上皮性卵巢癌組織中ASAP1蛋白的表達(dá)及其臨床意義

劉亞南，高愛(ài)華，朱維培

（蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇蘇州215000）

上皮性卵巢癌組織中ASAP1蛋白的表達(dá)及其臨床意義

劉亞南，高愛(ài)華，朱維培

（蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇蘇州215000）

目的：探討ASAP1蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)73例上皮性卵巢癌患者卵巢癌組織石蠟切片中ASAP1蛋白的表達(dá)。采用χ2檢驗(yàn)分析ASAP1表達(dá)與卵巢癌患者病理資料間的關(guān)系。并采用Kap1an-Meier進(jìn)行單因素生存分析，比較不同ASAP1蛋白表達(dá)水平的卵巢癌患者的預(yù)后。結(jié)果：ASAP1蛋白表達(dá)與腹腔積液量相關(guān)（P=0.005）；單因素生存分析顯示，ASAP1蛋白高表達(dá)組與低表達(dá)組總生存時(shí)間、無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.005，0.001）。結(jié)論：ASAP1蛋白高表達(dá)是上皮性卵巢癌患者預(yù)后不良的高危因素。

ASAP1；上皮性卵巢癌；免疫組化

上皮性卵巢癌是常見(jiàn)的婦科腫瘤，2008年全球約有225 500卵巢癌新增病例，死亡約140 200例［1］。卵巢癌患者的生存率與腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移相關(guān)。ASAP1［a phosphatidy1inosito1 4，5-bisphosphate-dependent Arf GTPase-activating protein（Arf GAP）］是磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸依賴Arf（ADP糖基化因子）的GTP激活蛋白，與細(xì)胞的黏附和樹(shù)突狀偽足形成有關(guān)［2］。文獻(xiàn)報(bào)道，近來(lái)有ASAP1的表達(dá)與前列腺癌及宮頸癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)［3-4］。目前國(guó)內(nèi)暫無(wú)ASAP1蛋白在卵巢癌轉(zhuǎn)移方面的相關(guān)研究報(bào)道，因此，本研究通過(guò)免疫組化法檢測(cè)卵巢癌組織中ASAP1的表達(dá)，分析ASAP1與上皮性卵巢癌患者臨床指標(biāo)和預(yù)后的關(guān)系，初步探討ASAP1在上皮性卵巢癌發(fā)展以及預(yù)后判斷中的作用。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集2004年1月至2008年12月在我院行全面分期手術(shù)或腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)、經(jīng)病理證實(shí)具有完整病歷和隨訪資料的上皮性卵巢癌患者卵巢癌組織蠟塊73例，患者術(shù)前未接受化療?；颊吣挲g22～75歲，平均50.75歲；病理類型：漿液性癌44例，非漿液性癌29例。按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2000年的手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期16例，Ⅱ期5例，Ⅲ期45例，Ⅳ期7例；病理分化程度：低分化26例，高分化47例。本實(shí)驗(yàn)所采用的石蠟標(biāo)本均取得患者的知情同意。以因子宮肌瘤行子宮加附件切除患者的正常卵巢組織標(biāo)本為對(duì)照。

1.2 免疫組化檢測(cè)ASAP1蛋白表達(dá)

采用SP法，所有標(biāo)本經(jīng)10％甲醛固定，石蠟包埋，選擇具有代表性的組織蠟塊進(jìn)行4 μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟，抗原修復(fù)，加1∶100 ASAP1一抗小鼠抗人單抗（美國(guó)Abcam公司）4℃過(guò)夜，二抗1∶200生物素化的抗小鼠抗體（丹麥Dako公司）室溫孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封固。PBS代替一抗為陰性對(duì)照。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

由2位病理醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立雙盲評(píng)分，每張切片在400倍鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)腫瘤細(xì)胞區(qū)，每個(gè)區(qū)域觀察100個(gè)腫瘤細(xì)胞。光鏡下ASAP1陽(yáng)性表達(dá)主要分布于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)，以出現(xiàn)棕色或棕褐色顆粒作為陽(yáng)性結(jié)果，將所選取區(qū)域中細(xì)胞的染色范圍和染色強(qiáng)度參考文獻(xiàn)［5］標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行半定量化，①染色強(qiáng)度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：未染色為0分，淡黃色為1分，棕色為2分，棕褐色為3分。②染色范圍計(jì)分以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比例計(jì)算：陽(yáng)性細(xì)胞率＜5％計(jì)0分，6％～10％計(jì)1分，11％～50％計(jì)2分，51％～80％計(jì)3分，≥80％計(jì)4分。染色結(jié)果總分為染色強(qiáng)度與染色范圍計(jì)分的乘積，0～4分為低表達(dá)，6～12分為高表達(dá)。

1.4 隨訪

對(duì)73例卵巢癌患者進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2013年6月，隨訪時(shí)間為2.6～107個(gè)月（中位隨訪時(shí)間為29.2個(gè)月）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)分析ASAP1表達(dá)與卵巢癌患者病理資料間的關(guān)系。采用Kap1an-Meier和Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行單因素生存分析，比較ASAP1蛋白高表達(dá)和低表達(dá)卵巢癌患者的預(yù)后。

2 結(jié)果

2.1 ASAP1蛋白在卵巢癌組織中的表達(dá)

ASAP1蛋白的表達(dá)主要位于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)，呈棕色，見(jiàn)圖1。根據(jù)ASAP1蛋白的表達(dá)將卵巢癌患者分為2組：ASAP1蛋白低表達(dá)組37例，ASAP1蛋白高表達(dá)組36例。

圖1 ASAP1蛋白的表達(dá)（×400）

2.2 ASAP1蛋白表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系

ASAP1蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者的腹腔積液量相關(guān)（P=0.005），與患者年齡、腫瘤分期、病理類型、腫瘤分化無(wú)關(guān)（P均＞0.05），見(jiàn)表1。

2.3 ASAP1蛋白不同表達(dá)水平的上皮性卵巢癌患者預(yù)后分析

隨訪期間共有21例死亡，患者的總生存時(shí)間為2.6～107個(gè)月，中位生存時(shí)間為29.2個(gè)月，無(wú)瘤生存時(shí)間為2.6～107個(gè)月，中位無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間為22個(gè)月。單因素生存分析顯示，ASAP1蛋白高表達(dá)組與低表達(dá)組間總生存時(shí)間與無(wú)進(jìn)展時(shí)間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.005，0.001）。見(jiàn)圖2、3。

3 討論

ASAP1相對(duì)分子質(zhì)量約為125 000，位于染色體8q24，與細(xì)胞的黏附和樹(shù)突狀偽足形成有關(guān)，敲除ASAP1或沉默ASAP1基因，樹(shù)突狀偽足的形成及黏附現(xiàn)象則消失［6-10］。ASAP1與腫瘤的發(fā)展與侵襲有關(guān)。Eh1ers等［11］報(bào)道，在惡性黑色素瘤中，ASAP1表達(dá)與促進(jìn)細(xì)胞的侵襲能力有關(guān)。Mü11er等［12］研究表明，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中ASAP1能促進(jìn)直腸癌的轉(zhuǎn)移，在體外實(shí)驗(yàn)中ASAP1能促進(jìn)直腸癌細(xì)胞的侵襲。本研究表明，ASAP1的表達(dá)與腹盆腔內(nèi)腹腔積液量相關(guān)。卵巢癌患者有腹腔積液是預(yù)后不良的高危因素，腹腔積液的產(chǎn)生是晚期患者的特征［13］。本課題組前期也有研究表明，隨著卵巢癌患者臨床分期的增加，腹腔積液量也有增加的趨勢(shì)，卵巢癌腹腔積液與腫瘤的惡性程度相關(guān)，惡性程度高者易形成腹腔積液，預(yù)后差［14］。卵巢癌患者癌細(xì)胞可阻塞淋巴管，暫時(shí)阻擋癌細(xì)胞向腹膜外轉(zhuǎn)移，但同時(shí)可促進(jìn)腹腔積液的產(chǎn)生，腫瘤轉(zhuǎn)移至腹膜和大網(wǎng)膜時(shí)引起局部刺激，使血漿蛋白滲漏至腹腔形成腹腔積液。ASAP1可被Arf1募集至細(xì)胞周邊，與細(xì)胞的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。ASAP1通過(guò)阻斷Arf1活性增強(qiáng)細(xì)胞的活動(dòng)性，ASAP1高表達(dá)組易形成腹腔積液，考慮與ASAP1促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞局部黏附，調(diào)節(jié)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)及細(xì)胞支架重塑有關(guān)。上述研究證明，ASAP1在惡性腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能起重要作用。本研究中ASAP1蛋白的表達(dá)與患者年齡、腫瘤分期、病理類型、腫瘤分化無(wú)關(guān)。

表1 上皮性卵巢癌組織中ASAP1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

圖2 ASAP1高低表達(dá)上皮性卵巢癌患者的總生存曲線

圖3 ASAP1高低表達(dá)上皮性卵巢癌患者的無(wú)復(fù)發(fā)生存曲線

本研究結(jié)果還顯示，ASAP1高表達(dá)患者總生存時(shí)間及無(wú)復(fù)發(fā)時(shí)間較ASAP1低表達(dá)患者短。由此提示ASAP1高表達(dá)是上皮性卵巢癌患者預(yù)后不良的高危因素，ASAP1不僅可作為卵巢癌的潛在標(biāo)志物，而且促進(jìn)上皮性卵巢腫瘤的侵襲，但分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。研究表明，ASAP1高表達(dá)致上皮生長(zhǎng)因子受體增多，與卵巢癌的進(jìn)展有關(guān)［15］。Baron等［16］研究結(jié)果表明，ASAP1高表達(dá)使腫瘤細(xì)胞遷徙及轉(zhuǎn)移與血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）介導(dǎo)的細(xì)胞通路有關(guān)。ASAP1的SH3結(jié)構(gòu)域可以與Src介導(dǎo)的細(xì)胞通路結(jié)合，與腫瘤細(xì)胞的偽足形成有關(guān)［17］。

本研究初步表明ASAP1可作為預(yù)測(cè)卵巢癌預(yù)后的潛在標(biāo)志物，但其在卵巢癌發(fā)展過(guò)程中的分子機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

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Expression and clinical significance of ASAP1 in epithelial ovarian carcinoma

LIU Ya-nan，GA0 Ai-hua，ZHU Wei-pei
（Department of Obstetrics and Gyneco1ogy，the Second Affi1iated Hospita1 of Soochow University，Suzhou Jiangsu 215000，China）

Objective：To exp1ore the expression and c1inica1 significance of ASAP1 in epithe1ia1 ovarian carcinoma（EOC）.Methods：The expression 1eve1 of ASAP1 in 73 paraffin-embedded EOC specimen was measured by immunohistochemistry staining.Statistica1 ana1ysis was performed to eva1uate the c1inicopatho-1ogic significance of ASAP1.Assemb1ed c1inica1 surviva1 data were ana1yzed with Kap1an-Meier curves.Results：Statistica1 ana1ysis disp1ayed a significant corre1ation in ASAP1 expression with ascitic f1uid（P= 0.005）.High expression of ASAP1 was corre1ated with poor overa11（P=0.005）and recurrence-free（P=0.001）surviva1 in patients with EOC.Conclusion：E1evated expression of ASAP1 may be used as a potentia1 marker of EOC patients.

ASAP1；epithe1ia1 ovarian carcinoma；immunohistochemistry

R737.31

A

1671-7783（2015）06-0495-03

10.13312/j.issn.1671-7783.y150187

2015-08-24 ［編輯］ 劉星星

劉亞南（1983—），女，湖北武漢人，主治醫(yī)師，碩士，主要從事婦科腫瘤診治研究；朱維培（通訊作者），主任醫(yī)師，E-mai1：zwp333xx@126.com