effect is remarkable.