親環(huán)素A在人根尖周炎中的表達(dá)與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性研究

王艷青, 胡菊花, 李 頌, 胡淑麗, 張紅艷

(安徽 合肥 230032：1.安徽醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院;2.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，安徽省口腔疾病研究中心實(shí)驗(yàn)室)

親環(huán)素A在人根尖周炎中的表達(dá)與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性研究

王艷青1, 胡菊花2, 李 頌2, 胡淑麗2, 張紅艷1

(安徽 合肥 230032：1.安徽醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院;2.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，安徽省口腔疾病研究中心實(shí)驗(yàn)室)

目的: 初步探討人根尖周炎中親環(huán)素A(CypA)表達(dá)及與臨床表現(xiàn)的關(guān)系。方法：收集根尖手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷證實(shí)的根尖周炎病損組織83例作為實(shí)驗(yàn)組；收集新鮮拔除的健康正畸牙牙髓6例作為正常對(duì)照組。用免疫組織化學(xué)染色法分析比較各組織中CypA及RANKL的表達(dá)情況，取蛋白平均吸光度值(A值)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并比較其表達(dá)量與臨床癥狀的相關(guān)性。結(jié)果：根尖周炎病變組織中CypA主要表達(dá)于炎細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)和上皮組織，主要陽(yáng)性細(xì)胞為淋巴樣細(xì)胞、上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，正常對(duì)照組中少見(jiàn)CypA的表達(dá)；CypA在根尖肉芽腫組織中的表達(dá)量明顯高于根尖囊腫組(P<0.05)，RANKL在根尖囊腫組織中的表達(dá)量明顯高于根尖肉芽腫組(P<0.05)；有明顯臨床癥狀的根尖周炎組織中CypA和RANKL的A值均明顯高于無(wú)癥狀組(P<0.05)；CypA和RANKL的表達(dá)水平與根尖周炎病變大小均呈正相關(guān)(r=0.462，P<0.05；r=0.417，P<0.05)。結(jié)論：CypA存在于人根尖周炎病損組織中,可能參與人根尖周炎疾病的發(fā)病進(jìn)程。

親環(huán)素A; RANKL; 根尖周炎; 臨床表現(xiàn)

[DOI] 10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.02.003

[Chinese Journal of Conservative Dentistry,2015,25(2): 73]

根尖周炎主要是一種多數(shù)繼發(fā)于根管牙髓感染、以持續(xù)的抗原刺激引起宿主反應(yīng)和根尖部牙槽骨組織破壞為主要特征的牙體牙髓疾病[1-2]。這個(gè)免疫反應(yīng)是復(fù)雜的，它包括招募多種炎性細(xì)胞并形成多種細(xì)胞因子來(lái)參與一個(gè)廣泛的免疫反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)。有研究表明，在機(jī)體對(duì)細(xì)菌及其產(chǎn)物的免疫反應(yīng)中，會(huì)合成一些促炎細(xì)胞因子來(lái)誘導(dǎo)和維持炎癥反應(yīng)[3-5]。但根尖周病的具體發(fā)病機(jī)制目前仍不十分明朗。

親環(huán)素A(CypA)是人類(lèi)細(xì)胞內(nèi)蛋白親環(huán)素族中最豐富的一種，在動(dòng)脈粥樣硬化中、炎性和氧化應(yīng)激反應(yīng)中可由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分泌[6-7]；其可在炎性條件中由細(xì)胞胞外釋放，也可以通過(guò)與細(xì)胞外基質(zhì)中的金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(EMMPRIN)結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)[8-9]。最近，在對(duì)很多種疾病的研究中都在關(guān)注親環(huán)素A在其發(fā)展中的潛在作用，其中包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤和心血管疾病等[10-12]。已有研究證明，親環(huán)素A參與人類(lèi)牙周病和實(shí)驗(yàn)性小鼠牙周病的發(fā)病過(guò)程[13-14]。但在根尖周炎中仍沒(méi)有該因子的相關(guān)報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)旨在檢驗(yàn)親環(huán)素A是否存在于人類(lèi)根尖周病中，并通過(guò)比較根尖周炎病損組織中親環(huán)素A和RANKL(Receptor activator of NF KappaB Ligand)的表達(dá)情況以探討其與骨破壞的關(guān)系；同時(shí)結(jié)合不同臨床表現(xiàn)討論親環(huán)素A在根尖周病中的可能作用。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與試劑

Olympus CX21FS1型光學(xué)顯微鏡(奧林巴斯，日本)；Spot Advanced顯微攝像系統(tǒng)(Diagnostic Instrument Inc，美國(guó))；Image- Pro- Plus 6.0圖像處理系統(tǒng)(Media Cybemetics Inc，美國(guó))；隔水式恒溫培養(yǎng)箱(GNP- 9160型,上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG- 9140A型,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；微波爐(PJ21C- AU型, 廣東美的集團(tuán))；-20 ℃冰箱(BCD- 209KHC型, 安徽美菱股份有限公司)；Nikon生物顯微鏡(E200型，日本)；病理組織包埋機(jī)(BM- 2型, 上海同舸醫(yī)療器械有限公司)；LEICA組織切片機(jī)(RMZ125型，德國(guó))；SP通用型試劑盒(streptavidin- perosidas，鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連接法；福建邁新生物技術(shù)有限公司)；DAB顯色液(武漢博士德生物技術(shù)有限公司)；兔抗人CYPA抗體(ab154388，abcam, 美國(guó))RANKL抗體(Santa Cruz Biotechnology, CA)。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集和組織切片制備

收集我院頜面外科2014-01—2014-07經(jīng)根尖手術(shù)切除的根尖周炎病損組織83例，其中男42人，女41人。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～65歲；②無(wú)其他口腔疾病和全身性疾??；③3個(gè)月內(nèi)未服用抗生素和其他激素類(lèi)藥物。同時(shí)收集患者相關(guān)信息，包括臨床表現(xiàn)和根尖片(平行線投照技術(shù)[15])；并根據(jù)有無(wú)疼痛、腫脹等明顯臨床癥狀將其分為有癥狀組和無(wú)癥狀組。然后，由兩位不知本試驗(yàn)?zāi)康牡膶?shí)驗(yàn)員使用醫(yī)用軟件(clinview 8.2)測(cè)量根尖稀疏區(qū)的直徑并取平均值。另收集因正畸減數(shù)拔除的健康牙牙髓6例(男3例，女3例；年齡16～30歲)，作為正常對(duì)照組。

收集的所有組織樣本用100 mL/L甲醛液固定后，不同濃度梯度乙醇逐級(jí)脫水、常規(guī)石蠟包埋，并制作4 μm厚連續(xù)切片。本研究獲得了安徽醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的倫理審查批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào):2014013)。

1.2.2 常規(guī)組織學(xué)觀察及根尖病損類(lèi)型判定

分別取上訴各樣本組織切片，脫蠟、脫水后常規(guī)HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察，并按以下標(biāo)準(zhǔn)判斷根尖病損的類(lèi)型。①根尖肉芽腫：根尖部組織形成增生的肉芽組織團(tuán)塊，周?chē)欣w維結(jié)締組織包繞，其中以炎性細(xì)胞和成纖維細(xì)胞為主； ②根尖囊腫：以各種厚度的纖維囊腔為診斷特征，纖維囊腔被覆復(fù)層鱗狀上皮(厚薄不一)，上皮釘突因炎癥刺激發(fā)生不規(guī)則增生、伸長(zhǎng)，并相互融合成網(wǎng)狀，上皮表現(xiàn)為明顯的細(xì)胞間水腫和以中性粒細(xì)胞為主的上皮內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；纖維組織囊壁內(nèi)炎癥明顯，炎性浸潤(rùn)細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞，混雜有中性粒細(xì)胞以及泡沫吞噬細(xì)胞浸潤(rùn)[16]。

1.2.3 免疫組織化學(xué)染色觀察

1.2.3.1免疫組織化學(xué)染色方法

分別取上述各樣本組織切片，65 ℃下烤片2 h后常規(guī)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水，蒸餾水5 min； 30 mL/L過(guò)氧化氫 37 ℃孵育10 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗5 min×3次；置于640 mL枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)中用微波爐高火煮沸8 min，停 3 min再高火4 min，自然冷卻至常溫后PBS沖洗 3 min ×3次；正常羊血清液37 ℃下封閉30 min，傾去勿洗；分別滴加一抗兔抗人CypA 抗體(稀釋濃度：1 ∶400)、RANKL抗體(稀釋濃度：1 ∶150)；4 ℃ 冰箱孵育過(guò)夜(用PBS緩沖液代替一抗作空白對(duì)照)；PBS沖洗5 min×3次，滴加通用型生物素標(biāo)記二抗，37 ℃孵育30 min；PBS沖洗 5 min×3 次；滴加過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37 ℃孵育30 min；PBS沖洗5 min×3次，DAB(3，3＇- diaminobenzidine,二氨基聯(lián)苯胺)反應(yīng)染色；自來(lái)水充分沖洗后蘇木素復(fù)染1 min，常規(guī)脫水、透明、干燥、封片。

1.2.3.2 免疫組織化學(xué)染色鑒定

免疫組織化學(xué)染色以胞核、胞質(zhì)或胞膜上出現(xiàn)黃色或棕色顆粒為陽(yáng)性，顯微鏡400倍下從每張切片中隨機(jī)選取5個(gè)視野用顯微攝像系統(tǒng)拍攝照片，并用Image- pro- plus 6.0圖像分析系統(tǒng)分析每個(gè)組織切片上CypA和RANKL的蛋白平均吸光度值(A值)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0和EXCEL統(tǒng)計(jì)軟件。首先用Image- Pro plus圖像處理系統(tǒng)計(jì)量每個(gè)組織切片上CypA、RANKL的蛋白平均吸光度值(A)，并將數(shù)據(jù)錄入Excel 2003軟件，然后采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析：Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)顯示CypA和RANKL在根尖肉芽腫和根尖囊腫中的表達(dá)呈現(xiàn)非正態(tài)分布，使用Mann-Whitney U test比較兩者在不同病變類(lèi)型(對(duì)照組、根尖囊腫和根尖肉芽腫)間的表達(dá)情況；各組RANKL和CypA的相關(guān)性分析采用直線相關(guān)，先繪制散點(diǎn)圖，并求其相關(guān)系數(shù)r，之后再做顯著性檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 組織樣本基本情況及病理檢測(cè)結(jié)果

83例根尖炎性組織樣本有明顯臨床癥狀者39例、無(wú)明顯臨床癥狀者44例。

HE染色結(jié)果顯示：83例根尖周炎組織樣本中有49例為根尖肉芽腫，其組織中可見(jiàn)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，包括大量的淋巴細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，并可見(jiàn)成纖維細(xì)胞增殖形成的纖維組織 (圖1a)；有34例為根尖囊腫，可見(jiàn)上皮組織不同程度的增生(圖1b)。

a．根尖肉芽腫 b．根尖囊腫

圖1 HE染色觀察(×20)

2.2 免疫組化染色結(jié)果分析

2.2.1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較

83例根尖周炎組織中均檢測(cè)出有CypA的表達(dá)，正常牙髓組織(陽(yáng)性對(duì)照組)少見(jiàn)該因子表達(dá)，空白對(duì)照組中未檢測(cè)出該因子表達(dá)。根尖周炎病變組織中CypA主要表達(dá)于炎細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)和上皮組織，主要陽(yáng)性細(xì)胞為淋巴樣細(xì)胞、上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞；正常對(duì)照組和空白對(duì)照組中少見(jiàn)CypA的表達(dá)(圖2)。量化分析結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組CypA的蛋白表達(dá)量和RANKL的蛋白表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

2.2.2 肉芽腫組與囊腫組比較

免疫組化染色結(jié)果顯示： CypA 在肉芽腫中的表達(dá)明顯高于囊腫組(Z=4.48，P<0.05)；而RANKL在肉芽腫中的表達(dá)則明顯低于囊腫組(Z=4.48，P<0.05)(圖3～4)。

表1 各組樣本中CypA和RANKL的表達(dá)情況比較

空白對(duì)照組 根尖周炎病變組織正常牙髓(陽(yáng)性對(duì)照組)組織

圖2 免疫組化染色觀察(×40)

CypA在肉芽腫中的表達(dá)高于囊腫組(P<0.05) RANKL在肉芽腫中的表達(dá)低于囊腫組(P<0.05)

圖3 CypA和RANKL在根尖囊腫、根尖肉芽腫中的表達(dá)比較

根尖肉芽腫 根尖囊腫

圖4 根尖肉芽腫、根尖囊腫免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(×40)

2.3 臨床表現(xiàn)對(duì)比分析

免疫組化定量分析結(jié)果顯示，有明顯臨床癥狀的根尖周炎組織中CypA和RANKL的A值分別為77.24(69.48～89.54)和85.07(78.57～91.15)，二者均明顯高于無(wú)癥狀組的39.18(31.54～64.90)和48.09(38.36～74.35)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=2.724，P<0.05)(圖5)。

2.4 CypA和RANKL與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性分析

CypA和RANKL的表達(dá)水平與根尖周炎的病變大小均呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)(圖6)；無(wú)論在有癥狀組中還是在無(wú)癥狀組中，CypA的表達(dá)量與RANKL的表達(dá)量均呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.938,P<0.05;r=0.958,P<0.05)(圖7)。

圖5 CypA和RANKL在兩組根尖病損中的

圖6 CypA和RANKL蛋白的表達(dá)水平與根尖稀疏區(qū)大小的相關(guān)性

圖7 兩組中CypA與RANKL蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性比較

3 討論

本實(shí)驗(yàn)首次研究了CypA在人類(lèi)慢性根尖周炎中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床表現(xiàn)分析其在根尖周炎中可能發(fā)揮的作用。在心血管疾病[12]、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[10]以及癌癥[11]等相關(guān)研究中均已有大量的研究探討了該因子的作用，并證明CypA可能以促炎方式參與炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展。最近在牙周病的相關(guān)研究中也有兩篇文獻(xiàn)報(bào)道了CypA參與牙周病的發(fā)生發(fā)展[13-14]，而目前尚沒(méi)有CypA在根尖周病中的相關(guān)研究報(bào)道。RANKL是TNF超級(jí)家族中的一員，已經(jīng)被很多研究證明是一種參與骨質(zhì)破壞的因子[17]。鑒于根尖稀疏區(qū)的大小可反映臨床根尖骨質(zhì)破壞的程度，因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較CypA與RANKL蛋白表達(dá)量與臨床表現(xiàn)的關(guān)系，來(lái)討論CypA在根尖周炎中可能的作用。

在牙周炎的相關(guān)研究中，Li等[13]最先在動(dòng)物牙周病模型中檢測(cè)到CypA的表達(dá)。定量和相關(guān)性分析顯示：CypA在炎性牙齦組織中的表達(dá)量明顯高于正常牙齦組織；且與牙槽骨的喪失、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)呈正相關(guān)。隨后該作者又在人牙周病組織中發(fā)現(xiàn)了類(lèi)似情況[14]，說(shuō)明CypA可能參與牙周病中炎癥反應(yīng)和牙槽骨的喪失。本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)到根尖周炎病損組織中有CypA的表達(dá)，其表達(dá)水平明顯高于正常牙髓組織；提示CypA可能也參與了根尖周炎癥的發(fā)展。

本實(shí)驗(yàn)分別比較了CypA和RANKL在不同病損組織中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示：CypA在根尖肉芽腫組織中的表達(dá)量相對(duì)較多，而RANKL在根尖囊腫組織中的表達(dá)量相對(duì)較多,與Zhang等[18]的研究結(jié)果相吻合。CypA和RANKL在肉芽腫和囊腫中表達(dá)情況不同，可能與參與兩者表達(dá)的細(xì)胞不同有關(guān)。RANKL主要由成骨細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞及活化的T細(xì)胞表達(dá)[19]；而CypA主要由內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)[7-8,20]。同時(shí)有研究表明，CypA可作為一種強(qiáng)勁的趨化因子趨化中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及T細(xì)胞到炎性部位[21-22]；由于肉芽腫主要由大量新生成的微小血管并浸潤(rùn)大量炎性細(xì)胞及成纖維細(xì)胞；囊腫主要有明顯的纖維囊壁；因此本實(shí)驗(yàn)中CypA在巨噬細(xì)胞、成簇的內(nèi)皮細(xì)胞及淋巴樣細(xì)胞上明顯著色，而囊腫中主要集中于上皮細(xì)胞，固有層內(nèi)炎性細(xì)胞表達(dá)則相對(duì)較少。

本實(shí)驗(yàn)中CypA和RANKL均與患牙根尖稀疏區(qū)大小呈正相關(guān)，CypA與RANKL兩者比較也呈正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明CypA可能也參與根尖骨質(zhì)破壞的進(jìn)程。根尖稀疏區(qū)大小主要反映根尖骨質(zhì)破壞的情況，RANKL是已知的參與骨破壞的重要因子[17]。RANK- RANKL- OPG三者平衡體系一旦失衡(RANK/RANKL/OPG system)，即會(huì)發(fā)生相應(yīng)的骨質(zhì)破壞[23-24]。Yang等[10]對(duì)RA(Rheumatoid arthritis，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，在RA中，CypA- CD147相互作用可上調(diào)MMP- 9的表達(dá)量，并通過(guò)促進(jìn)單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞粘附到細(xì)胞外基質(zhì)上而導(dǎo)致軟骨和骨的破壞。MMPs(Matrix metalloproteinase)為基質(zhì)金屬蛋白酶，在牙周組織胞外基質(zhì)降解過(guò)程中有重要的作用[25]。與此同時(shí)，Wang等[22]也有類(lèi)似的發(fā)現(xiàn)，并提出CypA可明顯提高M(jìn)MP- 2和MMP- 9的分泌、促進(jìn)細(xì)胞入侵及單核細(xì)胞釋放炎性細(xì)胞因子的量；此外，實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，注射CypA組的軟骨吸收率明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明其與破骨有關(guān)。目前已有研究指出，基質(zhì)金屬蛋白酶也參與牙槽骨的骨破壞[26]。除此之外，Li等[14]還發(fā)現(xiàn)，在炎性牙齦中CypA的表達(dá)量與MMP- 1/MMP- 2/MMP- 9表達(dá)量呈正相關(guān)；提示CypA可能參與牙周組織中的軟、硬組織的破壞。因此，CypA可能作為一個(gè)新的切入點(diǎn)來(lái)重新考量軟骨及骨降解的炎性過(guò)程。

當(dāng)有炎癥刺激時(shí)，CypA可以被細(xì)胞釋放到胞外并與細(xì)胞膜上的EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer,胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑)結(jié)合，CypA可通過(guò)與EMMPRIN相互作用調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)，促進(jìn)炎性細(xì)胞釋放基質(zhì)金屬蛋白酶[10]。Liu等發(fā)現(xiàn)CypA和EMMPRIN同時(shí)位于浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞上，而在一些多核細(xì)胞上也有附著，說(shuō)明CypA- EMMPRIN存在于牙周病炎癥反應(yīng)中；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，CypA在炎性牙齦組織中過(guò)度表達(dá)且分布廣泛，并發(fā)現(xiàn)300 ng/mL的CypA與100 ng/mL及500 ng/mL相比對(duì)中性粒細(xì)胞的趨化作用最強(qiáng)，可使其在牙周組織中的浸潤(rùn)程度明顯增加，并使TNF- α/IL- 8的分泌量增加[13-14]。Kim等[20]也發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后可分泌CypA，并能在體外實(shí)驗(yàn)中反作用調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的活性，且不同濃度的CypA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞TLR- 4的表達(dá)有明顯的影響，說(shuō)明CypA與炎癥相關(guān)。

總之，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)了CypA在根尖周炎性組織中的表達(dá)情況，所得結(jié)果提示，CypA可能參與根尖周炎炎癥的發(fā)生發(fā)展，并可能與破骨有關(guān)。該結(jié)果有助于進(jìn)一步理解根尖周病的發(fā)病機(jī)制和病變的發(fā)展。但還需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來(lái)詳細(xì)闡明CypA在根尖周病中的作用。

[1]Tagger M, Massler M.Periapical tissue reactions after pulp exposure in rat molar[J].OralSurgOralMedOralPathol, 1975 Feb,39(2):304-317.

[2]Zhang X,Peng B.Immunolocalization of receptor activator of NF kappa B ligand in rat periapical lesions[J].JEndod, 2005,31(8):574-577.

[3]Kawashima N,Stashenko P.Expression of bone resorptive and regulatory cytokines in murine periapical inflammation[J].ArchOralBiol,1999,44(1):55-66.

[4]Stashenko P,Yu SM,Wang CY.Kinetics of immune cell and bone resorptive responses to endodontic infections[J].JEndod,1992,18(9):422-426.

[5]Xiong H,Wei L,Peng B. Immunohistochemical localization of IL- 17 in induced rat periapical lesions[J].JEndod, 2009,35(2):216-220.

[6]Jin ZG,Melaragno MG,Liao DF,etal. Cyclophilin A is a secreted growth factor induced by oxidative stress[J].CircRes, 2000,87(9):789-796.

[7]Satoh K,Matoba T,Suzuki J,etal. Cyclophilin A mediates vascular remodeling by promoting inflammation and vascular smooth muscle cell proliferation[J].Circulation, 2008,117(24):3088-3098.

[8]Sherry B,Yarlett N,Strupp A,etal. Identification of cyclophilin as a proinflammatory secretory product of lipopolysaccharide- activated macrophages[J].ProcNatlAcadSciUSA,1992,89(8):3511-3515.

[9]Yurchenko V, Constant S, Bukrinsky M. Dealing with the family:CD147 interactions with cyclophilins[J].Immunology, 2006,117(3):301-309.

[10]Yang Y,Lu N,Zhou J,etal.Cyclophilin A up- regulates MMP- 9 expression and adhesion of monocytes/macrophages via CD147 signalling pathway in rheumatoid arthritis[J].Rheumatology,2008,47(9):1299-1310.

[11]Howard BA,Furumai R,Campa MJ,etal. Stable RNA interference- mediated suppression of cyclophilin A diminishes non-small- cell lung tumor growth in vivo[J].CancerRes,2005,65(19):8853-8860.

[12]Zhang T,Zhang J,Ge H.Functions of cyclophilin a in atherosclerosis[J].ExpClinCardiol,2013,18(2):e118-e124.

[13]Liu L,Li C,Cai C,etal.(CypA) is associated with the inflammatory infiltration and alveolar bone destruction in an experimental periodontitis[J].BiochemBiophysResCommun,2010,391(1):1000-1006.

[14]Liu L,Li C,Xiang J,etal.Over- expression and potential role of cyclophilin A in human periodontitis[J].JPeriodontalRes,2013,48(5):615-622.

[15]馬緒臣,王虎.口腔頜面醫(yī)學(xué)影像診斷學(xué)[M]. 3版. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 2008: 24-27.

[16]于世鳳.口腔組織病理學(xué)[M]. 6版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2007: 177-180.

[17]Anderson DM, Maraskovsky E,Billingsley WL,etal.A homologue of the TNF receptor and its ligand enhance T-cell growth and dendritic- cell function[J].Nature,1997,390(6656):175-179.[18]Zhang Meihua.The expression and significance of receptor activator of nuclear factor κB ligand and osteoprotegerin in periapical cyst and periapical granuloma[J].HuaXiKouQiangYiXueZaZhi, 2012,30(4):360-363.

[19]Lerner UH.Inflammation- induced bone remodeling in periodontal disease and the influence of post- menopausal osteoporosis[J].JDentRes, 2006,85(7):596-607.

[20]Kim SH, Lessner SM, Sakurai Y,etal. Cyclophilin A as a novel biphasic mediator of endothelial activation and dysfunction[J].AmJPathol,2004,164(5):1567-1574.

[21]Arora K,Gwinn WM,Bower MA ,etal. Extracellular cyclophilins contribute to the regulation of inflammatory responses[J].JClinImmunol, 2005,175(1): 517-522.

[22]Wang L, Wang CH, Jia JF,etal. Contribution of cyclophilin a to the regulation of inflammatory processes in rheumatoid arthritis[J].JClinImmunol,2010,30(1):24-33.

[23]Schett G.Osteoimmunology in rheumatic diseases[J].ArthritisResTher,2009,11(1):210.

[24]Takayanagi H.Osteoimmunology and the effects of the immune system on bone[J].NatRevRheumatol,2009,5(12):667-676.

[25]Ryan ME,Golub LM.Modulation of matrix metalloproteinase activities in periodontitis as a treatment strategy[J].Periodontol, 2000,24:226-238.

[26]Hernandez RM,Sorsa T,Obregon F,etal.Proteolytic attack of matrixmetalloproteinase (MMP)- 13 during progression of chronic periodontitis:initial evidence of MMP- 13/MMP- 9 activation cascade[J].JClinPeriodontol, 2009,36(12):1011-1017.

Immunolocalization of cyclophilin- A in human apical periodontitis lesions

WANG Yan- qing*, HU Ju- hua, LI Song, HU Shu- li, ZHANG Hong- yan

(*StomatologicHospital﹠College,AnhuiMedicalUniversity,KeyLab.ofOralDiseasesResearchofAnhuiProvince,Hefei230032,China)

AIM: To examine the expression of cyclophilin A (CypA) in human periapical lesions and to investigate its relationship with the clinical symptoms of periapical periodontitis. METHODS: Samples of human apical periodontitis lesions of 83 cases were subjected to immunohistochemical examination for CypA and RANKL expression. Six 6 healthy dental pulp samples obtained from orthodontic patients served as the controls. The integrated average optical density value (A) of CypA and RANKL was measured by immunohistochemical analysis for all the samples. Differences in CypA and RANKL expression between different clinical presentations were subsequently analyzed by t-test. RESULTS: CypA postitive cells and RANKL positive cells were both detected in all periapical lesion tissues, and the expression of CypA was significantly higher in periapical lesions than in normal tissues (P<0.05). Epithelial cells, lymphoid cells and endothelial- like cells showed CypA positive in the lesions. The expression of RANKL in cyst group were higher than in granuloma group (Z=4.48,P<0.05), while the expression of CypA in granuloma group were higher than in cyst group (Z=4.48,P<0.05). The average (A) value of CypA positive sites in periapical lesions with clinical symptoms was higher than that without clinical symptoms(77.24 versus 39.18,P<0.05). Positive correlation was observed between CypA expression and lesion size(r=0.462,P<0.05). Moreover, positive correlation between RANKL expression and lesion size was observed (r=0.417,P<0.05). CONCLUSION: CypA might be involved in the inflammatory response and bone resorption, and associated with periapical lesion pathogenesis.

cyclophilin- A; RANKL; periapical lesions; clinical presentations

2014-09-14

安徽省自然科學(xué)基金(070413141)

王艷青(1990-)，女，漢族，安徽蕪湖人。碩士生(導(dǎo)師：張紅艷)

張紅艷, E-mail: toothyan@126.com

R780.2

A

1005-2593(2015)02-0073-07

安徽高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目(KJ2011Z168)

安徽省高校教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程項(xiàng)目(20100352)