脂氧素A4對顱腦損傷伴失血性休克大鼠腦組織的保護作用

李 萍，許會彬，王化芬，崔 慶，吳玲玲

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）是臨床上常見的危重癥之一，因其病情兇險、并發(fā)癥多見，救治難度大，而過度炎癥反應是引起機體二次損傷的重要原因［1，2］。因此，如何減輕炎癥反應，抑制過度炎癥反應，對改善患者預后具有重要的意義。脂氧素A4（LXA4）是一種內源性脂類介質，被稱為是炎癥反應的“剎車信號”，其通過抑制中性粒細胞的趨化、黏附和炎性介質的釋放而發(fā)揮廣泛的抗炎作用［3－6］。

本研究對TBIS大鼠進行術前LXA4干預，對大鼠腦組織S100β、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及腦含水量進行檢測，旨在探討LXA4對TBIS大鼠腦損傷的保護作用及可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組 清潔級雄性Wistar大鼠45只（購自山東大學醫(yī)學院實驗動物中心），體重220～250 g。隨機分成假手術組 （C組）、TBIS模型組和LXA4治療組，每組15只。

LXA4治療組于術前6 h及2 h尾靜脈注射LXA4（脂氧素 A4， Lipoxin A4methyl ester， 美國Cayman公司生產，溶于10%乙醇溶液），給予量為0.1 mg/kg體重。C組及TBIS組尾靜脈注射等量生理鹽水及10%乙醇溶液。

1.2 動物模型制備 大鼠實驗前禁食12 h，不禁水。采用自由落體復制顱腦外傷合并休克模型［1］。假手術組僅開顱窗后骨蠟封閉骨窗，不予于打擊及放血。

1.3 標本留取及指標測定

1.3.1 S100β、 丙二醛 （MDA） 及超氧化物歧化酶（SOD）測定 取新鮮腦組織，用生理鹽水制備10%組織勻漿液，離心后留取上清液，－80℃冰箱儲存?zhèn)錅y。S100β試劑盒購自長沙佳和生物科技有限責任公司，丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。測定步驟完全按照試劑盒說明書進行。

1.3.2 腦含水量測定 采用干濕重法。大鼠處死后斷頭，取腦組織，用天平稱濕重（W），再置于80℃電熱恒溫干燥箱中烘烤48 h至恒重稱干重（D）。腦含水量（%）＝（W－D）/W×100%。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用 SPSS 12.0統(tǒng)計軟件包進行分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 腦組織 S100β、MDA及 SOD水平變化 TBIS組與LXA4治療組腦組織勻漿S100β及MDA的水平均高于 C 組 （P＜0.01），SOD 活性低于 C 組 （P＜0.01）。 與 TBIS 組比較，LXA4治療組 S100β 及 MDA的水平均降低（P＜0.01），SOD 活性升高（P＜0.01）。見表1。

表1 腦組織 S100β、MDA 及 SOD 水平變化（±s，n＝15）

表1 腦組織 S100β、MDA 及 SOD 水平變化（±s，n＝15）

注：與 C 組比較，＊P＜0.01；與 TBIS 組比較，＃P＜0.01

組別 S100β（ng/L） MDA（nmol/mg pro） SOD（U/mg pro）C 組 141.5±22.3 3.27±0.65 29.38±6.71 TBIS 組 262.1±28.9＊ 6.61±1.53＊ 14.55±4.29＊LXA4治療組 192.8±26.7＊＃ 4.22±0.81＊＃ 21.38±4.85＊＃

2.2 腦含水量比較 同C組比較，TBIS組與LXA4治療組腦組織均有明顯水腫，腦含水量明顯增加（P＜0.01），LXA4與 TBIS 組比較，腦含水量明顯降低（P＜0.05）。 見表 2。

表2 腦含水量比較（±s，n＝15）

表2 腦含水量比較（±s，n＝15）

注：與 C 組比較，＊P＜0.01；與 TBIS 組比較，＃P＜0.01

組別 腦含水量（%）C 組 58.91±9.04 TBIS 組 82.46±7.59＊LXA4治療組 69.02±8.21＊＃

3 討 論

對顱腦損傷合并失血性休克（TBIS）來說，過度炎癥反應引起機體的二次損傷是加劇病情惡化的重要因素之一。因此抑制炎癥因子的釋放，防止過度炎癥反應，緩解TBIS的病程進展是改善TBIS預后的重要措施之一。

脂氧素（LX）是一類花生四烯酸酯加氧酶代謝產物，屬于二十烷家族中重要成員之一。LXA4是體內重要的內源性促炎癥消退介質，其在促炎介質前列素E2和白三烯之后產生。一方面，LXA4通過抑制白細胞游走、拮抗白三烯、抑制黏附分子及趨化因子受體表達，從而抑制機體炎癥反應及病情的進一步惡化。另一方面，LXA4通過促進巨噬細胞的吞噬作用，及時清除凋亡的中性粒細胞，促進炎癥消退［3－6］。

S100β蛋白是神經系統(tǒng)的特異性蛋白，主要存在于中樞神經系統(tǒng)的星形細胞和少突神經膠質細胞。研究表明S100β在顱腦外傷、腦血管疾病及繼發(fā)性腦損傷等疾病中均有較高表達，可反映血腦屏障的破壞情況，被稱為腦的“C 反應蛋白”［7，8］。 本研究顯示，TBIS組與LXA4治療組腦組織勻漿S100β水平均高于C組。與TBIS組比較，LXA4治療組S100β水平降低。本研究腦組織含水量結果顯示，同C組比較，TBIS組與LXA4治療組腦組織均有明顯水腫，腦含水量明顯增加，LXA與TBIS組比較，腦含水量明顯降低。表明應用LXA4對TBIS干預能夠減輕模型大鼠的腦損傷。

創(chuàng)傷后機體會發(fā)生氧應激損傷，由此引起多種炎癥介質的釋放，會進一步加劇休克的進程。丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）能較好反映機體內氧自由基水平和機體對氧自由基的清除能力。本研究結果顯示，TBIS組與LXA4治療組腦組織勻漿MDA的水平均高于C組，SOD活性均低于C組。說明在TBIS早期，腦組織內產生了大量氧自由基。而SOD水平的降低使得機體對氧自由基的清除能力下降，并可進一步造成機體的氧化與抗氧化平衡體系被打破，導致腦組織中氧自由基的蓄積，加劇腦組織的損傷。與TBIS組比較LXA4治療組腦組織勻漿MDA活性降低，SOD活性升高。說明LXA4干預，能明顯降低腦組織氧自由基的產生，有效增強機體的抗氧化水平。

總之，LXA4干預可有效降低TBIS大鼠腦組織的脂質過氧化水平，增強清除氧自由基的能力，減輕炎癥反應，對TBIS所致腦組織損傷具有保護作用。

［1］許會彬，王 青，王化芬，等.大鼠顱腦損傷伴休克所致小腸過氧化損傷及ω－3多不飽和脂肪酸的保護作用［J］.中華實驗外科雜志，2011，28（9）：1584.

［2］孫榮青，朱麗超，周新閣，等.重組人促紅細胞生成素對顱腦損傷患者血清腦紅蛋白、血紅蛋白含量的影響［J］.鄭州大學學報，2014，7（2）：257－260.

［3］呂萬治，呂重慶，余夙慧，等.脂氧素A4對TNF－α誘導的內皮細胞炎癥反應的影響［J］.溫州醫(yī)學院學報，2013，43（1）：1－4.

［4］趙琦峰，邵 蘭，杜 杰，等.脂氧素A4不同給藥時機對大鼠心肌缺血再灌注時縫隙連接蛋白43表達的影響［J］.中華麻醉學雜志，2013，33（10）：1266－1271.

［5］陳寬林，方明明，張玉穎，等.脂氧素A4調節(jié)Smad7/3表達對糖尿病腎臟保護機制實驗研究［J］.實用臨床醫(yī)藥雜志，2013，17（21）：58－61.

［6］張小玲，薛榮亮，王海麗，等.脂氧素A4后處理對大鼠全腦缺血再灌注時細胞凋亡的影響［J］.中華麻醉學雜志，2013，33（4）：493－495.

［7］張興超，雷 鵬，彭龍鋒，等.中度失血性休克對大鼠重型腦損傷后 S－100β 表達的影響［J］.西北國防醫(yī)學雜志，2008，29（1）：10－12.

［8］趙朝華，吳樹強，楊 杰，等.天麻素預處理對短暫性腦缺血大鼠腦組織 S100β 表達的影響［J］.中國老年學雜志，2014，20（8）：2156－2158.