微生物學(xué)

微生物學(xué)

FM4-64和Hoechst染料在活細(xì)菌胞膜和擬核標(biāo)記定位中的條件優(yōu)化與應(yīng)用

王凈，韓延平，楊瑞馥，等

目的：為了觀察細(xì)菌細(xì)胞膜和擬核的形態(tài)結(jié)構(gòu)，準(zhǔn)確對(duì)亞細(xì)胞進(jìn)行定位。方法：本文利用FM4-64和Hoechst兩種染料，分別采用不同濃度和不同時(shí)間對(duì)大腸桿菌活細(xì)胞進(jìn)行染色和熒光共聚焦顯微成像，并對(duì)7種細(xì)菌的活細(xì)胞（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶爾森菌、軍團(tuán)菌、霍亂弧菌和炭疽芽孢桿菌）進(jìn)行染色觀察。結(jié)果：相同觀察條件下，不同染料濃度和不同的染色時(shí)間影響了細(xì)胞膜、擬核的熒光強(qiáng)度；確定了FM4-64染色通用條件（濃度20 μg/mL染色1 min）和Hoechst的最佳條件（濃度20 μg/mL染色20 min）。上述條件下，Hoechst對(duì)8種細(xì)菌染色效果均較理想，然而FM4-64對(duì)細(xì)菌染色效果不同，革蘭氏陰性菌（大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶爾森菌、霍亂弧菌、銅綠假單胞菌和軍團(tuán)菌）表現(xiàn)較好的細(xì)胞膜輪廓，革蘭氏陽性菌（炭疽芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌）效果較差。結(jié)論：FM4-64和Hoechst兩種染料共染8種細(xì)菌，對(duì)細(xì)胞膜和擬核的染色觀察，可為原核細(xì)胞結(jié)構(gòu)染色提供借鑒，并為大分子的亞細(xì)胞定位研究奠定基礎(chǔ)。

兩種染料FM4-64和Hoechst；活細(xì)菌；細(xì)胞膜；擬核；標(biāo)記定位

來源出版物：微生物學(xué)報(bào)，2015，55（8）： 1068-1073聯(lián)系郵箱：韓延平，yanpinghan@gmail.com