不同種植物葉中黃酮的提取及比較

陳生錕　楊玉瓊　韓佳華　王佰富　吳琴

（貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，貴州畢節(jié)　551700）

不同種植物葉中黃酮的提取及比較

陳生錕楊玉瓊韓佳華王佰富吳琴

（貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，貴州畢節(jié)551700）

用超聲波提取法對(duì)三種植物葉進(jìn)行單因素提取實(shí)驗(yàn)，并用索氏提取法和微波提取法作了對(duì)比試驗(yàn)，然后對(duì)超聲波提取法進(jìn)行了正交試驗(yàn)并確定了最優(yōu)提取條件。得出不同植物葉中黃酮提取率最高的方法為超聲提取法，其最佳提取工藝分別為銀杏：70%乙醇，時(shí)間50 min，料液比1：20，溫度70 ℃。竹葉：70%乙醇，時(shí)間40 min，料液比1：22，溫度60 ℃。杜仲：50 %乙醇，時(shí)間40 min，料液比1：22，溫度60 ℃。通過(guò)該實(shí)驗(yàn)對(duì)比得出不同植物中提取黃酮含量最高的方法為超聲波提取法，確定了不同植物中黃酮提取含量的最高的植物為竹葉。

黃酮微波法超聲提取波正交試驗(yàn)

1　材料與方法

（1）材料與儀器。樣品：銀杏葉、竹葉采自畢節(jié)，杜仲采自織金，均為2013年10月份采摘，洗凈，烘干，粉碎，備用。

試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、乙醇（無(wú)水乙醇）、氫氧化鈉（分析純）、硝酸鋁（分析純）、亞硝酸鈉（分析純）。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。取100度下干燥之恒重的蘆丁15.26mg，用50%乙醇配制濃度0.50 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，取上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、lmL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL，分別轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，加 mL5%的NaNO2，6min后加入10%1mLAI（NO3）3，6min后加入10mL4%NaOH充分振蕩搖勻，用蒸餾水定容至刻度，靜置30min后，以蘆丁含量為0.000mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液為參比，于500nm處測(cè)定吸光度（Abs），得回歸方程：Y=9.3036X+0.0077，相關(guān)系數(shù)R2=0.9992。

（3）樣品黃酮含量的計(jì)算。吸取5ml的提取樣品至于25ml容量瓶中，按上述繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟配制提取溶液，測(cè)量提取液的吸光度A，按下面的公式計(jì)算出植物葉黃酮的含量：

式中C一由測(cè)得的吸光值代入回歸方程計(jì)算得到的黃酮濃度，mg/mL。

圖1　乙醇濃度對(duì)黃酮含量的影響

圖2　提取時(shí)間對(duì)黃酮含量的影響

圖3　不同料液比對(duì)黃酮含量的影響

圖4　不同溫度比對(duì)黃酮含量的影響

V一溶液的體積，mL；ω為黃酮的百分含量；m為稱取樣品的質(zhì)量，g。

（4）索氏提取法提取不同種植物葉中黃酮類(lèi)化合物。準(zhǔn)確稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000 g于索氏提取儀中，在70%乙醇，時(shí)間2 h，料液比1：20的條件下，用100 mL乙醇進(jìn)行索氏提取之無(wú)色，趁熱旋蒸濃縮，后冷凍12 h，過(guò)柱（活性炭和氧化鋁）除去葉綠素，置于50 mL容量瓶用50%乙醇定容［3］。按“1.2”方法測(cè)定吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程和黃酮含量的計(jì)算公式求出不同植物中黃酮化合物的含量分別為：竹葉0.497%、銀杏0.746%、杜仲0.629%。（對(duì)比試驗(yàn)）

（5）微波提取法提提取不同種植物葉中黃酮類(lèi)化合物。準(zhǔn)確準(zhǔn)確稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000 g，加入到圓底燒瓶中，在70%乙醇，時(shí)間50min，功率400W，溫度70℃的條件下，用100mL乙醇進(jìn)行微波提取，趁熱旋蒸濃縮，后冷凍12h，過(guò)柱（活性炭和氧化鋁）除去葉綠素，置于100mL容量瓶用50%乙醇定容［4］。按“1.2”方法測(cè)定吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程和黃酮含量的計(jì)算公式求出不同植物葉中黃化合物的含量分別為：竹葉0.660%銀杏0.866%杜仲1.165%。（對(duì)比試驗(yàn)）

（6）超聲波提取法提取不同種植物葉中黃酮類(lèi)化合物。準(zhǔn)確稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000g，加入到圓底燒瓶中，用不同的乙醇濃度、超聲時(shí)間、料液比、超聲溫度分別進(jìn)行單因素影響實(shí)驗(yàn)。為全面考察超聲波取法提取不同種植物葉中黃酮類(lèi)化合物的影響因素［5］，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取各單因素的最優(yōu)條件，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)L9（34），確定植物葉黃酮的最佳提取條件。

表1　銀杏正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)L9（34）及結(jié)果

表2　竹葉正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)L9（34）及結(jié)果

2　結(jié)果與分析

2.1超聲波提取單因素實(shí)驗(yàn)

（1）乙醇濃度對(duì)黃酮提取的影響 稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000g，分別用濃度為30%、50%、70%、95%的乙醇溶液在50℃，料液比（g：mL）1：20，超聲波功率50Hz提取30min，趁熱旋蒸濃縮，加石油醚萃取葉綠素，后用50%乙醇稀釋定容至50mL，測(cè)定其吸光值，得黃酮含量與乙醇濃度之間的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

由圖1可知，銀杏葉在乙醇濃度為70%時(shí)，總黃酮的含量最高，之后趨于平緩，因此乙醇濃度為70%為最佳。竹葉在70%時(shí)，總黃酮含量最高，之后下降，所以70%為竹葉最佳的乙醇提取濃度。杜仲葉在30%～50%時(shí)黃酮含量呈上升趨勢(shì)，50%～95%趨于下降，所以50%為最佳提取濃度。

（2）提取時(shí)間對(duì)黃酮提取的影響 稱取竹葉、銀杏葉、杜仲葉粉末各5.000g，分別以30min、40min、50min、60min的不同提取時(shí)間在50℃，料液比（g：mL）1：20，50Hz超聲波提取。趁熱旋蒸濃縮，加石油醚萃取葉綠素，后用50%乙醇稀釋定容至50mL，測(cè)定其吸光值，得黃酮含量與提取時(shí)間之間的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

由圖2可以看出，銀杏葉在40min時(shí)黃酮提取含量值較高，故最佳提取時(shí)間為40min為宜。竹葉在40min黃酮提取含量值達(dá)到最高，往后趨于下降，所以最佳提取時(shí)間為40min最佳。杜仲葉在30min～50min黃酮提取含量值上升明顯，60min明顯下降，故50min為最佳。

（3）不同料液比對(duì)黃酮提取的影響稱取竹葉、銀杏、杜仲葉粉末各5.000g，分別以1：16、1：18、1：20、1：22的不同料液比（g：mL）在50℃，50Hz超聲波提取30min。趁熱旋蒸濃縮，加石油醚萃取葉綠素，后用50%乙醇稀釋定容至50mL，測(cè)定其吸光值，得黃酮含量與料液比之間的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3。

由圖3可以看出銀杏、竹葉、杜仲在1：18處黃酮含量值達(dá)到最大，往后或趨于平衡或下降，即在1：18為最佳提取料液比。

表3　杜仲正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)L9（34）及結(jié)果

表4　不同提取方法對(duì)不同植物提取效果比較

（4）不同溫度比對(duì)黃酮提取的影響稱取竹葉、銀杏、杜仲粉末各5.000g，分別在40℃、50℃、60 ℃、70℃下，以料液比為1：20（g：mL），50 Hz超聲波超聲提取30min。趁熱旋蒸濃縮，加石油醚萃取葉綠素，后用50%乙醇稀釋定容至50mL，測(cè)定其吸光值，得黃酮含量與溫度之間的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4。

由圖4可以看出，銀杏葉提取黃酮含量的值隨著溫度升高而增大，到60℃后趨于平緩，故60℃為最佳提取溫度。竹葉在50℃黃酮提取含量最高，往后隨溫度升高而下降，所以50℃為銀杏最佳提取溫度。杜仲黃酮提取含量隨溫度升高而增大，在60℃后增大不明顯，杜仲的最佳提取溫度為60℃～70℃。

2.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

從極差分析結(jié)果可以得到，影響銀杏葉黃酮提取含量的主次因素為：乙醇濃度>溫度>超聲時(shí)間料液比最佳提取工藝為A2B3C2D3，即70%乙醇，時(shí)間50min，料液比1：20，溫度70℃。

從極差分析結(jié)果可以得到，影響竹葉黃酮提取含量的主次因素為：乙醇濃度>溫度>超聲時(shí)間>料液比，最佳提取工藝為A2B2C3D3，即70%乙醇，時(shí)間40min，料液比1：22，溫度60℃。

從極差分析結(jié)果可以得到，影響杜仲葉黃酮提取含量的主次因素為：乙醇濃度>溫度>超聲時(shí)間>料液比，最佳提取工藝為A2B1C3D2，即50%乙醇，時(shí)間40min，料液比1：22，溫度60℃。

2.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)為了驗(yàn)證優(yōu)化提取條件的可靠性，對(duì)銀杏葉、竹葉、杜仲葉分別選其上述最優(yōu)工藝下重復(fù)提取3次，其總黃酮的平均提取含量（%）分別為1.532、1.847、1.462，與前面的微波提取法、索氏提取法比較，優(yōu)于兩者的提取效果。

2.4提取方法比較

按照研究后的超聲優(yōu)化提取工藝與傳統(tǒng)的索氏提取法跟新型的微波提取方法作比較，結(jié)果見(jiàn)下表4。

由表可以看出，按照該研究的優(yōu)化工藝進(jìn)行提取較傳統(tǒng)的提取方法提取黃酮的含量高，不同植物用不同方法所提取的黃酮含量不同，而不同方法的不同條件對(duì)黃酮提取也有很大影響。此外，新型的提取方法比傳統(tǒng)的提取方法還具有簡(jiǎn)便、省時(shí)、產(chǎn)率高等優(yōu)點(diǎn)。

3　結(jié)語(yǔ)

通過(guò)對(duì)三種植物葉黃酮提取方法的研究，超聲波提取法與索氏提取法和微波提取方法相對(duì)比，得出三中植物葉中提取黃酮含量最高的方法為超聲波提取法，其最佳提取工藝分別為，銀杏：70%乙醇，時(shí)間50min，料液比1：20，溫度70℃。竹葉：70%乙醇，時(shí)間40 min，料液比1：22，溫度60℃。杜仲：50%乙醇，時(shí)間40min，料液比1：22，溫度60℃。確定了不同植物中黃酮提取含量的最高的植物為竹葉。

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［2］劉游海，陶秉瑩，張立麒.超臨界萃取法從銀杏葉中提取黃酮類(lèi)化合物、枯內(nèi)酷的工藝研究［J］.南昌大學(xué)學(xué)報(bào)，2000（4）：34-38.

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