光刺激體外培養(yǎng)的NG2細(xì)胞對(duì)海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2＋活性和電活動(dòng)的影響

郭大志，劉懌君，潘樹義，何 成，段樹民

·神經(jīng)疾病·

光刺激體外培養(yǎng)的NG2細(xì)胞對(duì)海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2＋活性和電活動(dòng)的影響

郭大志，劉懌君，潘樹義，何 成，段樹民

目的 觀察選擇性光刺激NG2細(xì)胞對(duì)海馬神經(jīng)元內(nèi)Ca2＋活性和電活動(dòng)的影響，并初步探討可能的作用機(jī)制。方法 體外純化培養(yǎng)新生SD大鼠NG2細(xì)胞，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法，在NG2細(xì)胞中特異性表達(dá)光敏感通道(channelrhodopsin-2，ChR2)蛋白DNA，并與體外培養(yǎng)7 d的海馬神經(jīng)元共培養(yǎng)48 h，采用藍(lán)光(470 nm、5 s、5 mW/cm2)選擇性刺激表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞，利用Ca2＋成像和電生理的方法記錄NG2細(xì)胞周圍海馬神經(jīng)元中的Ca2＋濃度變化和電流改變情況，同時(shí)比較加入/未加入γ-氨基丁酸A型受體抑制劑情況下神經(jīng)元的電流變化特點(diǎn)。結(jié)果 當(dāng)藍(lán)光刺激表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞后，首先NG2細(xì)胞內(nèi)的Ca2＋信號(hào)增強(qiáng)，隨后其周圍海馬神經(jīng)元內(nèi)的Ca2＋升高約20%；Ca2＋緩慢下降后再次出現(xiàn)一個(gè)Ca2＋峰，幅度較第1次小；NG2細(xì)胞周圍海馬神經(jīng)元的電流頻率增加，振幅增大。而當(dāng)預(yù)先在細(xì)胞外液中加入50 μmol/L γ-氨基丁酸A受體抑制劑后，海馬神經(jīng)元的電流頻率和振幅較未加抑制劑組明顯減小(P＜0.05)。結(jié)論 選擇性光刺激表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞可使其興奮，且可能通過釋放γ-氨基丁酸來調(diào)節(jié)神經(jīng)元活動(dòng)。

NG2細(xì)胞；光敏感通道；神經(jīng)元；γ-氨基丁酸

NG2細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一類新型膠質(zhì)細(xì)胞，廣泛分布在成年哺乳動(dòng)物的灰質(zhì)和白質(zhì)，占腦內(nèi)全部膠質(zhì)細(xì)胞的5%～10%，其功能至今未被完全闡明[1]。早期研究發(fā)現(xiàn)NG2細(xì)胞在體內(nèi)和體外可分化發(fā)育為少突膠質(zhì)細(xì)胞，故又稱其為少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(oligodendrocyte precursor cells，OPCs)[2]。研究發(fā)現(xiàn)，NG2細(xì)胞不但可以分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞，還可以分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元[3-4]。此外，NG2細(xì)胞表達(dá)多種受體和離子通道，能夠產(chǎn)生類似神經(jīng)元的“動(dòng)作電位”及長時(shí)程增強(qiáng)(long time potentiation，LTP)[5-6]。因此，NG2細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和整合中發(fā)揮重要作用。本研究擬通過在體外純化培養(yǎng)的大鼠NG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染光敏感通道(channelrhodopsin-2，ChR2)蛋白，與大腦海馬神經(jīng)元共培養(yǎng)，利用Ca2＋成像和電生理的方法，探討NG2細(xì)胞是否參與神經(jīng)元活動(dòng)的調(diào)節(jié)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新生SD大鼠，由浙江大學(xué)動(dòng)物中心[SCXK(浙)2007-2009]提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備、材料 500Ⅸ激光共聚焦顯微成像系統(tǒng)、Fluoview 5.0采集分析軟件(日本Olympus公司)，恒溫振蕩器(華利達(dá)HI-9211KB，太倉市教課器材廠)，激光器和多功能電子定時(shí)器(中國科學(xué)院神經(jīng)科學(xué)研究所)，四維機(jī)械微操縱器(SD-MX760，美國Burleigh公司)，培養(yǎng)皿(美國Corning公司)，多聚賴氨酸(poly-D-lysine，PDL，美國Sigma公司)，聚乙二醇辛基苯基醚(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)，血清Opti-MEM培養(yǎng)基(伊格爾最低必需介質(zhì)培養(yǎng)基改良型，美國Sigma公司)，孵育鈣熒光染料[Rhod-2，AM，阿拉丁試劑(上海)有限公司]，NG2多克隆抗體、血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor，PDGF)α單克隆抗體、CD11b、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP，美國Millipore公司)，Alexa Fluor 488標(biāo)志山羊抗兔二抗、Cy3標(biāo)志山羊抗小鼠二抗(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 NG2細(xì)胞培養(yǎng) 參考文獻(xiàn)[7]方法略作修改。取新生SD大鼠腦，取出大腦皮質(zhì)，0.125%胰蛋白酶，37℃，消化12 min、吹打成單細(xì)胞懸液，離心，以1×105/mL種植在預(yù)先鋪有PDL的75 cm2的培養(yǎng)瓶中。放入37℃、通95%空氣和5%CO2的濕潤培養(yǎng)箱中，每3 d換培養(yǎng)液。第10天時(shí)將培養(yǎng)瓶放置到搖床中200 r/min、37℃搖1 h，去除小膠質(zhì)細(xì)胞。更換新膠質(zhì)培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱平衡2 h，再將培養(yǎng)瓶放置到搖床中250 r/min、37℃搖16～18 h，收集培養(yǎng)液到無PDL包被的100 mm的培養(yǎng)皿中，放入培養(yǎng)箱30 min，期間不時(shí)輕輕晃動(dòng)。培養(yǎng)液收集離心后沉淀重懸，接種于PDL處理的玻片上，2 h換成純化OPCs培養(yǎng)基，貼壁細(xì)胞經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定，98%以上為OPCs細(xì)胞。

1.3.2 免疫熒光化學(xué) OPCs細(xì)胞4%多聚甲醛于室溫固定10 min，0.2%的聚乙二醇辛基苯基醚破膜10 min，10%牛血清蛋白封閉1 h，一抗4℃孵育過夜磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)洗3遍后，加對(duì)應(yīng)二抗(Alexa Fluor 488標(biāo)志山羊抗兔二抗或Cy3標(biāo)志山羊抗小鼠二抗)，在室溫下避光標(biāo)志1 h，0.01 mol/L PBS洗3遍后。細(xì)胞圖像最后于倒置的激光共聚焦顯微鏡下觀察。

1.3.3 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染 按試劑說明書進(jìn)行，將脂質(zhì)體和DNA按2∶1(μL∶μg)比例分別加入150 μL的無血清Opti-MEM培養(yǎng)基，靜置5 min后將兩者混合，輕輕吹打混勻。放置20 min后加入含Opti-MEM 700 μL的培養(yǎng)皿，于37℃培養(yǎng)箱放置1.5 h，吸去液體后加入大鼠OPCs細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3.4 藍(lán)光刺激 光源為氙燈，通過光纖將激光導(dǎo)出。激光器和多功能電子定時(shí)器相連，精確控制激光照射和關(guān)閉時(shí)間。光強(qiáng)通過功率計(jì)測(cè)定，470 nm，5 mW/cm2，光斑大小1 cm2。

1.3.5 Ca2＋成像 將純化培養(yǎng)并轉(zhuǎn)染ChR2蛋白的NG2細(xì)胞和體外純培養(yǎng)7 d的海馬神經(jīng)元共培養(yǎng)48 h。在培養(yǎng)箱中孵育鈣熒光染料(5 μmol/L)20～30 min，0.01 mol/L PBS洗3遍。通過激光器發(fā)射藍(lán)光照射(470 nm、5 mW/cm2)，使用激發(fā)光譜為543 nm的共聚焦顯微鏡適時(shí)掃描細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)的變化(× 60水鏡)。為防止熒光強(qiáng)度的淬滅，掃描時(shí)激光強(qiáng)度不超過0.5%。

1.3.6 電生理記錄 使用Axon 700A放大器采集，Clampex 8.0軟件進(jìn)行記錄。電極尖端入水前，輕輕推動(dòng)注射器在電極內(nèi)給一個(gè)正壓。在電壓鉗模式下用四維機(jī)械微操縱器引導(dǎo)充有電極內(nèi)液的玻璃微電極。待電極尖端靠近細(xì)胞后，釋放掉正壓并順勢(shì)用嘴給一個(gè)負(fù)壓，同時(shí)慢慢將鉗制電壓調(diào)節(jié)到－70 mV。待形成高阻封接(＞1 G Ω)之后，給予快速有力的負(fù)壓使電極尖端下的細(xì)胞膜破裂，從而形成全細(xì)胞記錄模式。在gap-free模式下，比較加入/未加入γ-氨基丁酸(gamma-amino-butyric acid，GABA)A型受體抑制劑情況下，藍(lán)光刺激后表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞周圍海馬神經(jīng)元的電流變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用GraphPad Prism 5軟件，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用Student's t檢驗(yàn)法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NG2細(xì)胞免疫組化鑒定 NG2細(xì)胞純化培養(yǎng)貼壁生長1～2 d后，NG2抗體陽性細(xì)胞數(shù)可達(dá)到95%以上，細(xì)胞胞體直徑很小(＜10 μm)，且呈現(xiàn)比較典型的“雙極”或“多極”突起的形態(tài)，不表達(dá)星形膠質(zhì)細(xì)胞特異標(biāo)志物GFAP和小膠質(zhì)細(xì)胞特異標(biāo)志物CD11b(圖1)。

圖1 體外純化培養(yǎng)的大鼠NG2細(xì)胞鑒定

2.2 Ca2＋活性 光刺激表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞可誘導(dǎo)其周圍海馬神經(jīng)元的Ca2＋活性升高(圖2)。當(dāng)給轉(zhuǎn)染ChR2蛋白的NG2細(xì)胞藍(lán)光刺激(5 s、5 mW/cm2)后，首先出現(xiàn)NG2細(xì)胞內(nèi)的Ca2＋信號(hào)增強(qiáng)，隨后其周圍海馬神經(jīng)元內(nèi)的Ca2＋升高約20%；Ca2＋緩慢下降后再次出現(xiàn)一個(gè)Ca2＋峰，幅度較第1次小。

2.3 神經(jīng)元電活動(dòng) 光刺激表達(dá) ChR2蛋白的NG2細(xì)胞可調(diào)節(jié)神經(jīng)元的電活動(dòng)(圖3)，當(dāng)給轉(zhuǎn)染ChR2蛋白的NG2細(xì)胞藍(lán)光刺激(5 s、5 mW/cm2)后，其周圍海馬神經(jīng)元的電流頻率增加、振幅增大[藍(lán)光刺激組(234±10.5)pA，藍(lán)光未刺激組(132± 12.8)pA；n＝29，P＜0.05]。在細(xì)胞外液中加入50 μmol/L GABA A受體抑制劑Bicuculin，藍(lán)光刺激轉(zhuǎn)染ChR2蛋白的NG2細(xì)胞后，其周圍海馬神經(jīng)元的電流頻率和振幅明顯減小[加抑制劑組(129±11.6) pA，無抑制劑組(234±10.5)pA；n＝29，P＜0.05]。

圖2 藍(lán)光刺激表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞誘導(dǎo)周圍海馬神經(jīng)元的Ca2＋活性升高

圖3 光刺激表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞調(diào)節(jié)神經(jīng)元的電活動(dòng)

3 討論

NG2細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞、Ⅱ型星形膠質(zhì)細(xì)胞，故又叫Ⅱ型星形膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞或多形性細(xì)胞等[8]。在特定腦區(qū)，NG2細(xì)胞還可以分化為神經(jīng)元[3]。越來越多的證據(jù)表明，NG2細(xì)胞在成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)的灰質(zhì)和白質(zhì)部位均勻分布，且無論從形態(tài)和電生理特性上均有別于星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，目前被認(rèn)為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的第4類膠質(zhì)細(xì)胞[9]。迄今為止，NG2細(xì)胞的生理功能仍不清楚。電鏡研究發(fā)現(xiàn)，NG2細(xì)胞的胞體在海馬區(qū)、小腦、皮質(zhì)等許多腦區(qū)與神經(jīng)元密切相鄰，形成“突觸樣”結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)與神經(jīng)元突觸不同，“突觸”后致密帶不明顯，突觸前紐扣較小、囊泡較少[10]。電生理研究發(fā)現(xiàn)，成年海馬區(qū)、胼胝體和小腦等部位的NG2細(xì)胞突起與神經(jīng)元軸突相靠近，接收神經(jīng)元信號(hào)，其Na＋從細(xì)胞外流入細(xì)胞內(nèi)，產(chǎn)生類似神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢坏腟pike[11-14]，甚至產(chǎn)生LTP[6]。這些研究提示，NG2細(xì)胞在成年腦內(nèi)除具有前體細(xì)胞分化功能外，也可能參與神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)。Tanaka等[15]發(fā)現(xiàn)NG2細(xì)胞能夠釋放突觸調(diào)節(jié)物質(zhì)，如腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子，更進(jìn)一步支持上述觀點(diǎn)。

ChR2蛋白在藻類中是一種光敏感通道蛋白，含315個(gè)氨基酸，構(gòu)成7次跨膜結(jié)構(gòu)，其中1個(gè)全反式視黃醛結(jié)合在蛋白核心部位，發(fā)揮光感受器的作用。當(dāng)ChR2蛋白受到470 nm的藍(lán)光刺激后，其全反式視黃醛異構(gòu)化，導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)改變，通道開放(Na＋、Ca2＋通道)，陽離子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而產(chǎn)生內(nèi)向電流使細(xì)胞興奮[16]。ChR2蛋白的開放與關(guān)閉時(shí)間極短，達(dá)毫秒級(jí)，可用來刺激神經(jīng)元穩(wěn)定發(fā)放動(dòng)作電位，近年被廣泛用于研究神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)、突觸可塑性相關(guān)功能及疾病的研究[17]。為探討NG2細(xì)胞興奮后是否影響神經(jīng)元活動(dòng)，本研究將轉(zhuǎn)染ChR2蛋白的NG2細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液(轉(zhuǎn)染率25%左右)，與體外純化培養(yǎng)7 d的海馬神經(jīng)元共培養(yǎng)48 h，利用光刺激技術(shù)特異性促使NG2細(xì)胞興奮，進(jìn)行Ca2＋成像實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明藍(lán)光刺激NG2細(xì)胞5 s(5 ms的脈沖、10 Hz)足以引起NG2細(xì)胞內(nèi)Ca2＋濃度變化，進(jìn)而誘發(fā)神經(jīng)元內(nèi)Ca2＋濃度升高，提示NG2細(xì)胞活性增加后可影響神經(jīng)元活動(dòng)。由于Ca2＋成像實(shí)驗(yàn)過程中沒有加河豚毒素，沒有阻斷神經(jīng)元的自發(fā)動(dòng)作電位，故不排除第2個(gè)Ca2＋峰是由神經(jīng)元興奮后的高反應(yīng)性所致。

藍(lán)光刺激表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞興奮所需時(shí)間較表達(dá)ChR2蛋白的神經(jīng)元要長，表明兩者細(xì)胞膜的電特性不同。有研究發(fā)現(xiàn)，NG2細(xì)胞膜的靜息電位與K＋平衡電位接近，約－100 mV，Na＋通道密度較K＋通道低[18]。提示NG2細(xì)胞很難像神經(jīng)元一樣產(chǎn)生動(dòng)作電位，故興奮性比神經(jīng)元低。然而，NG2細(xì)胞表達(dá)Ca2＋通透的α-氨基-3羥基-5-甲基-異惡唑丙酸受體(開關(guān)時(shí)間30～500 ms)，正常條件下Ca2＋內(nèi)流較少，但在某些條件下Ca2＋內(nèi)流增加仍能誘導(dǎo)NG2細(xì)胞產(chǎn)生 Spike或 LTP[5-6]。另有研究發(fā)現(xiàn)，NG2細(xì)胞表達(dá)代謝型P2Y1受體和離子型P2X7受體，ATP可通過作用于NG2細(xì)胞膜的這2種受體產(chǎn)生瞬時(shí)和長時(shí)程的Ca2＋反應(yīng)[19]。因此，Ca2＋在NG2細(xì)胞興奮中發(fā)揮重要作用。根據(jù)本研究結(jié)果，藍(lán)光照射表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞，使細(xì)胞外的Ca2＋通過ChR2蛋白進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，誘導(dǎo)NG2細(xì)胞內(nèi)的Ca2＋庫釋放，進(jìn)一步激活NG2細(xì)胞膜表面的Ca2＋通透性受體，形成“正瀑布”效應(yīng)。當(dāng)達(dá)到NG2細(xì)胞膜去極化的“閾值”時(shí)，NG2細(xì)胞興奮發(fā)揮作用，最終影響其周圍海馬神經(jīng)元的Ca2＋活性。這也能夠解釋為何NG2細(xì)胞需要長達(dá)5 s的藍(lán)光刺激才能引起神經(jīng)元活動(dòng)改變。由于擔(dān)心藍(lán)光強(qiáng)度過大會(huì)導(dǎo)致熒光淬滅或細(xì)胞死亡，本研究采用的光刺激強(qiáng)度較低，也可能是NG2細(xì)胞興奮所需時(shí)間較長的原因之一。

有研究表明，NG2細(xì)胞表達(dá)突觸蛋白synaptophysin——一種主要的突觸囊泡蛋白，提示NG2細(xì)胞可能有囊泡釋放神經(jīng)物質(zhì)的功能[20]。另有研究發(fā)現(xiàn)，大腦梨狀皮質(zhì)部位的NG2細(xì)胞形似星形的中間神經(jīng)元，可以分化為GABA能中間神經(jīng)元，因此不除外NG2細(xì)胞具有釋放內(nèi)源性抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA的功能[3]。Ca2＋成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，NG2細(xì)胞興奮可以影響神經(jīng)元的細(xì)胞活動(dòng)。那么NG2細(xì)胞是否對(duì)神經(jīng)元的電活動(dòng)有影響?本研究將轉(zhuǎn)染ChR2蛋白的NG2細(xì)胞與海馬神經(jīng)元共培養(yǎng)48 h，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，當(dāng)對(duì)表達(dá)ChR2蛋白的NG2細(xì)胞進(jìn)行藍(lán)光照射后，其周圍海馬神經(jīng)元的電活動(dòng)明顯增加，而預(yù)先孵育GABA A型受體抑制劑后，神經(jīng)元電活動(dòng)被明顯抑制，表明NG2細(xì)胞興奮可能通過向細(xì)胞外釋放GABA來調(diào)解神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。目前，還沒有確切證據(jù)表明NG2細(xì)胞能夠釋放GABA作用于神經(jīng)元，也不知道NG2細(xì)胞是否表達(dá)合成GABA所需的酶、運(yùn)輸GABA的囊泡裝置以及GABA是如何釋放出NG2細(xì)胞，未來還需要進(jìn)一步研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，選擇性光刺激NG2細(xì)胞可使其興奮，且可能通過釋放GABA來調(diào)節(jié)神經(jīng)元活性，進(jìn)一步提示NG2細(xì)胞不但具有神經(jīng)前體細(xì)胞的功能，還參與神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控，可能在某些病理生理?xiàng)l件下發(fā)揮重要作用，成為未來治療脫髓鞘相關(guān)疾病的靶點(diǎn)。但本研究僅停留在體外細(xì)胞培養(yǎng)層面，而體內(nèi)環(huán)境十分復(fù)雜，未來需進(jìn)行腦片實(shí)驗(yàn)對(duì)不同腦區(qū)的NG2細(xì)胞發(fā)揮的功能進(jìn)一步闡明。

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Influence of Ca2＋and electrical activity in neurons of hippocampus by stimulating NG2 cells with blue light in vitro

GUO Dazhi1，LIU Yijun2，PAN Shuyi1，HE Cheng3，DUAN Shumin2
(1.Department of Hyperbaric Oxygen，Navy General Hospital，Beijing 100048，China；2.Institute of Neuroscience，Zhejiang University，Hangzhou Zhejiang 310058，China；3.Department of Neurobiology，the Second Military Medical University，Shanghai 200433，China)

Objective It has been investigated that the change of Ca2＋and electrical activity in neurons of hippocampus influenced by NG2 cells which expressed channelrhodopsin-2(ChR2) and were stimulated by blue light，and then discussed the probable mechanism.Methods We cultured NG2 cells from the cortex of neonatal rats，and transfected ChR2 DNA to NG2 cells through liposomes，then co-cultured NG2 cells expressed ChR2 protein with hippocampal neurons for 48 hours.By way of calcium imaging and electrophysiological recording，we could observe the change of calcium concentration and current in hippocampal neurons around the NG2 cells expressed ChR2 which were stimulated by blue light(470 nm，5 s，5 mW/cm2).Meanwhile，we compared the change of current in hippocampal neuron pre-adding inhibitor in extracellular fluid with no inhibitor. Results In calcium imaging experiment，we found that there was an elevation of Ca2＋concentration in NG2 cells expressed ChR2 as soon as the blue-light stimulus，and then Ca2＋concentration in neurons around NG2 cells increased by 20%，following a second Ca2＋peak which its amplitude was smaller than the first.In the electrophysiological experiment，we found that it was bigger of the frequency and amplitude of current in neurons around NG2 cells expressed ChR2 which were stimulated by blue light than those with no blue light.However，if we added γ-amino-butyric acid(GABA)A receptor inhibitor(bicuculin，50 μmol/L)in extracellular fluid in advance，the frequency and am-plitude of current in neurons around NG2 cells expressed ChR2 which were stimulated by blue light (5 s，5 mW/cm2)were significantly smaller than those with no inhibitor(P＜0.05).Conclusion Selective stimulating NG2 cells expressed ChR2 protein with blue light is able to excite NG2 cells and may regulate neural activity by releasing GABA.

NG2 cells；Channelrhodopsin-2(ChR2)；Neuron；Gamma-amino-butyric acid (GABA)

R338.1－332

A

2095-3097(2015)04-0208-05

10.3969/j.issn.2095-3097.2015.04.005

2015-03-24 本文編輯:徐海琴)

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81401063)

100048北京，海軍總醫(yī)院高壓氧科(郭大志，潘樹義)；310058浙江杭州，浙江大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究所(劉懌君，段樹民)；200433上海，第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室(何 成)