云南省某大學(xué)新生中嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體感染的血清流行病學(xué)調(diào)查

崔宇暉王艷紅宣 群楊志芬何瑞云柳愛(ài)華寶福凱▲

1.昆明醫(yī)科大學(xué)熱帶醫(yī)學(xué)研究所 病原生物學(xué)與免疫學(xué)系，云南昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學(xué)校醫(yī)院，云南昆明650500；3.昆明醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)系，云南昆明 650500

云南省某大學(xué)新生中嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體感染的血清流行病學(xué)調(diào)查

崔宇暉1△王艷紅1宣 群1楊志芬2何瑞云2柳愛(ài)華3▲寶福凱1▲

1.昆明醫(yī)科大學(xué)熱帶醫(yī)學(xué)研究所 病原生物學(xué)與免疫學(xué)系，云南昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學(xué)校醫(yī)院，云南昆明650500；3.昆明醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)系，云南昆明 650500

目的 評(píng)估云南省某大學(xué)新生嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的感染情況，間接了解人嗜粒細(xì)胞無(wú)形體感染在云南省的發(fā)生情況。 方法 采集來(lái)自云南滇中、滇東北兩地區(qū)于某大學(xué)新生血樣標(biāo)本，用間接熒光免疫法檢測(cè)Anaplasma phagocytophilum IgG抗體，計(jì)算抗體陽(yáng)性率。 結(jié)果 共檢測(cè)大學(xué)新生血清標(biāo)本45份，檢出嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體血清 IgG抗體陽(yáng)性7份，其中滇中4份，滇東北3份，陽(yáng)性率為15.56%。 結(jié)論 云南省存在人感染嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的情況，滇中地區(qū)學(xué)生的抗體陽(yáng)性率與滇東北地區(qū)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)人嗜粒細(xì)胞無(wú)形體病的監(jiān)測(cè)與控制。

嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體；人嗜粒細(xì)胞無(wú)形體??；大學(xué)新生；云南省

人粒細(xì)胞無(wú)形體?。℉GA）是由嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體（Anaplasma phagocytophilum）感染引起的新發(fā)蜱傳人獸共患病，主要臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、頭痛、疲勞，白細(xì)胞、血小板減少，肝酶輕度增高等[1]。本病廣泛分布于世界熱帶和亞熱帶地區(qū)，在南北美洲、非洲、南歐、澳大利亞、中東等地流行，是美國(guó)第二大流行的蜱傳播疾病[2]。傳統(tǒng)認(rèn)為無(wú)形體只感染動(dòng)物，早在1952年英國(guó)科學(xué)家Foggie等報(bào)道了無(wú)形體引起牛、羊感染，經(jīng)蜱傳染的病原體命名為嗜吞噬細(xì)胞埃立克體（ehrlichia phagocytophilum）[3]。20世紀(jì)90年代后，無(wú)形體病流行區(qū)擴(kuò)大，并有人類發(fā)病的情況。此時(shí)期，第1例人粒細(xì)胞無(wú)形體病由美國(guó)報(bào)道[4]。后來(lái)發(fā)現(xiàn)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體對(duì)人致病的情況，該病的臨床表現(xiàn)無(wú)明顯特異性，可出現(xiàn)發(fā)燒、肌肉痛、頭痛、嗜睡、關(guān)節(jié)痛、白細(xì)胞減少以及血液學(xué)的異常等。主要傳播媒介為蜱蟲，在美國(guó)以肩突硬蜱和太平洋硬蜱為主；在歐洲和亞洲，以篦子硬蜱和全溝硬蜱為主；我國(guó)以全溝硬蜱為主[5]。2006年，我國(guó)在安徽省首次發(fā)現(xiàn)人嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體病的病例[3-6]。最近研究顯示我國(guó)吉林、青海、湖南、甘肅、貴州、河南等8省均有嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體感染人的情況[7]。2009年邊長(zhǎng)玲等[8]檢測(cè)西南地區(qū)小型獸類嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體基因，發(fā)現(xiàn)云南香格里拉雪山等林區(qū)小型獸類標(biāo)本無(wú)形體檢出陽(yáng)性率為4.44%，證明了當(dāng)?shù)匾吧鷦?dòng)物攜帶有無(wú)形體。此實(shí)驗(yàn)對(duì)云南某大學(xué)新生中進(jìn)行了血清流行病學(xué)調(diào)查，以明確云南地區(qū)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體感染人類的情況，間接了解人嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體病在云南省的分布情況。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查對(duì)象

選擇云南某大學(xué)入學(xué)（2008年9月）的本省新生45人，入學(xué)體檢行外周靜脈采集血液樣本，分離血清樣本于-20℃保存。按地理位置分為滇中、滇東北兩組，各組樣本數(shù)分別為19、26份。滇中地區(qū)包括玉溪、昆明、楚雄；滇東北地區(qū)包括曲靖和昭通。

1.2 試劑

Focus Technilogies HGA IFA IgG Test Kit購(gòu)自美國(guó)FOCUS公司（Cypress CA USA。REF IF1450G）。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

微量移液器（BIOHIT公司）；NW Ultra-pure Water System（Heal Force公司）；SC-316立式冷藏柜（青島海爾特種電冰柜有限公司）；BC/BD-519HAN臥式冷藏冷凍轉(zhuǎn)換柜（青島海爾特種電冰柜有限公司）；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠）；立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；熒光顯微鏡NIKON90i（尼康公司）。

1.4 方法

采用間接熒光免疫法，測(cè)定檢測(cè)對(duì)象血清中嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體IgG抗體。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，陰性、陽(yáng)性對(duì)照均設(shè)復(fù)孔，置于熒光顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 Anaplasm phagocytophi IgG檢測(cè)結(jié)果的判斷方法

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)、光源條件和類型決定了整個(gè)熒光強(qiáng)度和端點(diǎn)滴度。按說(shuō)明書以如下標(biāo)準(zhǔn)讀取每個(gè)加樣孔中桑椹胚的熒光強(qiáng)度和等級(jí)見(jiàn)圖1。（1）陽(yáng)性：中度到強(qiáng)度的蘋果綠色熒光的桑椹胚。（2）陰性：無(wú)熒光或熒光相當(dāng)于陰性對(duì)照的強(qiáng)度。

圖1 嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體IgG抗體間接熒光免疫檢測(cè)示例

2.2 嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體IgG檢測(cè)結(jié)果

本次試驗(yàn)共檢測(cè)45份云南籍新生血清標(biāo)本，IgG抗體陽(yáng)性7份，抗體陽(yáng)性率為15.56%。其中滇中地區(qū)陽(yáng)性4份；滇東北的陽(yáng)性3份（表1）。

2.3 滇中與滇東北地區(qū)陽(yáng)性率的比較

滇中與滇東北地區(qū)某大學(xué)入學(xué)新生無(wú)形體陽(yáng)性率的比較，用Prism6.0軟件做方差分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。尚不能認(rèn)為滇東北地區(qū)比滇中地區(qū)的發(fā)病率高。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 云南省部分地區(qū)新生嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體IgG抗體間接熒光免疫檢測(cè)果及兩地陽(yáng)性率的比較

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體特異性IgG抗體檢測(cè)，獲得滇中、滇東北入學(xué)新生IgG血清陽(yáng)性率分別為16.67%和14.09%。上述感染率略高于天津的農(nóng)村普通人群感染率8.8%[9]，以及程周祥[10]提出的與死亡病例（首例患者）病后有過(guò)密切接觸的人員感染率14.3%等。但低于福建北部林區(qū)人群感染率17.1%[11]，以及近來(lái)報(bào)道的新疆和碩、石河子、博樂(lè)3個(gè)地區(qū)人群IgG血清陽(yáng)性率分別為42.6%、35.2%、56.0%[12]。該病的發(fā)生受多種因素的影響，如蜱蟲的分布、密度與種群類別，云南是典型的立體氣候分布地區(qū)，熱帶、亞熱帶地區(qū)占全省很大比例，植物覆蓋率高，利于蜱蟲的生長(zhǎng)繁殖。目前，普通人群對(duì)蜱蟲傳播疾病缺少了解，防護(hù)意識(shí)低，對(duì)人嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體病臨床表現(xiàn)認(rèn)識(shí)不夠，治療不及時(shí)，延長(zhǎng)感染窗口期，也會(huì)影響嗜吞噬細(xì)胞無(wú)形體的感染情況。該實(shí)驗(yàn)?zāi)壳皟H是一個(gè)初步實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)標(biāo)本數(shù)量仍有不足，后續(xù)實(shí)驗(yàn)有待改善。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明云南省存在嗜吞噬細(xì)胞埃立克體感染人的情況。關(guān)于HGA在云南省的流行特征和疫源地性質(zhì)，有待進(jìn)一步研究。

熱帶蟲媒傳染病遠(yuǎn)距離傳播的情況越來(lái)越常見(jiàn)，一些熱帶蟲媒傳染病在東南亞嚴(yán)重流行。云南是典型的立體氣候分布地區(qū)，熱帶、亞熱帶地區(qū)占全省很大比例。加之有漫長(zhǎng)的國(guó)境線，國(guó)外傳染病容易傳入。隨著云南改革開(kāi)放力度加大、橋頭堡建設(shè)提速，以及面對(duì)全球氣候變暖，新發(fā)和再發(fā)熱帶蟲媒傳染病有隨時(shí)暴發(fā)的可能[13]。熱帶蟲媒傳染病不僅危害人類健康，而且給發(fā)展中國(guó)家和地區(qū)的畜牧業(yè)、旅游業(yè)造成毀滅性打擊，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。所以，我們必須重視和加強(qiáng)對(duì)新發(fā)和再發(fā)熱帶蟲媒傳染病的預(yù)防和控制[14]。

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Serological seroepidemiological investigation of Anaplasma phagocytophilum in newly-enrolled college students in yunnan province

CUI Yuhui1WANG Yanhong1XUAN Qun1YANG Zhifen2HE Ruiyun2LIU Aihua3BAO Fukai1
1.Department of Pathogen Biology and Immunology,the Insitute for Tropical Medicine,Kunming Medical University,Kunming 650500,China; 2.Hospital for Staff and Students, Kunming Medical University, Kunming 650500,China; 3.Department of Biochemistry and Molecular Biology,Kunming Medical University, Kunming 650500,China

Objective To assess the prevalence and characterization of Anaplasma phagocytophilum infection in new college students from two regions of Yunnan province. Methods Serum samples were collected from newlyenrolled college students, The IgG antibody against Anaplasm phagocytophilum in samples was detected with indirect immunofluorescence assay, positive rates were calculated. Results The total 45 newly-enrolled college students from two regions of Yunnan Province were enrolled in this study. The positive rate of A. phagocytophilum IgG was 15.56%. The positive rate of central region of Yunnan was 16.67%. The positive rate of northeast region of Yunnan was 14.09%. Conclusion There are Anaplasma phagocytophilum infection cases in Yunnan province. The positive rate of A. phagocytophilum IgG from two regions was insignificance. The surveillance, prevention and control for Human granulocytic anaplasmosis (HGA) should be strengthened.

Anaplasma phagocytophilum; Human granulocytic anaplasmosis; Newly-enrolled college students; Yunnan province

R978

A

2095-0616（2015）07-214-03

2014-11-27）

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81060134，81371835）；云南省自然基金項(xiàng)目（2007C069M）。

△昆明醫(yī)科大學(xué)2012級(jí)碩士研究生

▲通訊作者