磁性Fe3O4/石墨烯異質(zhì)結(jié)固定漆酶特性及其對水中雙酚A的降解研究

歐陽科，謝珊，趙雅，王雷超，方琪惠

1. 廣東省五邑大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，廣東 江門 529020

磁性Fe3O4/石墨烯異質(zhì)結(jié)固定漆酶特性及其對水中雙酚A的降解研究

歐陽科，謝珊*，趙雅，王雷超，方琪惠

1. 廣東省五邑大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，廣東 江門 529020

以磁性石墨烯為載體制備了磁性石墨烯固定化漆酶，考察了固定化漆酶的酶學(xué)特性及其對雙酚A（BPA）的降解效能。結(jié)果表明，氧化石墨烯的比表面積高達(dá)726.34 m2·g-1，與游離漆酶相比，經(jīng)過石墨烯固定化后漆酶對酸的適應(yīng)能力、耐熱性和貯存穩(wěn)定性均有所提高，pH值2.0～4.0范圍內(nèi)固定化漆酶活性較為穩(wěn)定；加入變性劑尿素（1 mol·L-1）后，固定化漆酶的相對活性為87%，游離漆酶相對活性僅為63.02%，固定化導(dǎo)致抗變性劑能力增強。固定化漆酶和游離漆酶活性分別在45和40 ℃時達(dá)到最大值。與游離漆酶相比，固定化漆酶最佳反應(yīng)溫度升高了5 ℃，且在50 ℃時，固定化漆酶的相對活性依然保持在95.11%；25 ℃，pH值4.0條件下保存10 d，固定化漆酶活性為最初活性的82.57%；固定化漆酶具有良好的重復(fù)利用性，重復(fù)利用10次后，漆酶活性仍為最初活性的82.01%。固定化酶的米氏常數(shù)Km為5.38×10-4mol·L-1，較游離酶的大，說明固定化酶與底物的親和力比游離酶小。磁性石墨烯固定化漆酶具有良好的吸附能力，可吸附-催化氧化水中的BPA，且石墨烯良好的吸附作用促進(jìn)了催化反應(yīng)，水中BPA質(zhì)量濃度為15 mg·L-1時，經(jīng)過18 h反應(yīng)，BPA的去除率能達(dá)到82.14%左右。本研究的結(jié)果為石墨烯新型材料固定化漆酶及其應(yīng)用提供了參考。

磁性石墨烯，固定化漆酶，酶學(xué)性質(zhì)，雙酚A

雙酚A（BisphenolA，CAS 80057，BPA）是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，是一種重要的化工原料(Safe等，2002)。隨著塑料制品的廣泛應(yīng)用，BPA造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染。目前在水、沉積物、土壤和大氣環(huán)境中均有檢出（Heemken等，2001）。作為典型內(nèi)分泌干擾素，BPA對生物體產(chǎn)生廣泛的不良作用，如：影響內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，影響組織發(fā)育以及致畸性等（秦偉程，2001），雙酚A的環(huán)境影響已經(jīng)引起廣泛關(guān)注。

漆酶是一種常見的含銅的多酚氧化酶, 具有較強的氧化還原能力，并且對底物的專一性要求不高。在氧氣存在條件下，漆酶通過4個銅離子協(xié)同傳遞電子和價態(tài)變化催化氧化水中的多種有機污染物（Lee等，2012；Nicolucci等，2011），如氯酚類、多環(huán)芳烴、多氯聯(lián)苯、芳胺及其衍生物、生物色素、殺蟲劑、雜環(huán)烴類、炸藥、染料等（Lioret等，2012；Ben等，2012；Kumar等2012）。由于漆酶降解水中有機污染物所需的反應(yīng)條件溫和、操作簡單、對環(huán)境無污染等優(yōu)點，目前已經(jīng)得到廣泛研究。然而，目前漆酶的實際應(yīng)用依然受到很大的限制，這主要是因為游離態(tài)的漆酶是水溶性的，很難回收及再次利用，使用成本過高。

將漆酶固定到載體上使用是行之有效的解決方法（Peralta等，2003；Reku?等，2010）。與游離酶相比，固定化酶在保持其高效專一及溫和的酶催化反應(yīng)特性的同時，又克服了游離酶的不足之處，呈現(xiàn)儲存穩(wěn)定性高、分離回收容易、可多次重復(fù)使用、操作連續(xù)可控、工藝簡便等優(yōu)點。固定化酶技術(shù)是近十幾年發(fā)展起來的酶應(yīng)用技術(shù)，在工業(yè)生產(chǎn)、化學(xué)分析和醫(yī)藥等方面有誘人的應(yīng)用前景。

石墨烯是一種二維平面結(jié)構(gòu)材料，作為納米材料的石墨烯具有巨大的比表面積，對有機污染物有良好的吸附能力，同時單層的石墨烯又能為酶促反應(yīng)提供大量的活性點位?；谑┑膹?fù)合材料已展現(xiàn)許多優(yōu)良的特性，在催化、儲能、環(huán)境治理和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域中的應(yīng)用前景寬廣（Li等，2008）。石墨烯的這些獨特特性都為其在酶固定化及酶催化領(lǐng)域中的應(yīng)用提供了堅實的理論依據(jù)。然而目前漆酶固定化載體研究較多的主要還是硅膠、活性炭、海藻酸鈣和殼聚糖等常規(guī)材料（Khani等，2006；Jiang等，2005）。采用石墨烯作為載體，并且將之應(yīng)用于催化氧化處理水中內(nèi)分泌干擾素的研究報道卻很少見。

在本研究中，將通過優(yōu)化制備工藝制得了性能穩(wěn)定的石墨烯固定化漆酶。并探討所制備的固定化漆酶的主要酶學(xué)性質(zhì)，針對水中內(nèi)分泌干擾素雙酚A（BPA），研究固定化漆酶催化降解效能，為固定化漆酶在水處理中的使用提供理論依據(jù)。

1 實驗方法

1.1 試劑與儀器

除漆酶（Laccase，50 U·mg-1）購自Sigma公司外，所有試劑均為國產(chǎn)分析純。乙腈、二氯甲烷，均為色譜純。PBS緩沖溶液的配置，按標(biāo)準(zhǔn)方法配制（王穎等，2013）。

立式壓力蒸汽滅菌鍋（YXQ-LS-30SⅡ，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），全溫震蕩培養(yǎng)箱（THZ-82A，金壇國盛儀器），無菌實驗臺（FLC-3，哈爾濱市東聯(lián)公司），高效液相色譜儀為Agilent公司1100型，色譜柱為AgilentC18柱，超聲波細(xì)胞破碎儀（JY92-2D，寧波新芝生物科技股份有限公司），電熱恒溫水浴鍋（HH-6，國華儀器），臺式 pH計（雷磁 pHS-3C，上海精科），紫外可見分光光度計（UV2450，島津），移液槍（Appendorf公司）。

1.2 Fe3O4/graphene異質(zhì)結(jié)制備及漆酶的固定化

以石墨片為原料，釆用Hummers法（Hummers等，1958）來制備氧化石墨烯（GO），采用多羥基法，通過鐵離子與氧化石墨烯表面官能團(tuán)的離子交換作用制備了磁性Fe3O4/石墨烯異質(zhì)結(jié)，具體方法見文獻(xiàn)（Li等，2013），將一定量的Fe3O4/graphene異質(zhì)結(jié)加入 2 mL檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液（pH5.0）和5 mL 0.8 mg·mL-1的漆酶溶液，在25 ℃恒溫?fù)u床中攪拌8 h，4 ℃條件下靜置，24 h后，用緩沖溶液多次洗滌以除去表面游離的漆酶，抽慮干燥后得磁性固定化酶，在4 ℃條件下密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 酶活力測定

漆酶活性測定方法：以2，2'-連氮-雙（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸銨（ABTS）作為底物，采用分光光度法檢測漆酶酶活（Johannes等，2001）。漆酶作用ABTS，產(chǎn)物在420 nm處有吸收峰。把漆酶催化氧化1 μmol ABTS所需的酶量定義為一個酶活單位。

游離酶和固定化酶活力測定：取一定量的游離酶和固定化酶，加入檸檬酸-磷酸氫鈉緩沖溶液中(pH 2.0～7.0)加入一定量的1 mmol·L-1的ABTS水溶液，在一定溫度下(25～85 ℃)反應(yīng)5 min，冰浴終止反應(yīng)10 min，離心取上清液，用紫外-可見分光光度計測定420 nm處的吸光度，計算酶活性。在25 ℃條件下，每分鐘使1 μmol的底物吸光度升高0.001所需的酶量定義為1個酶活力單位（U）。在相同條件下以試劑空白為參比。

1.4 固定化漆酶主要酶學(xué)性質(zhì)

酶學(xué)性質(zhì)測定：按照上述酶活力測定方法，利用檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液調(diào)節(jié)不同 pH值(2.0～7.0)、不同溫度(25～70 ℃)、不同時間(1～10 d)的ABTS水溶液，在420 nm處測定反應(yīng)上清液吸光度數(shù)值（以酶活最高者為100%），計算酶活性，每個樣品做3次平行測定，取平均值。

熱穩(wěn)定性：將游離漆酶（稀釋2×103倍）和固定化漆酶分別在不同溫度的水浴中保溫1 h后冷卻至室溫，按照上述方法測定酶活（pH=3.0，假定室溫下酶活為100%），每個樣品做3次平行測定，取平均值。

1.5 動力學(xué)參數(shù)

利用 PBS緩沖溶液配制 ABTS底物溶液為0.01～0.05 mmol·L-1的溶液，按照上述方法，分別測定反應(yīng)起始1 min內(nèi)游離漆酶和固定化漆酶于不同底物濃度下在420 nm處的吸光度數(shù)值，每隔10 s記錄吸光度變化(ΔA)，利用ΔA與時間t作圖求得初始速度，每個樣品做 3次平行測定。根據(jù)Hanes-Woolf方程：

式中：Vmax為最大反應(yīng)速率，V為酶反應(yīng)速率，[S]為底物濃度，Km是米氏常數(shù)，常用mol·L-1表示。以1/V對1/[S]作圖即可得Km值。

1.6 固定化漆酶降解BPA

150 mL錐形瓶中加入15 mg·L-1的BPA溶液（pH3.0），與75 mg固定化漆酶混合均勻，在室溫下?lián)u床中緩慢攪拌，按照不同反應(yīng)時間取樣分析水中BPA的濃度。

1.7 固定化漆酶降解BPA

BPA濃度的測定：對雙酚A濃度的測定采用高效液相色譜法（Kang等，2001）。將培養(yǎng)液樣品在高速離心機上以13000 r·min-1離心20 min，上清液直接于高效液相色譜（HPLC）測定。高效液相色譜儀為Agilent公司1100型，色譜柱為Agilent C18柱。色譜條件：流動相為V（乙腈）∶V（水）=50∶50，流速1 mL·min-1，柱溫40 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。

圖1 （a）氧化石墨烯的SEM；（b）Fe3O4/GO的SEM圖Fig. 1 (a) SEM picture of graphene oxide; (b) Fe3O4/GO SEM figure

2 結(jié)果與討論

2.1 磁性石墨烯的表征及分析

圖1（a）是氧化石墨烯的掃描電鏡（SEM）圖片，由圖1（a）可知，所制得的氧化石墨烯呈現(xiàn)厚度較薄的片狀結(jié)構(gòu)。圖1（b）是Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)構(gòu)的掃描電鏡圖片，與單純氧化石墨烯的SEM圖片比較，磁性Fe3O4納米顆粒依附于氧化石墨烯的表面。磁性Fe3O4納米顆粒為納米級，粒徑均一，比表面積較大，經(jīng)測定，磁性石墨烯的比表面為726.34 m2·g-1，石墨烯的比表面積為648.68 m2·g-1。相比傳統(tǒng)吸附材料如活性炭等，其比表面積要大很多，有利于漆酶的固定和BPA的吸附。

圖2是氧化石墨烯和磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)構(gòu)的紅外光譜圖，在氧化石墨烯中，有明顯的特征峰，3400 cm-1為O-H的伸縮振動，1712 cm-1為-COOH官能團(tuán)中C=O鍵的伸縮振動，1100 cm-1為C-O-C的伸縮振動，這些鍵的存在確認(rèn)了在石墨烯氧化的過程中，其碳基骨架上存在很多的含氧官能團(tuán)。與氧化石墨烯相比，磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)構(gòu)的紅外譜圖變化并不大，較大的區(qū)別是在587 cm-1處的出現(xiàn)的較尖銳的特征吸收峰則來源于 Fe-O的伸縮振動，從而證明了Fe3O4的存在。

圖2 （a）氧化石墨烯；（b）磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)的紅外譜圖Fig. 2 (a) FIRT spectra of GO; (b)FIRT spectra of Magnetic Fe3O4/GO

圖3 （a）磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)的室溫磁滯回線圖；（b）磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)的磁吸附圖Fig. 3 (a)Magnetic hysteresis loops of Fe3O4/GO heterojunction; (b) The photograph of GO and magnetic Fe3O4/GO after the presence of the magnet

在室溫下測定±10000 Oe范圍內(nèi)磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)的磁滯回線。如圖3所示，室溫磁滯回線顯示S形狀，其矯頑力為280e，表現(xiàn)為室溫鐵磁性，其飽和磁化強度為55.6 emu·g-1，且在外加磁場的作用下磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)分離良好。如圖3（b）所示為磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)的被磁鐵從水中分離的表觀圖，左右兩瓶是在外加磁場作用下10 mg·L-1濃度的GO和Fe3O4/GO溶液，由圖3（b）可見磁性Fe3O4/GO異質(zhì)結(jié)的分離效果良好，而GO因無磁性，不受磁場影響。

2.2 pH、溫度和變性劑對固定化漆酶性質(zhì)影響

不同pH值（2.0～7.0）條件下固定化漆酶和游離漆酶活性變化，如圖4（a）所示。可以看出，固定化漆酶與游離漆酶活性隨pH值變化的趨勢基本一致。pH值在2.0～3.0范圍內(nèi)，固定化漆酶與游離漆酶活性隨pH值的增加而升高，pH值為3.0時，游離漆酶活性達(dá)到最大，繼續(xù)增加pH值，其相對活性減小，而固定化漆酶在pH值為2.0～4.0范圍內(nèi)，其活性保持增加趨勢，在pH值為4的時候，固定化漆酶相對酶活依然保持為95.82%，而此時游離漆酶活性僅為56.18%。顯然，漆酶在固定化后有更寬泛的pH適應(yīng)范圍。

圖4 （a）25 ℃條件下，pH值對酶活性的影響；（b）pH3.0條件下，溫度對酶活性的影響Fig. 4 (a) the influence of pH on enzyme activity(25 ℃); (b) the influence of temperature on enzyme activity(pH3.0)

由于氧化石墨烯巨大的比表面積、表面能和帶電狀態(tài)提供了不同于游離態(tài)漆酶所處的獨特微環(huán)境，從而影響漆酶活性部位（催化基團(tuán)、結(jié)合基團(tuán)）或者底物的局域濃度以及吸附狀態(tài)，進(jìn)而影響酶促反應(yīng)（Iren等，2008）。一般來說，酶作為蛋白質(zhì)，對pH值的變化比較敏感。當(dāng)水溶液中pH發(fā)生改變，由于石墨烯巨大的比表面積，能對漆酶分子及其活性部位提供一定的保護(hù)作用，同時由于石墨烯表面存在大量的活性官能團(tuán)，酶與石墨烯表面發(fā)生一定的物理和化學(xué)作用，從而提高了固定化漆酶對pH變化的適應(yīng)范圍。不同溫度（20～70 ℃）條件下固定化漆酶和游離漆酶的活性變化，如圖4（b）所示。

隨著溫度的升高，固定化漆酶和游離漆酶活性均呈先增大后減小的趨勢，且與pH值的變化類似，固定化漆酶和游離漆酶活性分別在45和40 ℃時達(dá)到最大值。固定化漆酶最佳反應(yīng)溫度升高了5 ℃，且在 50 ℃時，固定化漆酶的相對活性依然保持在95%，漆酶耐熱能力明顯提高。

圖5 變性劑對漆酶相對活性的影響Fig. 5 Denaturant for laccase relative activity

漆酶是蛋白質(zhì)，變性劑可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，因此會影響漆酶的實際應(yīng)用。使用不同濃度的尿素為變性劑，對游離漆酶和固定化漆酶的活性進(jìn)行了測定。圖5是游離漆酶和固定化漆酶的相對活性隨變性劑濃度變化的關(guān)系圖。當(dāng)變性劑濃度升高時，酶的相對活性明顯降低，但總體上來說，固定化漆酶的下降幅度要大大低于游離漆酶。尿素濃度為 1 mol·L-1的時候，固定化漆酶的相對活性為87%，游離漆酶相對活性僅為63%；在尿素濃度為6 mol·L-1的時候固定化漆酶的相對活性依然保有35%，而此時游離漆酶幾乎已經(jīng)完全失去活性。

2.3 固定化漆酶的穩(wěn)定性

圖6（a）為固定化漆酶和游離漆酶在不同溫度（25～75 ℃）中放置1 h后的相對活性變化。在相同放置溫度和時間條件下，兩者的剩余活性均隨溫度的升高而降低，但固定化漆酶的剩余活性相對較高。在 65 ℃以上的極端溫度條件下，固定化漆酶仍保持最初活性的32%，而游離漆酶剩余活性僅為8%。由此可見，固定化后漆酶的熱穩(wěn)定性得到明顯提高。

圖6 （a）pH=3.0時漆酶的熱穩(wěn)定性；（b）pH=3.0時漆酶的儲存穩(wěn)定性Fig. 6 (a)the thermal stability of enzyme (pH 3.0); (b) the storage stability of enzymes (pH 3.0)

圖6（b）為固定化漆酶和游離漆酶的儲存穩(wěn)定性圖。由圖可知，兩者的剩余活性都隨放置時間的延長而下降，游離漆酶的活性下降更為顯著。放置30 d后，固定化漆酶活性依然保持為初始值的48%，而游離酶的活性只有初始值的12%，說明漆酶經(jīng)過氧化石墨烯的固定化之后，貯存穩(wěn)定性得到明顯的提高。漆酶固定化后，氧化石墨烯獨特的空間結(jié)構(gòu)和表面性能對漆酶具有很好保護(hù)作用（王穎等，2013）。因此總體上看，固定化漆酶的抵抗化學(xué)變性和熱變性的能力、熱穩(wěn)定性和貯存穩(wěn)定性均得到了明顯提高。

2.4 重復(fù)使用性能

為了減少實際使用成本，磁性微粒固定化酶在反應(yīng)后可用磁鐵分離，重復(fù)使用。圖7表明，固定化酶在循環(huán)使用 10次后，其相對活性仍能保持初始值的82%左右，即磁性固定化酶能夠多次反復(fù)使用?？梢姽潭ɑ崦妇哂辛己玫闹貜?fù)操作穩(wěn)定性。

圖7 漆酶的重復(fù)使用性能Fig. 7 Repeated use properties of laccase

2.5 固定化漆酶的動力學(xué)研究

米氏常數(shù) Km是酶動力學(xué)的基本常數(shù)，表示當(dāng)酶反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度，用于反映酶與底物的親和力，即 Km越小，酶與底物的親和力越大。Km值的物理意義是，即Km值小的酶可以在相對低的底物濃度條件下達(dá)到最大反應(yīng)速度。配制系列濃度的底物，在50 ℃、pH值為3的反應(yīng)條件下，測定不同濃度的底物開始反應(yīng) 3 min的平均反應(yīng)速度，即單位時間內(nèi)轉(zhuǎn)化底物的量，并按照方程（1）采用雙倒數(shù)作圖法來計算米氏常數(shù)（Qiu等，2005）。

由圖8和式（1）可計算出，固定化漆酶的Km為 5.38×10-4mol·L-1，游離漆酶的 Km為 3.25×10-4mol·L-1，固定化酶的米氏常數(shù) Km較游離酶的大，說明固定化酶與底物的親和力比游離酶小。這顯然與固定化后石墨烯載體的對酶催化活性中心的空間阻礙有關(guān)，同時底物與反應(yīng)后產(chǎn)物的雙向擴散也受到空間位阻的限制，速度會下降，從而導(dǎo)致固定化漆酶催化能力下降（Liu等，2005）。

2.6 固定化漆酶對BPA的降解效能

一般來說，作為一種典型環(huán)境內(nèi)分泌干擾素，BPA在水體中的濃度往往很低。對于這種新型的低濃度有機物，催化劑要想更好的發(fā)揮催化性能，催化材料除了要由優(yōu)良的催化性能外，還必須要有良好的吸附性能，有機物只有首先預(yù)富集于催化劑表面附近，在局部形成較高的濃度，才能被酶更有效降解，因此石墨烯的吸附性能對固定化漆酶降解BPA有重要的促進(jìn)作用。

圖8 游離酶和固定化酶的米氏方程雙倒數(shù)Fig. 8 Mie equation of free enzyme and immobilized enzyme double bottom

磁性石墨烯作為載體，本身并不對 BPA具有降解能力，由圖9可以看出，其對BPA具有一定的吸附能力，2 h后即達(dá)到吸附平衡，吸附率約為23%左右。利用磁性石墨烯固定化漆酶催化氧化BPA，反應(yīng)18 h后，BPA的濃度由15 mg·L-1下降到2.70 mg·L-1，去除率可達(dá)82%，說明磁性石墨烯固定化漆酶對水中的BPA具有較好的催化氧化性能。

圖9 石墨烯和固定化酶的吸附和降解效果Fig. 9 The adsorption and degradation of GO and immobilized enzyme

3 結(jié)論

以磁性氧化石墨烯為載體通過化學(xué)交聯(lián)法固定漆酶。與游離漆酶相比，固定化漆酶在pH值為2.0～4.0范圍內(nèi)活性較為穩(wěn)定，最適使用溫度為45 ℃，25 ℃下保存50 d，剩余酶活仍為最初活性的95%；與游離漆酶相比，漆酶經(jīng)過固定化后對pH值的適應(yīng)能力、耐熱性和穩(wěn)定性均有所提高。對BPA的降解實驗表明，磁性氧化石墨烯固定化漆酶對 BPA具有良好的降解性能。漆酶固定在磁性氧化石墨烯上后可經(jīng)過 10次重復(fù)利用后，相對活性依然保持為初始活性的82%，具有良好的重復(fù)利用穩(wěn)定性。

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Catalytic Capacity and Enzymatic Characteristics of Immobilized Laccase on Magnetic Fe3O4/graphene Hybrids for Bisphenol A degradation

OUYANG Ke, XIE Shan*, ZHAO Ya, WANG Leichao, FANG Qihui
Department of Chemical and Environment Engineering, Wuyi University, Jiangmen 529020, China

Laccase was immobilized on Magnetic Fe3O4/graphenehybrids by the chemical coupling method. The BET of Magnetic Fe3O4/graphene hybrids was 726.34 m2·g-1; The enzymatic properties of the immobilized laccase and its catalytic capacity for BPA degradation were studied. In comparison to free laccase, the immobilized enzyme had better acid adaptability, and thermal and storage stability. Higher activity was observed for immobilized laccase at a pH value range of 2-4; over 95% of the initial activity of immoblized laccase was still observed at 50 ℃. After adding denaturant (1 mol·L-1), the activity of immoblized laccase was still 87%，much larger than that of free laccase(63%). The immoblized laccase possessed excellent reuse ablility, after reused 10 times, the activity of immoblized laccase was still 82.01%. After 10 days, 82.57% of the initial activity of immoblized laccase was retained. The immobilized laccase exhibited good catalytic capacity for removing BPA from aqueous solutions. When the amount of BPA was 15 mg·L-1, the removal efficiency of BPA in water (the concentration of immobilized laccase catalyst was 10 mg·L-1) reached 82% after 18 hours. The results indicated that the excellent absorb ability of graphene had good effect on the remove rate of BPA in water.

immobilized laccase; enzymatic property; 2,4-dichlorophenol; stability

X52

A

1674-5906（2015）01-0106-07

10.16258/j.cnki.1674-5906.2015.01.016

歐陽科，謝珊，趙雅，王雷超，方琪惠. 磁性Fe3O4/石墨烯異質(zhì)結(jié)固定漆酶特性及其對水中雙酚A的降解研究[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報, 2015, 24(1): 106-112.

OUYANG Ke, XIE Shan, ZHAO Ya, WANG Leichao, FANG Qihui. Catalytic Capacity and Enzymatic Characteristics of Immobilized Laccase on Magnetic Fe3O4/graphene Hybrids for Bisphenol A Degradation [J]. Ecology and Environmental Sciences, 2015, 24(1): 106-112.

國家自然科學(xué)基金項目（51308421）；五邑大學(xué)青年科學(xué)基金項目(2014ZK03)；廣東省高等學(xué)校優(yōu)秀青年教師培養(yǎng)計劃（3211700203）

歐陽科（1978年），男，副教授，博士，從事水污染控制和固體廢物資源化研究。*通訊聯(lián)系人：E-mail: wyuchemxs@126.com

2014-11-21