鯉JAK2基因分子克隆及組織表達分析

付　友，高　謙，文春根，吳　平，，劉德立

（1.南昌大學生命科學與食品工程學院，江西　南昌　330031；2.中國科學院水生生物研究所，淡水生態(tài)與生物技術國家重點實驗室，湖北　武漢 430072；3.華中師范大學生命科學學院，湖北　武漢 4300790）

鯉JAK2基因分子克隆及組織表達分析

付友1，2，高謙2，文春根1，吳平2，3，劉德立3

（1.南昌大學生命科學與食品工程學院，江西南昌330031；2.中國科學院水生生物研究所，淡水生態(tài)與生物技術國家重點實驗室，湖北武漢 430072；3.華中師范大學生命科學學院，湖北武漢 4300790）

采用同源克隆策略和RACE-PCR技術，克隆得到可能的鯉（Cyprinus carpio）兩面神激酶2（JAK2）基因的cDNA全長序列，包括3 378 bp的開放閱讀框，732 bp的5'-非編碼區(qū)，529 bp的3'-非編碼區(qū)，總長度達4 639 bp。開放閱讀框可編碼1 125個氨基酸，推測分子質量和理論等電點分別為129.33 ku和6.99。同源性分析顯示，克隆的鯉魚基因與斑馬魚（Danio rerio）JAK2同源性最高，其氨基酸序列同一性和相似度分別達89%和95%。結構域預測表明，所編碼氨基酸序列包含F(xiàn)ERM、SH2及兩個酪氨酸激酶結構域，這4個結構域也保守地存在于其他脊椎動物的JAK分子中。高級結構預測顯示，鯉JAK2主要包括α-螺旋（α-helix）、β-折疊（β-sheet）和連接環(huán)（loop）等3類結構元件。脊椎動物JAK分子系統(tǒng)進化樹顯示，JAK1、JAK2、JAK3和TYK2等4類JAK分子分別聚類，鯉JAK2處于JAK2支系中，與所有其他的魚類JAK2聚為一大支，并與兩棲類和哺乳類組成的另一大支構成姊妹群，表明它們具有共同的祖先基因，為直系同源關系。實時熒光定量PCR檢測結果表明，鯉JAK2在皮膚中表達量最高，其次是腸、血液和腦，而在肌肉、鰓、頭腎、心、肝、脾中表達量較低；鯉JAK3在脾中表達量最高，在其他組織中表達量均很低，甚至未檢出。

鯉；JAK2；JAK3；基因克?。唤M織表達分析

兩面神激酶（Janus kinase，JAK）是一種非受體型蛋白酪氨酸激酶。JAK家族有JAK1、JAK2、JAK3和TYK2等4個成員，JAK1和TYK2進化關系較近，JAK2則與JAK3關系較近［1］。除JAK3主要是在造血細胞中起作用，其他3種JAK均廣泛存在于各種類型的細胞中，參與多種細胞因子受體的信號轉導［2］。經典的JAK-STAT信號通路是細胞表面的受體與相應配體結合后，受體分子發(fā)生交叉磷酸化并激活與受體胞內區(qū)偶聯(lián)的JAK激酶，活化的JAK催化受體上特定部位的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化修飾，形成“停泊位點”（docking site）來募集含SH2結構域的信號轉導及轉錄激活因子（signal transducers and activators of transcription，STAT），所招募的STAT也被JAK磷酸化并形成二聚體，進而轉位進入細胞核，啟動下游基因轉錄［3］。JAK2是JAK家族的重要成員，在哺乳動物中，JAK2可分別與STAT3、STAT5等構成多條信號傳導途徑，參與造血細胞的發(fā)育、分化和凋亡，以及與免疫和炎癥等相關的多種反應［4-8］。對哺乳類JAK2及其他JAK分子的研究已比較深入，但對魚類JAK2分子的研究相對較少［9］，功能研究尤為滯后。鯉魚（Cyprinus carpio）是我國重要的淡水經濟魚類，其JAK1［10］和JAK3［11］已有報道，本課題組亦克隆、鑒定了鯉 TYK2基因，并利用實時熒光定量 PCR（Real-time quantitive PCR，RT-qPCR）技術分析鯉TYK2和JAK1在魚體各組織器官中的分布［12］，本研究在此基礎上克隆鯉JAK2的cDNA全長序列，分析鯉 JAK2及與其系統(tǒng)發(fā)育關系較近的 JAK3（GenBank登錄號：AF148993.1）的組織表達模式，以期為系統(tǒng)研究鯉魚JAKs在JAK-STAT信號通路中的調控機制奠定基礎。

1　材料和方法

1.1總RNA提取和cDNA合成

實驗所用鯉魚的獲取、暫養(yǎng)，魚體組織樣品，包括血液、肝、脾、腸、頭腎、心臟、肌肉、皮膚、鰓和腦組織的采集，以及Trizol試劑盒提取各組織樣品總RNA，均同文獻［12］。通過質量分數(shù)1%的瓊脂糖凝膠電泳和 NanoDrop 2000（Thermo Scientific）檢測所提取 RNA的質量和濃度。提取RNA的操作步驟除特別注明外，均在冰浴中完成，試劑提前置冰上預冷。實驗所用離心管、槍頭及溶劑均為無RNase產品。

以鯉魚組織總RNA為模板，Oligo（dT）18為反轉錄引物，使用 RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo Scientific）反轉合成cDNA第一鏈，操作參照試劑盒使用說明。使用 BD SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit（Clontech），利用鯉魚腦組織總 RNA制備 5' -和3'-RACE SMART cDNA模板，具體步驟參見文獻［12］。所有cDNA樣品置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2鯉JAK2 cDNA全長的分段擴增、克隆與序列測定

參照斑馬魚（Danio rerio）、草魚（Ctenopharyngodon idellus）、鱖（Siniperca chuatsi）的 JAK基因序列（GenBank登錄號分別為 NP_571162、JF825474.1和FJ629182.1）設計JAK2-F1/JAK2-R1和JAK2-F2/JAK2-R2兩對引物（表1），分兩部擴增鯉JAK2 cDNA的中間片段。PCR反應體系如下：Premix Taq（TaKaRa Taq ver 2.0 plus dye）12.5μL，正反向引物（10 μmol/L）各1μL，脾組織cDNA模板1 μg，用ddH2O補足至25μL。PCR反應程序為：94℃ 5min；94℃ 30s、54℃30s、72℃ 90s，30個循環(huán)；72℃ 10min。擴增產物經質量分數(shù)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測后，利用E.Z.N.A.TM Gel Extraction Kit（Omega）純化目的片段，連接pMD18-T（TaKaRa），連接產物轉化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞，涂含氨芐青霉素（100 μg/mL）的LB平板，于37℃條件下約培養(yǎng)10 h，挑取陽性克隆送上海生工生物工程有限公司測序。

根據(jù)所獲得的中間片段序列，參照 BD SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit（Clontech）的原理和方法，設計用于5' -和3'-RACE的基因特異性引物GSP和NGSP（表1）。分別利用鯉腦組織5' -和3' -RACE SMART cDNA模板，依次進行Touchdown PCR和Nest PCR，擴增鯉JAK2 cDNA的5'-和3'-末端。50μL 的Touchdown PCR體系： cDNA（5' - cDNA模板980 ng/μL，3' -cDNA模板1 037 ng/μL）2.5μL、10 mmol/L UPM 5μL、10 mmol/L GSP 1μL、10×Ex Taq buffer 5μL、10 mmol/L dNTP 1μL、5 U/μL Ex Taq 1μL和ddH2O 34.5μL；50μL 的Nest-PCR體系： Touchdown PCR產物0.5μL、10 mmol/L NUP 1μL、10 mmol/L NGSP 1μL、10×Ex Taq buffer 5μL、10 mmol/L dNTP 1μL、5 U/μL Ex Taq 1μL和 ddH2O 40.5μL。Touchdown PCR程序：94℃ 3min；94℃ 30s、62℃ 30s、72℃ 2min，5個循環(huán)；接著94℃ 30s、60℃ 30s、72℃ 2min，5個循環(huán)；最后94℃30s、58℃ 30s、72℃ 2min，25個循環(huán)。Nest PCR程序：94℃ 3min；94℃ 30s、58℃ 30s、72℃2min，35個循環(huán)；72℃ 10min。PCR產物純化、克隆的方法與前面所述的中間片段克隆相同。

表1　鯉JAK2基因克隆與表達分析所用引物Table 1　Primers used for cloning and expression analysis of JAK2 gene in Cyprinus carpio

1.3序列分析、空間結構預測和分子系統(tǒng)發(fā)育樹構建

使用NCBI網(wǎng)站（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）的BLASTN和BLASTX進行核酸和蛋白序列相似性搜索。通過ExPASy網(wǎng)站（http://expasy.pku.edu.cn）的相關在線軟件進行開放閱讀框搜索和氨基酸序列推斷。使用Protparam軟件（http://expasy.org/tools/protparam.html）進行蛋白質理化性質預測。用SignalP 4.0（http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）分析蛋白信號肽序列。PSORT II Prediction（http://psort.hgc.jp/form2.html）用于蛋白亞細胞定位預測。用 SMART（http://smart.emblheidelberg.de/）和 Scan Prosite（http://prosite.expasy.org/scanprosite/）工具軟件用來預測蛋白結構域。

利用 PredictProtein軟件（http://www.predictprotein.org）預測鯉JAK2的蛋白二級結構。首先在Protein date bank（PDB）數(shù)據(jù)庫中通過BLAST查找與鯉JAK2序列相似度最高的目標，進而以其為模板，利用Swiss-Model（http://swissmodel.expasy.org/）進行同源建模，運用PyMol軟件對空間結構模型進行分析與顯示。在GenBank數(shù)據(jù)庫中搜索JAK基因家族各成員的相關序列，使用 Clustal X和Genedoc軟件進行氨基酸序列多重比對和人工校對，采用 MEGA 4.0中的鄰接法（Neighbour-Joining，NJ）構建分子系統(tǒng)發(fā)育樹，通過1 000次自展重復對分支可靠性進行檢驗。

1.4實時熒光定量PCR分析

隨機選取體質量約200g的健康鯉魚5尾，每尾魚 10個組織器官樣品的總 RNA提取及用于RT-qPCR反應模板的cDNA第一鏈制備同1.1。以鯉β-actin（GenBank登錄號：M24113.1）為內參基因［12-13］，采用RT-qPCR技術分析鯉JAK2和JAK3基因（GenBank登錄號：AF148993.1）在 mRNA水平的組織表達模式，標準曲線構建參照文獻［13］。實時熒光定量反應在 CFX-96（BIO-RAD）定量PCR儀上進行，20μL的反應體系包括：SYBR Green I（Qiagen）10μL，正反向引物（10 μmol/L）各1μL，鯉魚組織cDNA模板1μL，ddH2O 7μL。反應程序為：95℃ 3min；95℃ 10s，55℃ 20s，72℃ 30s，75℃讀板5s，85℃讀板5s，40個循環(huán)；95℃變性15s，在65～95℃升溫區(qū)間每隔0.5℃讀板5s，進行熔解曲線分析。通過儀器所載CFX Manager軟件觀察 RT-qPCR檢測結果并導出數(shù)據(jù)，使用Excel工具軟件計算目的基因與內參基因的拷貝數(shù)比值，來確定鯉JAK2和JAK3基因在mRNA水平的相對表達量，具體分析步驟參見文獻［13］。各基因熒光定量PCR所用引物列于表1。

2　結果與分析

2.1鯉JAK2基因cDNA全長和序列特征

拼接所獲各段序列，得到鯉JAK2基因cDNA全長達4 639 bp，其中5' 端非編碼區(qū)（5' -Untranslated region，5' -UTR）732 bp，3' 端非編碼區(qū)（3' -UTR）529 bp，開放閱讀框（open reading frame，ORF）長度為3 378 bp，推測其編碼1 125個氨基酸。3' -UTR包含33 bp的Poly（A）尾，在Poly（A）上游發(fā)現(xiàn)有兩個ATTTA 型mRNA不穩(wěn)定信號和一個加尾信號（AATAAA）（圖1）。

圖1　鯉JAK2基因cDNA全長序列及其推導的氨基酸序列Fig.1　Full-length cDNA and predicted amino acid sequences of carp JAK2 gene

續(xù)圖1?。–ontinued）

續(xù)圖1?。–ontinued）

軟件預測該蛋白分子質量為129.33 ku，理論等電點為6.99，包含141個堿性氨基酸（K、R）、146個酸性氨基酸（D、E）、358個疏水性氨基酸（A、I、L、F、W、V）、313個極性氨基酸（N、C、Q、S、T、Y）；不穩(wěn)定系數(shù)46.27，為不穩(wěn)定蛋白。SignalP軟件分析顯示，該蛋白無信號肽區(qū)段。亞細胞定位分析預測，鯉JAK2主要分布在細胞核（47.8%）和細胞質（34.8%），此外也少量存在于分泌性囊泡（4.3%）、質膜（4.3%）、線粒體（4.3%）和內質網(wǎng)（4.3%）。蛋白結構域預測發(fā)現(xiàn)，鯉JAK2具有4.1蛋白/埃茲蛋白/根蛋白/膜突蛋白（4.1 protein/Ezrin/Radixin/Moesin，F(xiàn)ERM）結構域（T28-H363）、Src 同源區(qū)2（Src homology 2，SH2）結構域（Y382-E467）、假激酶結構域（pseudokinase domain）（K523-F793）和激酶結構域（kinase domain）（L833-L1110）（圖1）。

Predictprotein軟件預測，鯉JAK2蛋白二級結構主要包括 α-螺旋（α-helix）（32.18%）、β-折疊（β-sheet）（15.56%）和連接環(huán)（loop）（52.27%）。通過Protein date bank（PDB）數(shù)據(jù)庫搜索，發(fā)現(xiàn)JAK家族成員的三級結構信息較少，PDB中與鯉JAK2相似性較高的序列均為人的 JAKs，其中人TYK2的 FERM 和 SH2結構域區(qū)域（PDB:4PO6_A）與鯉JAK2的對應區(qū)域具有最高的序列相似度（37%）；人JAK2的假激酶結構域（PDB:4FVQ_A）和激酶結構域（PDB:3KRR_A）與鯉JAK2的對應區(qū)域具有最高的序列相似度，分別為55%和 58%。分別以上述三個多肽的晶體構象為模板，利用Swiss-Model軟件進行同源模建，得到圖2所示的鯉JAK2三個特定結構域區(qū)段的三級結構模型。

圖2　鯉JAK2各結構域的三級空間結構Fig.2　The tertiary structure of domains of carp JAK2

2.2鯉JAK2氨基酸序列同源性和分子系統(tǒng)發(fā)育關系分析

利用 Genedoc軟件進行氨基酸序列同源性分析，結果顯示，鯉JAK2與斑馬魚的同源性最高，序列同一性和相似度分別達到89%和95%，與鱖的序列同一性和相似度為74%和86%，與非洲爪蟾（Xenopus laevis）、小鼠（Mus musculus）和人類（Homo sapiens）的序列同一性和相似性也在65%和80%以上。鯉JAK2與鯉JAK3的序列相似性亦達64%，與鯉的JAK1和TYK2的序列［12］相似性均在53%左右，JAK1和TYK2序列相似性為58%。

在以鄰接法法構建的脊椎動物JAK蛋白分子系統(tǒng)進化樹中，JAK家族四類成員分別聚類，所有物種的 JAK2分子聚為一大支，JAK3、TYK2和JAK1也分別形成各自支系。JAK2和JAK3互為姊妹群，TYK2則與JAK1為姊妹群（圖3）。在各大支內部，所有魚類的相應分子聚為一支，進而與哺乳類和兩棲類組成的分支構成姐妹群；鯉JAK2處在魚類JAK2分支中，與斑馬魚JAK2關系最近（圖3）。該分子系統(tǒng)樹各個分支支持率均較高，除一支為89%，其他均為100%。

2.3鯉魚JAK2、JAK3在mRNA水平的組織分布RT-qPCR檢測結果顯示，鯉JAK2和JAK3基因在所檢測的10個組織器官（血液、腦、心、頭腎、鰓、腸、肝、肌肉、脾、皮膚）中表達水平有明顯差異。鯉JAK2在皮膚中表達量最高，其次是腸、血液和腦，在肌肉、心臟、肝、頭腎中表達水平較低，表達量最低的是鰓和脾臟（圖4-A）。鯉 JAK3在脾臟中表達水平最高，其次是血液和鰓，在腦、心、肝和肌肉中表達量極低，在皮膚中則檢測不到（圖4-B）。

圖3　依據(jù)JAK2分子氨基酸序列構建的分子系統(tǒng)進化樹Fig.3　Phylogenetic tree of the JAK2 amino acid sequences from various species

圖4　鯉JAK2和JAK3基因在不同組織中的轉錄水平Fig.4　Tissue expression Analysis of carp JAK2 and JAK3 genes in the level of mRNA

3　討 論

目前，在魚類 JAK2方面僅見斑馬魚 JAK2 cDNA全長序列（GenBank登錄號NP_571162），而在鱖魚［14］和斑點綠河豚［9］的研究均非 cDNA全長。本研究克隆到鯉魚JAK2基因的cDNA全長，5' -和3' -UTR均較斑馬魚的5' -和3' -UTR（685 bp和470 bp）長，且其3' -UTR中有2個ATTTA型mRNA不穩(wěn)定信號，而在斑馬魚中則未發(fā)現(xiàn)該信號序列。同源分析顯示，鯉JAK2氨基酸序列與斑馬魚對應序列的同一性和相似度高達 89%和95%，長度上僅少一個氨基酸，與哺乳類JAK2的序列同一性和相似性也在65%和80%以上，由此可見，JAK2基因在進化上高度保守。依據(jù)JAK氨基酸序列構建分子系統(tǒng)發(fā)育樹，其拓撲結構與各物種的進化地位和關系相吻合，支持“魚類和哺乳類的 JAK分子具有共同的祖先基因”的觀點［15］，提示JAK分子是研究脊椎動物屬及以上類群親緣關系的潛在分子標記。

蛋白結構域預測表明，和其他脊椎動物 JAK一樣，鯉JAK2含有FERM結構域、SH2結構域及 2個酪氨酸激酶結構域。在哺乳動物中，JAK分子的FERM結構域為相互作用分子提供結合位點，F(xiàn)ERM突變會導致相關信號分子與JAK的結合受限，進而影響信號轉導［16］。JAK假激酶結構域缺少催化活性所必需的氨基酸殘基，沒有磷酸轉移酶活性［17］，但該結構域的存在有助于JAK激酶活性充分發(fā)揮，并具有一定負反饋調節(jié)作用［17］。高度保守的酪氨酸激酶結構域是JAK的催化功能區(qū)，其中的D978FG-A1008PE序列為環(huán)狀活化區(qū)域（也稱“活化環(huán)”），對調節(jié)酪氨酸激酶的催化活性至關重要，活化環(huán)上的“FWY”基序尤其不可或缺［18］?；罨h(huán)上另一重要基序“Y992Y993”的兩個酪氨酸在JAK家族不同成員中作用不同，第1個酪氨酸磷酸化對JAK1、JAK2和JAK3的活性發(fā)揮至關重要，第2個酪氨酸突變不影響JAK1和 JAK2活性，但可顯著提高 JAK3的活性［18］。基于序列和結構域保守性，推測本研究中的鯉魚 JAK2在參與細胞因子信號傳導方面可能與哺乳類的功能類似，但魚類JAK2分子及其各結構域的確切功能還有待研究證實。

SignalP 4.0軟件預測，鯉JAK2無信號肽序列，這符合其作為非分泌型蛋白在胞內行使功能的特性。有趣的是，亞細胞定位預測顯示，鯉 JAK2最高頻分布位點在細胞核，其次為細胞質。一般認為JAK激酶是胞質蛋白激酶，只在細胞質中起作用，但已有研究證實，JAK也存在于細胞核內［19-20］，核內JAK可磷酸化STAT之外的轉錄因子，對基因表達起表觀調控作用［19］。關于JAK分子入核機制，目前尚無確切答案，是一個有待研究的重要問題。

人JAK2基因在脾臟、外周血、睪丸、心臟和肌肉組織中表達水平較高，在腦、肺、肝、胰、腸、卵巢組織中僅少量表達［21］；大鼠 JAK2基因在腦和脾臟組織中表達量最高，其次是肌肉和睪丸，而在腎、心臟、肺、肝組織中表達量較低［22］。魚類中的相關研究顯示，草魚JAK2基因在肝、肌肉、腦、心、腸、脾臟中均有表達，肝臟中表達量最高，心臟最低［23］；鱖魚中包括 JAK2在內的四個JAK基因在腦、鰓、性腺、心臟、頭腎、腸、肝、皮膚和脾組織中表達量都較高，而在肌肉中表達量很低［14］。本研究結果表明，鯉 JAK2在皮膚中表達水平最高，而在肝、心臟、頭腎、脾和鰓組織中表達水平都很低。可見，不論是魚類與哺乳類之間，還是不同種類的魚類之間，或是不同哺乳類之間，JAK2基因的組織表達狀況都存在一定差異。

Yin等［11］采用Northern blot技術對鯉JAK3的組織分布進行了研究，發(fā)現(xiàn)JAK3在脾臟和頭腎中高表達，在卵巢、肝、肌肉和皮膚中低表達。本研究中鯉JAK3在脾臟中表達量最高，在表達水平僅次于脾臟的血液和鰓組織中，其表達量也遠低于脾臟?？梢姡庺~中的研究結果大致符合或者說支持“JAK3較之其他三個JAK成員具有更強的組織表達偏好性，JAK3主要存在于造血細胞中”的推斷［2］。此外，吳平等［12］研究顯示，鯉 TYK2的組織表達模式與鯉JAK2的具有一定相似性，同樣是在皮膚中表達水平最高，而在心、鰓、肝、脾和頭腎中表達水平較低。鯉JAK1則是在血液、肝和腦中表達水平較高，心臟、皮膚、腸次之，在脾、頭腎、鰓和肌肉中相對較低［12］?？梢?，鯉魚不同JAKs的組織表達模式各有差異。除特異性表達于造血細胞的JAK3（其在脾臟中的表達水平與管家基因β-actin達到同數(shù)量級）外，在JAK1、JAK2和TYK2三者中，JAK1組織表達的總體水平顯著較高（其轉錄本拷貝數(shù)相對于內參基因β-actin的歸一化認定值與后兩者的不在一個數(shù)量級），其次是JAK2，TYK2的組織表達水平相對最低。鯉魚JAKs不同成員組織表達模式和組織表達水平的差異與其生物學功能的關聯(lián)還有待進一步研究探討。

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（責任編輯：劉慶穎）

Cloning and Expression Analysis of JAK2 Gene in Common Carp, Cyprinus carpio

FU You1，2，GAO Qian2，WEN Chun-gen1，WU Ping2，3，LIU De-li3
（1.School of Life Science and Food Engineering，Nanchang University，Nanchang 330031，China；2.State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology，Institute of Hydrobiology，Chinese Academy of Sciences，Wuhan 430072，China； 3.College of Life Science，Central China Normal University，Wuhan 430079，China）

The full-length cDNA sequence of JAK2 gene from common carp，Cyprinus carpio is obtained by using homology cloning and RACE（rapid amplification of cDNA ends）PCR.The full cDNA sequence of common carp JAK2 in length is 4 639 bp，containing a 3 378 bp complete open reading frame（ORF）which encodes 1 125 amino acids，a 732 bp 5'-untranslated region（5'-UTR），and a 529 bp 3'-UTR，with corresponding molecular mass of 129.33 ku and the theoretical isoelectric point of 6.99.The identity and similarity of its amino acid sequence with the corresponding sequence of zebrafish are 89% and 95%，respectively.Bioinformatics analysis indicated that common carp JAK2 had a FERM domain，an SH2 domain，a pseudokinase domain，and a tyrosine kinase domain.These functional domains are conservative among JAKs from fish，amphibians and mammals，showing thatthey share similar functional mechanism.The spatial structural elements of carp JAK2 are predicted to include α-helixes，β-sheets，and loops.Based on the phylogenetic tree of JAK2 generated by neighbor joining method in MEGA 4.0，it shows that each kind of JAKs forms a large monophyletic group，and that the JAK2 main-clade is a sister group to the JAK3 one，which means JAK2 is more closely related to JAK3.Moreover，all JAK2s from the teleost species，including common carp JAK2 in the present study，cluster together，then form the sister group with the second cluster consisting of all from amphibians and mammals.Thus，it is suggested that they should share a common ancestral gene of JAK2 and have remarkable orthologous relationships.The results of real-time quantitive PCR reveal that JAK2 and JAK3 genes are differentially expressed in various tissues of common carp at the level of mRNA.JAK2 is expressed in skin with the highest level，secondly in intestine，blood and brain，and expressed lowly in muscle，head kidney，heart，liver，gill and spleen.The expression level of carp JAK3 in spleen is particularly high，but relatively lower in other tissues.The results in this study have provided a basis for further evaluation on the regulation role of carp JAK2 in the JAK-STAT signaling pathway.

Cyprinus carpio； JAK2； JAK3； gene cloning； tissue expression analysis

Q78；Q959.46+8

A

1673-9159（2015）01-0008-10

2014-05-19

國家自然科學基金面上項目（31272666）；國家科技支撐計劃課題（2012BAD25B0202）；國家自然科學基金面上項目（30871937）

付友（1988-），男，碩士研究生，主要從事魚類免疫學研究.E-mail:ncuskfuyou@163.com

文春根，教授。Email:cgwen63@163.com.高 謙，Email:gaoqian@ihb.ac.cn