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    口腔益生菌在口腔疾病防治上的研究及應(yīng)用

    2015-12-09 12:28:39劉虹,翦祎,張化朋
    藥學(xué)研究 2015年6期
    關(guān)鍵詞:口腔疾病益生菌

    口腔益生菌在口腔疾病防治上的研究及應(yīng)用

    劉虹,翦祎,張化朋,王麗春,張顏廷,王靜

    (山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司,山東 泰安 271000)

    摘要:目前,利用益生菌防治口腔疾病的研究已成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)??谇粌?nèi)已知細(xì)菌種類多達(dá)700余種,其中多種屬于益生菌。大量研究表明,益生菌可通過(guò)對(duì)口腔微生物的影響而對(duì)齲病、牙周病和口臭等口腔疾病的防治發(fā)揮積極的作用。本文總結(jié)歸納口腔益生菌的研究進(jìn)展,并就益生菌在口腔疾病防治上的研究及應(yīng)用做系統(tǒng)性回顧和展望。

    關(guān)鍵詞:益生菌;口腔疾??;乳桿菌;致齲菌

    作者簡(jiǎn)介:劉虹,女,研究方向:功能微生態(tài)學(xué),E-mail:liuhong0726@163.com

    中圖分類號(hào):R780.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    Research and application of oral probiotics in the prevention and treatment of oral diseases

    LIUHong,JIANYi,ZHANGHua-peng,WANGLi-chun,ZHANGYan-ting,WANGJing

    (ShandongBoly-lelyBioengineeringCo.,Ltd.,Taian271000,China)

    Abstract:Currently,research of probiotics in the treatment of oral diseases had become a hot topic at home and abroad.More than 700 species of human oral bacteria had been found,many of them belonged to probiotics.Recent studies had found that probiotics played a positive role in prevention and treatment of oral diseases,such as dental caries,periodontal disease and oral halitosis through the influence of oral microorganisms.The paper summarized the research progress of oral probiotics,reviewed and outlooked systematically the research and application of probitics in the prevention of oral diseases.

    Key words:Probiotics;Oral diseases;Lactobacillus;Cariogenic bacteria

    目前,針對(duì)益生菌防治胃腸道疾病的研究已有大量報(bào)道,其療效和機(jī)制也有了較確定的結(jié)論,并且益生菌早就被廣泛應(yīng)用到食品中??谇蛔鳛橄赖钠鹗级耍侨梭w特有的微生態(tài)系統(tǒng),也是最先接觸到益生菌的地方,近年來(lái)很多國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者開始關(guān)注益生菌在口腔疾病防治上的作用。早在1987年,Silva等[1]研究發(fā)現(xiàn),乳桿菌GG 可以產(chǎn)生不同種類的抗菌物質(zhì),包括有機(jī)酸、過(guò)氧化氫、細(xì)菌素等,這些物質(zhì)能有效抑制齲齒致病菌-變異鏈球菌。隨后,越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),大量的共生菌群存在于口腔中,在正常情況下它們共同維持口腔的微生態(tài)平衡,并且這些共生菌群多種屬于益生菌。所以,益生菌在口腔衛(wèi)生的保持、口腔疾病的防治方面發(fā)揮著積極的作用。本文總結(jié)歸納國(guó)內(nèi)外口腔益生菌的研究進(jìn)展,并就益生菌在口腔疾病防治上的研究及應(yīng)用做系統(tǒng)性回顧和展望。

    1口腔微生態(tài)的研究進(jìn)展

    口腔是一個(gè)復(fù)雜而完整的微生態(tài)系統(tǒng),定植于口腔的微生物主要包括細(xì)菌、真菌、支原體、病毒及原蟲等,這些微生物在口腔的不同部位共棲、競(jìng)爭(zhēng)和拮抗,與口腔固有環(huán)境共同構(gòu)成了口腔微生態(tài)系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn),定植于口腔的微生物主要以細(xì)菌為主,目前已發(fā)現(xiàn)700 余種,是人體最復(fù)雜的微生物集群之一[2]。但目前能夠分離培養(yǎng)的不過(guò)百種,而研究的比較清楚的僅有幾十種。具有生態(tài)學(xué)意義的有葡萄球菌屬、鏈球菌屬、二氧化碳嗜纖維菌屬、奈瑟菌屬、韋榮菌屬、放線菌屬、乳桿菌屬、卟啉單胞菌屬、梭桿菌屬等。研究發(fā)現(xiàn),許多口腔疾病的發(fā)病起因于口腔微生態(tài)的紊亂,同時(shí)口腔疾病也會(huì)誘發(fā)微生物環(huán)境發(fā)生改變。生理狀態(tài)下,口腔微生物之間、微生物與宿主之間存在著動(dòng)態(tài)平衡,共同參與機(jī)體代謝、免疫、營(yíng)養(yǎng)及維持口腔的健康。但在物理化學(xué)因素、細(xì)菌因素、宿主因素等各種外界因素影響下,口腔中的微生態(tài)平衡會(huì)被打破,條件致病菌轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏【?,從而?dǎo)致相關(guān)口腔疾病的發(fā)生,如齲齒、牙周病、口臭、口腔念珠菌病和反復(fù)性口腔潰瘍等,而各種口腔疾病又會(huì)加劇菌群的失衡。目前國(guó)內(nèi)外專家均已認(rèn)識(shí)到調(diào)節(jié)口腔菌群平衡是預(yù)防和治療各種口腔疾病的關(guān)鍵。

    2口腔益生菌的發(fā)現(xiàn)及研究進(jìn)展

    聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織定義:益生菌是適量給予宿主后能對(duì)宿主產(chǎn)生保健作用的活的微生物[3]。目前,益生菌中被研究和應(yīng)用最充分的是乳酸菌(Lactobacillus)和雙歧桿菌(Bifidobacterium),這兩大類也是口腔中最常見的。雙歧桿菌是厭氧菌,對(duì)環(huán)境的耐受能力差,與乳酸菌相比,研究的較少。乳桿菌大約占口腔內(nèi)可培養(yǎng)微生物群的1%左右[4]。Colloca等[5]研究發(fā)現(xiàn),發(fā)酵乳桿菌、植物乳桿菌、唾液乳桿菌和鼠李乳桿菌是健康人群口腔內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌種。Teanpaisan 等[6]研究發(fā)現(xiàn),大部分口腔益生菌來(lái)自唾液。

    1995 年,Meurman等[7]發(fā)現(xiàn)益生菌(LGG)能夠抑制致齲菌-變異鏈球菌的定殖,從而減少兒童齲齒率。2010年,Haukioja[8]研究發(fā)現(xiàn),益生菌可改善口腔衛(wèi)生,并能用來(lái)治療牙齦炎和牙周炎。Bosch 等[9]從健康兒童口腔中分離出100 株菌株,46 株鑒定為產(chǎn)乳酸的細(xì)菌,多數(shù)菌株能耐受口腔環(huán)境,有較強(qiáng)的組織黏附能力,能抑制口腔病原菌的生長(zhǎng),不產(chǎn)生不愉快的揮發(fā)性物質(zhì),也沒有出現(xiàn)抗生素抵抗,但是在7 株預(yù)選的益生菌中,沒有考慮乳酸會(huì)致齲的風(fēng)險(xiǎn)。而且試驗(yàn)中的乳桿菌在口腔內(nèi)的定植是由于經(jīng)常攝入形成的暫時(shí)性聚集,還是永久性定植,目前還沒有定論。

    應(yīng)用方面,在食品、保健品、藥品等領(lǐng)域已有多種益生菌制劑問(wèn)世,其中以在食物中的應(yīng)用更為廣泛,普遍受到廣大消費(fèi)者的歡迎。在日本,益生菌可被添加到食品和藥品中,但主要應(yīng)用在乳制品中,日本特定健康食品組織(Food for Specified Health Uses,F(xiàn)OSHU)列出的579件產(chǎn)品中共有65個(gè)益生菌產(chǎn)品,包括16個(gè)不同的菌株。日本市場(chǎng)上有添加口腔益生菌的漱口水、膠囊、口香糖等商品,日本富萊臺(tái)公司開發(fā)的對(duì)口腔有益生功效的新型片劑“克利休”,受到了人們的青睞。在美國(guó),益生菌產(chǎn)品常以食品和膳食補(bǔ)充劑兩種形式添加,美國(guó)要求酸奶產(chǎn)品至少要用保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌進(jìn)行發(fā)酵,但沒有明確活菌含量[10]。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)公布了可以直接飼喂、一般認(rèn)為安全的微生物菌種名單,共42種,如乳酸乳桿菌、羅伊乳桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱鏈球菌。美國(guó)主要的口腔益生菌產(chǎn)品有片劑、酸奶、奶酪和口香糖等多種類型。盡管益生菌產(chǎn)品在歐洲和日本與美國(guó)相比更受人們青睞,但是美國(guó)的消費(fèi)市場(chǎng)也在不斷發(fā)展壯大。我國(guó)在口腔益生菌方面的研究起步較晚,2001年我國(guó)衛(wèi)生部公布了可用于保健食品的益生菌菌種名單[11]。2010年根據(jù)《食品安全法》及其實(shí)施條例的有關(guān)規(guī)定,衛(wèi)生部組織制定了《可用于食品的菌種名單》,其中包括乳桿菌屬14種、雙歧桿菌屬6種、鏈球菌屬1種共計(jì)21種。我國(guó)益生菌產(chǎn)品有食品、藥品與保健品,種類較多,但國(guó)產(chǎn)口腔益生菌產(chǎn)品較少,市場(chǎng)上的主要還是進(jìn)口產(chǎn)品。

    3益生菌與口腔疾病

    3.1益生菌與齲齒齲齒是含糖食物特別是蔗糖進(jìn)入口腔后,經(jīng)致齲菌發(fā)酵產(chǎn)酸,侵襲牙齒,使之脫礦產(chǎn)生的。齲病可以繼發(fā)牙髓炎和根尖周炎,甚至能引起牙槽骨和頜骨炎癥,不及時(shí)治療會(huì)形成齲洞,牙冠破壞消失,最終會(huì)導(dǎo)致牙齒喪失。齲病發(fā)病率高,分布廣,世界衛(wèi)生組織已將其與腫瘤和心血管疾病并列為人類三大重點(diǎn)防治疾病。常見的致齲菌包括鏈球菌屬、乳桿菌屬和放線菌屬。大量研究表明,變異鏈球菌是造成齲病的主要原因[12]。致齲菌可產(chǎn)生糖基轉(zhuǎn)移酶,以蔗糖為底物合成胞外多糖,胞外多糖能加速菌斑形成,也能在細(xì)菌缺乏碳水化合物時(shí)降解,為細(xì)菌提供能量,加速致齲。

    早期,人們使用抗生素或殺菌劑來(lái)治療齲齒,雖然短期內(nèi)會(huì)取得很好的效果,但長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致口腔菌群失調(diào),加速致齲。目前,人們用氟化物防齲,氟的應(yīng)用已成為防齲的第一選擇。但是人們對(duì)于氟的確切抗齲機(jī)制仍沒有完全搞清,比較一致的看法認(rèn)為,氟是在牙齒脫礦和再礦化的物理化學(xué)過(guò)程中起作用的,所需濃度范圍很低(局部 0.5 ppm即可)。因此,低濃度高頻率成為當(dāng)前用氟的主要建議,但需要專業(yè)醫(yī)生的技術(shù)控制,以免造成氟過(guò)量中毒。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外專家開始了口腔益生菌對(duì)齲齒的影響研究。楊穎等[13]從健康成人唾液中分離到1株植物乳桿菌L.plantarumHO-69,結(jié)果表明,菌株對(duì)口腔硬組織(牙面/牙本質(zhì))的黏附率低,能抑制變異鏈球菌生長(zhǎng),并且具有較好的黏膜黏附能力。楊娟等[14]從唾液和牙菌斑樣品中分離到1株發(fā)酵乳桿菌 Y29,結(jié)果表明,該菌株也能抑制變異鏈球菌生長(zhǎng),并有自聚集和與其他口腔微生物共聚集形成生物膜的能力。此外,可耐受 1.0 mg·mL-1溶菌酶和 140 μg·g-1過(guò)氧化氫,有利于其在口腔動(dòng)態(tài)環(huán)境中生存。Caglar 等[15]研究表明,在3周內(nèi)連續(xù)飲用含有羅伊氏乳桿菌的水或口服羅伊氏乳桿菌片劑均能夠有效地減少試驗(yàn)對(duì)象唾液中變異鏈球菌的數(shù)量。Tong等[16]將下頜第三磨牙切取3片釉質(zhì)片,分別放置于3份人工唾液中,第1份注入100 μL乳酸菌培養(yǎng)液,第2份注入100 μL變異鏈球菌培養(yǎng)液,第3份注入50 μL乳酸菌和50 μL變異鏈球菌的混合培養(yǎng)液,30天后電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),與乳酸菌混合的變形鏈球菌產(chǎn)生的胞外基質(zhì)要明顯少于單獨(dú)變形鏈球菌產(chǎn)生的胞外基質(zhì),說(shuō)明乳酸菌能抑制變異鏈球菌在牙表面的黏附。陳偉等[17,18]從健康人的口腔中分離到1株寡發(fā)酵鏈球菌,該菌能產(chǎn)生大量過(guò)氧化氫,且產(chǎn)酸低,并有較強(qiáng)的表面黏附能力。但是也有少量文獻(xiàn)提出用益生菌來(lái)治療齲齒有一定的弊端,因?yàn)槎鄶?shù)益生菌能發(fā)酵產(chǎn)生乳酸,乳酸能促進(jìn)齲齒的發(fā)生,如Fitzgerald等[19]明確指出,在初期致齲過(guò)程中乳桿菌并不致齲,齲病進(jìn)入深層時(shí),乳桿菌由于其較強(qiáng)的耐酸性而大量繁殖產(chǎn)酸,協(xié)同變異鏈球菌致齲??梢?,造成齲齒的口腔微生態(tài)系統(tǒng)和機(jī)理較復(fù)雜,菌種多樣性及各菌之間的相互作用仍需要進(jìn)一步研究。

    3.2益生菌與牙周病牙周病是慢性多細(xì)菌感染和炎性宿主相互作用的結(jié)果,主要癥狀有牙齦炎癥和出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收以及牙齒松動(dòng)和移位[20]。致病菌包括牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌、放線桿菌、福賽擬桿菌和螺旋體等[21,22]。主要為革蘭陰性厭氧菌,它們?cè)谘乐艽ㄖ膊⒎敝常a(chǎn)生抗原成分、致病酶、毒素等代謝產(chǎn)物破壞牙周組織。孫曉菊[23]綜述指出,慢性牙周病能夠引起心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展,早期診斷和干預(yù)牙周病,可能對(duì)減少罹患心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn),預(yù)防和控制心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展具有潛在的臨床意義。

    目前,齦上潔治術(shù)和齦下刮治術(shù)是牙周病的常規(guī)治療方法,過(guò)程中為了鞏固效果,同齲齒的治療,會(huì)采用抗生素和消毒劑輔助治療,但同樣會(huì)導(dǎo)致更嚴(yán)重的菌群失調(diào)。Teughels等[24]以比格犬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,建立牙周炎動(dòng)物模型,做了益生菌輔助根面平整術(shù)的研究。結(jié)果表明,牙周袋內(nèi)植入益生菌作為輔助手段,可以延緩和減少齦下牙周致病菌的再附著,并且能夠明顯改善牙周病的一個(gè)重要臨床指征即探診出血情況。但要得出益生菌療法是牙周病治療的有效輔助手段的結(jié)論,還需要大量的試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

    Krasse等[25]研究表明,患有牙齦炎的受試者咀嚼混有羅伊氏乳桿菌的口香糖,14天后其牙齦指數(shù)明顯改善。Shimazaki等[26]通過(guò)研究日常奶制品的攝入量與牙周健康的相關(guān)性發(fā)現(xiàn),酸奶或乳酸飲料的攝入量與其探診深度及附著喪失呈負(fù)相關(guān),而牛奶的攝入量與其探診深度和附著喪失不相關(guān),從而推測(cè)乳桿菌對(duì)牙周健康的維護(hù)有益。王丹等[27]對(duì)佩帶固定矯治器的患者采用乳桿菌DM9811代謝產(chǎn)物提取液制成的含漱液含漱治療后發(fā)現(xiàn),乳桿菌DM9811代謝產(chǎn)物對(duì)固定矯治患者帶環(huán)牙牙齦炎的各項(xiàng)臨床指標(biāo)均有改善作用,對(duì)齦下菌斑中梭桿菌、擬桿菌等均有抑制作用,對(duì)有益菌中的血鏈球菌有扶持作用。還有研究報(bào)道稱患者食用含唾液乳桿菌WB21 的片劑能顯著降低牙周袋深度,特別是對(duì)吸煙者效果更顯著,同時(shí)也能降低牙周炎菌斑的數(shù)目[28]。以上研究表明,乳酸桿菌定植于口腔內(nèi)對(duì)維持口腔生態(tài)平衡發(fā)揮重要作用,雖然其作用的確切機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

    3.3益生菌與其他口腔疾病口臭是指從口腔或其他充滿空氣的空腔中如鼻、鼻竇、咽,所散發(fā)出的臭氣,它嚴(yán)重影響人們的社會(huì)交往和心理健康,全球約有10%~65%的人曾患有口臭,絕大部分(80%~90%)的口臭就是口腔衛(wèi)生出了問(wèn)題。口源性口臭主要是口腔內(nèi)革蘭陰性厭氧菌通過(guò)消化口腔內(nèi)滯留的食物殘?jiān)?、唾液和血液等物質(zhì)而產(chǎn)生揮發(fā)性硫化物(volatile sulfur compounds,VSCs) 的結(jié)果,而硫化氫(H2S) 與甲硫醇(CH3SH)是VSCs 中最主要的兩種[29]。對(duì)于口臭的治療,一般可以通過(guò)刷牙、刷舌苔和使用抗菌物質(zhì)等治療而降低,但是這些方法停止使用后口臭會(huì)反彈。

    近年來(lái)很多學(xué)者開始探索更有效地防治口臭的方法,其中包括益生菌在口臭治療方面的研究。Kang 等[30]通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明食竇魏斯氏菌能通過(guò)產(chǎn)生過(guò)氧化氫抑制具核梭桿菌的增殖,從而降低VSCs 水平,減少口腔異味。國(guó)際著名微生物學(xué)家、新西蘭奧塔哥大學(xué)教授約翰·塔格從兒童唾液中最先分離到一株唾液鏈球菌S.salivariusK12,研究發(fā)現(xiàn)S.salivariusK12 可分泌某種細(xì)菌素,這種細(xì)菌素可以抑制口臭相關(guān)細(xì)菌,這也許是S.salivariusK12 治療口臭的機(jī)制之一[31],國(guó)外將這株細(xì)菌作為益生菌直接用于治療鏈球菌性咽峽炎及口臭,取得了較滿意療效。另外還有報(bào)道唾液乳桿菌也能緩解口臭[32]。可見不同的益生菌對(duì)不同類型的口臭治療機(jī)制可能不同,不同的學(xué)者從不同的角度研究,能得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    另外,還有研究表明,益生菌能夠有效控制中老年人的口腔念珠菌病和口干癥[33],益生菌聯(lián)合制霉菌素治療小兒口腔念珠菌病的療效顯著高于單用制霉菌素,且復(fù)發(fā)率低[34]。

    4總結(jié)與展望

    綜上所述,益生菌對(duì)口腔疾病的防治研究目前主要存在以下幾個(gè)問(wèn)題:①篩選益生菌菌株的標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一;②菌株調(diào)節(jié)口腔菌群平衡的作用機(jī)理不明確;③菌株從實(shí)驗(yàn)研究轉(zhuǎn)化為臨床實(shí)踐還有待規(guī)范,如菌株的選擇、菌量的規(guī)定、載體的種類等都還沒有明確的標(biāo)準(zhǔn)。筆者認(rèn)為,口腔益生菌的篩選應(yīng)遵循以下標(biāo)準(zhǔn):①?gòu)目谇恢蟹蛛x菌株;②菌株能產(chǎn)生除酸以外的抑菌物質(zhì),如過(guò)氧化氫或細(xì)菌素。因?yàn)楫a(chǎn)酸能力強(qiáng)可能會(huì)造成齲齒;③菌株具有較好的口腔粘膜保護(hù)作用;④菌株應(yīng)通過(guò)一系列指標(biāo)驗(yàn)證,包括抗生素敏感性、產(chǎn)毒力、新陳代謝和溶血性,對(duì)無(wú)免疫動(dòng)物(immunocompromised animalmodels)的感染性,以及對(duì)人體的副作用和反作用;⑤菌株需經(jīng)的起長(zhǎng)期、大樣本量試驗(yàn)的考驗(yàn),確保菌株能有效治療口腔疾病且復(fù)發(fā)率低。另外,篩選到的菌株需要明確它的防病機(jī)制以及與宿主的相互作用,目前這方面缺乏可靠的理論依據(jù),有待于更系統(tǒng)和深入的研究。

    相信隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,不久的將來(lái)會(huì)有更多更好的技術(shù)方法應(yīng)用于防治口腔疾病的口腔益生菌的篩選,口腔益生菌研究和應(yīng)用必將呈現(xiàn)光明的發(fā)展前景。

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