葎草提取物治療仔豬腹瀉

周平平，宮新城，趙興華，鐘秀會(huì)

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，河北保定071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071001;3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)研究所，河北保定071001）

為了驗(yàn)證葎草提取物對(duì)仔豬腹瀉的治療效果，對(duì)葎草中揮發(fā)油、多糖、黃酮進(jìn)行了提取，并對(duì)小鼠腹瀉模型進(jìn)行了治療，同時(shí)用葎草總提取物對(duì)仔豬腹瀉進(jìn)行了治療。結(jié)果葎草揮發(fā)油葎草多糖和葎草黃酮都對(duì)大腸桿菌引起的腹瀉有抑制作用；葎草總提取物經(jīng)母豬給藥可以預(yù)防仔豬腹瀉，試驗(yàn)組的腹瀉率為11.28%，明顯低于對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05），死亡率也比對(duì)照組降低了8.1 個(gè)百分點(diǎn)；直接給仔豬用藥，治愈率為90%。說(shuō)明葎草提取物對(duì)仔豬腹瀉有治療作用。

葎草味甘、苦，性寒，具有清熱解毒，主水痢的功效，民間常用來(lái)治療家畜腹瀉，尤其是家兔腹瀉。但因?yàn)槿劜萸o蔓多具小刺，導(dǎo)致采集困難，同時(shí)葎草粗纖維多，不利于直接添加到動(dòng)物飼料中，導(dǎo)致當(dāng)前葎草在獸醫(yī)臨床應(yīng)用較少，因此對(duì)葎草有效成分進(jìn)行了提取并對(duì)仔豬腹瀉進(jìn)行了治療。

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 材料

葎草，采于河北定州河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)學(xué)院標(biāo)本園；大腸桿菌，購(gòu)于中國(guó)獸藥監(jiān)察所；小鼠，購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（SP- 756 型），上海光譜儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 葎草有效成分提取

準(zhǔn)確稱取葎草粉末250 克，首先用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油；藥渣用水提醇沉法提取多糖；濾液部分濃縮得到黃酮A 部；再將藥渣部分醇提得到黃酮B 部。

1.2.2 大腸桿菌致瀉模型

大黃200 克，煎煮濃縮至200 毫升。將20～22 克昆明系小鼠50 只，隨機(jī)分為5 組，分別灌服生理鹽水、葎草揮發(fā)油、葎草多糖、黃酮A 部、黃酮B 部0.5 毫升/只，每日給藥一次，連續(xù)給藥3 天。末次給藥時(shí)，每只小鼠注射氫化可的松0.1毫升，并腹腔接種大腸桿菌2×108/只，觀察小鼠排出稀糞數(shù)和排出的時(shí)間。

1.2.3 葎草總提取物經(jīng)母豬給藥防治仔豬腹瀉

將提取的葎草揮發(fā)油、葎草多糖和葎草黃酮混合后，加入醫(yī)用淀粉，混合均勻，陰干后用粉碎機(jī)粉碎，制成每克含生藥1 克的葎草總提取物，按1%添加于豬的基礎(chǔ)日糧中。

選擇年齡胎次相近的預(yù)產(chǎn)期相近的經(jīng)產(chǎn)母豬20 頭，隨機(jī)分為2 組，即對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組10 頭。在懷孕第107 天時(shí)，在對(duì)照組的基礎(chǔ)日糧中添加1%的醫(yī)用淀粉，在試驗(yàn)組的基礎(chǔ)日糧中添加1%的葎草總提取物，直到產(chǎn)后7 天。28天斷奶，觀察至產(chǎn)后35 天。

測(cè)定指標(biāo)：

平均初生重：以窩為單位測(cè)定初生仔豬的平均初生重。

生長(zhǎng)性能：自斷奶之日起記錄每組仔豬平均日增重。

腹瀉率、死亡率：試驗(yàn)開(kāi)始后，每天觀察仔豬排糞情況，記錄每天每組發(fā)生腹瀉個(gè)體數(shù)、死亡只數(shù)，并記錄死亡仔豬的飼養(yǎng)天數(shù)，計(jì)算每組仔豬的腹瀉率、死亡率。

1.2.4 葎草總提取物仔豬給藥防治腹瀉

選擇健康無(wú)病、體重相似的21日齡仔豬30頭，隨機(jī)分為3 組，每組10 頭，分別為空白對(duì)照組、葎草總提取物組、環(huán)丙沙星治療組。分組后注射氫化可的松1 毫升/只，兩小時(shí)后，每頭仔豬接種大腸桿菌6×108個(gè)/只，發(fā)病后各組分別灌服生理鹽水2 毫升/千克體重、葎草總提取物2 克/千克體重、環(huán)丙沙星溶液2 毫升/千克體重。觀察各組仔豬的死亡率，治愈率。

取十二指腸，加入一定量的PBS 及1 微克/升蛋白酶抑制劑。用勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，3000 轉(zhuǎn)數(shù)/分條件下離心20 分鐘左右。取上清液測(cè)按試劑盒說(shuō)明測(cè)定cAMP 和cGMP 含量。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 葎草提取結(jié)果

試驗(yàn)中得到具有特殊濃香氣味的棕褐色揮發(fā)油(0.95±0.08)克，所采葎草中揮發(fā)油的含量約為0.38%。得水提粗多糖(2.98±0.15)克，葎草中多糖的含量為1.19%。藥渣部分得到黃酮（B）部(0.75±0.04)克；提取多糖的濾液部分得到黃酮（A）部(4.20±0.21)克，葎草中總黃酮的含量為1.98%。

2.2 葎草各成分對(duì)大腸桿菌致瀉小鼠的作用

在注射大腸桿菌后3 小時(shí)，小鼠開(kāi)始精神倦怠，被毛猬立，渾身發(fā)抖，并且開(kāi)始腹瀉，72 小時(shí)后沒(méi)死的小鼠不再出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。排出稀糞情況差異也比較大，葎草揮發(fā)油組，排稀糞次數(shù)為（45.67±3.37）次，葎草多糖組排稀糞次數(shù)為（35.35±2.36）次，對(duì)大腸桿菌引起的腹瀉有一定的抑制作用，與生理鹽水組相比差異顯著（P＜0.05），而葎草黃酮（A）能夠明顯的抑制大腸桿菌引起的腹瀉，為（30.37±3.13）次，與生理鹽水組相比差異極顯著（P＜0.01），詳見(jiàn)表1。

2.3 葎草總提取物經(jīng)母豬給藥治療結(jié)果

2.3.1 葎草總提取物經(jīng)母豬給藥對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的影響

在母豬懷孕107 天時(shí)，在母豬的基礎(chǔ)日糧中添加葎草總提取物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組和對(duì)照組產(chǎn)仔數(shù)沒(méi)差異，而試驗(yàn)組初生均重為（1.45±0.48）千克，顯著高于對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；斷奶日均重試驗(yàn)組也顯著高于對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；斷奶后試驗(yàn)組的平均日增重為（339.57±8.48）克，明顯高于對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）。詳見(jiàn)表2。

表1 葎草不同提取部位對(duì)大腸桿菌致瀉小鼠的作用

表2 葎草總提取物經(jīng)母豬給藥對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的影響

2.3.2 葎草總提取物經(jīng)母豬給藥對(duì)仔豬腹瀉率與死亡率的影響

由試驗(yàn)可以看出葎草總提取物經(jīng)母豬給藥可以預(yù)防仔豬腹瀉，試驗(yàn)組的腹瀉率為11.28%，明顯低于對(duì)照組，差異顯著（P＜0.05）；死亡率也比對(duì)照組降低了8.1 個(gè)百分點(diǎn)。結(jié)果詳見(jiàn)表3。

表3 葎草總提取物經(jīng)母豬給藥對(duì)仔豬腹瀉率與死亡率的影響

2.4 仔豬直接用藥對(duì)仔豬腹瀉治療效果

2.4.1 葎草總提取物對(duì)仔豬腹瀉的治療效果

試驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，各組仔豬在接種大腸桿菌3小時(shí)后都開(kāi)始出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，糞便稀軟不能成形。到4 小時(shí)腹瀉率達(dá)80%，5.5 個(gè)小時(shí)時(shí)全部表現(xiàn)出腹瀉現(xiàn)象，個(gè)別出現(xiàn)劇烈水瀉。這時(shí)進(jìn)行治療處理，對(duì)照組灌服生理鹽水2 毫升/千克體重，試驗(yàn)組灌服葎草總提取物2 克/千克體重，而化藥對(duì)照組灌服環(huán)丙沙星溶液2 毫升/千克體重。結(jié)果對(duì)照組只有一只沒(méi)有死亡，其余9 只死亡；而試驗(yàn)組和化藥組治愈率都為90%，詳見(jiàn)表4。

表4 葎草總提取物對(duì)仔豬腹瀉的治療效果

2.4.2 葎草總提取物對(duì)腹瀉仔豬腸道上皮cAMP 和cGMP 含量影響的比較

由于對(duì)照組只有一只沒(méi)有死亡，因此試驗(yàn)只測(cè)定了葎草總提取物組和環(huán)丙沙星組中cAMP和cGMP 含量，結(jié)果葎草總提取物組cAMP 和cGMP 含量分別為298.58±25.67pmol/g（皮摩爾/克）和21.17±3.18pmol/g，均低于環(huán)丙沙星組，差異顯著（p＜0.05）。詳見(jiàn)表5。

表5 葎草總提取物和環(huán)丙沙星對(duì)腹瀉仔豬腸道黏膜cAMP 和cGMP 含量影響

3 討論

《唐本草》認(rèn)為葎草有“止水痢”的功效，這也是民間用葎草治療家兔等動(dòng)物腹瀉的依據(jù)所在。但是因?yàn)槿劜萸o蔓多生小刺，采集不便或者葎草粗纖維多等原因，導(dǎo)致其還未在臨床廣泛應(yīng)用。把葎草的揮發(fā)油、多糖和黃酮提取出來(lái)，去掉粗纖維等不易被動(dòng)物利用的成分為葎草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供方便。當(dāng)前仔豬腹瀉主要是由大腸桿菌引起的，因此試驗(yàn)中用大腸桿菌建立了小鼠腹瀉模型，發(fā)現(xiàn)葎草揮發(fā)油和葎草多糖對(duì)大腸桿菌引起的腹瀉有一定的抑制作用，與生理鹽水組相比差異顯著；而葎草黃酮（A）能夠明顯的抑制大腸桿菌引起的腹瀉，與生理鹽水組相比差異極顯著。因此認(rèn)為葎草治療動(dòng)物腹瀉可能與葎草揮發(fā)油、葎草多糖和葎草黃酮都有關(guān)。

仔豬腹瀉可影響仔豬生長(zhǎng)發(fā)育和降低飼料報(bào)酬而造成較大經(jīng)濟(jì)損失。因此在試驗(yàn)中我們使用大腸桿菌復(fù)制了仔豬腹瀉模型。各組仔豬在灌服大腸桿菌3 小時(shí)后都開(kāi)始出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，糞便稀軟不能成形。到4 小時(shí)腹瀉率達(dá)80%，5.5 個(gè)小時(shí)時(shí)全部表現(xiàn)出腹瀉現(xiàn)象，個(gè)別出現(xiàn)劇烈水瀉。這時(shí)進(jìn)行治療處理，對(duì)照組灌服生理鹽水2毫升/千克體重，試驗(yàn)組灌服葎草總提取物2克/千克體重，而化藥對(duì)照組灌服環(huán)丙沙星溶液2 毫升/千克體重。結(jié)果對(duì)照組只有一只沒(méi)有死亡，其余9 只死亡；而試驗(yàn)組和化藥組治愈率都為90%，說(shuō)明葎草總提取物，對(duì)仔豬腹瀉的治療效果和環(huán)丙沙星相當(dāng)。在試驗(yàn)過(guò)程中由于對(duì)照組接種大腸桿菌后，有9 頭死亡，只有一頭存活，因此只測(cè)定了葎草總提取物和環(huán)丙沙星組cAMP 和cGMG 的含量。大腸桿菌可產(chǎn)生兩種腸毒素即不耐熱腸毒素和耐熱腸毒素。不耐熱腸毒素可激活上皮細(xì)胞中的腺苷酸環(huán)化酶，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ATP 轉(zhuǎn)化為cAMP，cAMP 可促使小腸液和電解質(zhì)分泌增加。耐熱腸毒素能激活上皮細(xì)胞內(nèi)的鳥苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)的GTP 轉(zhuǎn)化為cGMP，cGMP 也能促使腸液分泌增加。因此降低腸道上皮cAMP、cGMP 能夠減少腸道上皮細(xì)胞的液體分泌，從而達(dá)到緩解腹瀉的作用。在本試驗(yàn)中葎草總提取物組腸道上皮cAMP、cGMP含量均比環(huán)丙沙星低，造成此種差異的原因可能是由于葎草總提取物中某些中藥組分有干擾腸毒素和腸上皮受體結(jié)合。

當(dāng)然對(duì)于仔豬腹瀉還是以預(yù)防為主，由于仔豬腹瀉發(fā)病比較早，只能采取經(jīng)母豬給藥的方式，由實(shí)驗(yàn)可以看出，在孕107 天給藥后不僅可以預(yù)防仔豬腹瀉，提高成活率，還可以提高仔豬的初生重，并對(duì)后期仔豬的增長(zhǎng)有一定促進(jìn)作用。