原花青素降低脂質(zhì)過(guò)氧化作用的研究*

張愛(ài)軍　臧家業(yè)

（國(guó)家海洋局第一海洋研究所，山東青島　266061）

原花青素降低脂質(zhì)過(guò)氧化作用的研究*

張愛(ài)軍臧家業(yè)

（國(guó)家海洋局第一海洋研究所，山東青島266061）

鑒于原花青素的獨(dú)特生物活性和特殊功能，原花青素及其制劑成為國(guó)內(nèi)外研究開發(fā)熱點(diǎn)［2］。本文就原花青素降低脂質(zhì)過(guò)氧化作用進(jìn)行了初步的研究，為今后將原花青素用于人類保健品或一些疑難病癥防治藥物的開發(fā)研究，提供了科學(xué)依據(jù)。以高、中、低三種劑量的原花青素喂食小鼠45d，對(duì)照組給予等體積的蒸餾水，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果是高劑量組與老齡對(duì)照組比較， MDA含量明顯降低，血清SOD活力明顯升高（P＜0.05），表明原花青素具有降低脂質(zhì)過(guò)氧化作用。

原花青素脂質(zhì)過(guò)氧化作用

原花青素（Oligomeric Proanthocyanidins）是自然界中廣泛存在的聚多酚類混合物，主要由兒茶素的單體、二聚體、三聚體……十聚體組合而成［1］。原花青素的研究有相當(dāng)長(zhǎng)的歷史，作為抗氧化劑在食品工業(yè)有廣泛的應(yīng)用，隨著研究的深入，還發(fā)現(xiàn)原花青素能防止延緩和抑制過(guò)量自由基引起的老化損害，在保護(hù)心臟，提高血液載氧量，保護(hù)血管，保護(hù)眼睛，抗炎，抗癌，抗基因突變，抗氧化，抗輻射損傷，清除自由基，修復(fù)膠原蛋白，抗紫外線輻射，防止黑色素形成，增白等方面具有良好的功效。鑒于原花青素的獨(dú)特生物活性和特殊功能，原花青素及其制劑成為國(guó)內(nèi)外研究開發(fā)熱點(diǎn)［2］。本文就原花青素降低脂質(zhì)過(guò)氧化作用進(jìn)行了初步的研究，為今后將原花青素用于人類保健品或一些疑難病癥防治藥物的開發(fā)研究，提供了科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

（1）樣品，紅棕色粉劑（水分4.4%，灰分1.3%，原花青素93.62%），青島海隆達(dá)生化科技有限公司。原花青素標(biāo)準(zhǔn)品，sigma公司提供。（2）試驗(yàn)動(dòng)物，健康二級(jí)昆明種雄性15月齡老齡鼠和8周少齡小鼠，山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。（3）劑量選擇，原花青素成人推薦量為120mg/kg·b. w（成年人體重按60kg計(jì)算）。分別擴(kuò)大3、10和30倍作為低（360 mg/ kg·b.w）、中（1200 mg/kg·b.w）和高劑量（3600 mg/kg·b.w）老齡鼠實(shí)驗(yàn)組，另設(shè)老齡對(duì)照組和少齡對(duì)照組，每組動(dòng)物10只。用蒸餾水將樣品配制所需濃度，連續(xù)經(jīng)口灌胃45d，對(duì)照組給予等體積的蒸餾水，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。（4）主要儀器和試劑，960-熒光分光光度計(jì)、722分光光度計(jì)、離心機(jī)、混旋器、微量加樣器、恒溫水浴鍋；6.7g/L硫代巴比妥酸TBA－冰醋酸（1：1）混合液、10nmol/ml四乙氧基丙烷、100g/L磷鎢酸、10mmol/L鹽酸羥胺、7.5mmol/L黃嘌呤、0.023u/ml黃嘌呤氧化酶、10g/L甲萘胺、3.3g/L對(duì)氨基苯磺酸、3g/L磺基水楊酸、SOD標(biāo)準(zhǔn)品等。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1全血中過(guò)氧化脂質(zhì)降解物丙二醛（MDA）含量測(cè)定

（1）樣品制備：取全血50ul加入1ml生理鹽水，2000r/min離心10min，取上清液待測(cè)。

表1　原花青素對(duì)老齡小鼠全血中MDA含量的影響

表2　原花青素對(duì)老齡小鼠血清中SOD活力的影響

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：將10nmol/ml四乙氧基丙烷，用蒸餾水稀釋成0.25、0.5、1、1.5、2和5nmol/ml，分別取1ml加入TBA－冰醋酸（1：1）混合液1ml，混勻，沸水浴75min，流水冷卻至室溫，加5ml正丁醇振蕩提取2min，3000r/min離心10min，取上清液（正丁醇層）用熒光光度計(jì)測(cè)熒光強(qiáng)度（狹縫10nm，激發(fā)光波廠515nm，發(fā)射光波長(zhǎng)553nm）。

（3）全血樣品測(cè)定：全血樣品上清液0.5ml，加入1/6mol/L硫酸4ml、100g/L磷鎢酸0.5ml搖勻，室溫放置5min，3000r/min離心10min，棄上清液，沉淀加1/6mol/L硫酸2ml、100g/L磷鎢酸0.3ml搖勻，室溫放置5min， 3000r/min離心10min，棄上清液，沉淀加1ml蒸餾水振搖2min，以下操作步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)以濃度0.5 nmol/ ml的四乙氧基丙烷為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照。

（4）全血MDA含量計(jì)算：MDA含量（nmol/ml）=0.5×f/F×1/ 0.05×1.05/0.5

式中F：0. 5nmol/ml四乙氧基丙烷熒光強(qiáng)度；f：樣品熒光強(qiáng)度。

1.2.2血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力測(cè)定（羥胺法）

血清樣品制備：取全血50ul，制備血清待測(cè)。

血清中SOD活力測(cè)定：依次取1/15mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8）1.0ml，血清樣品20ul，10mmol/L鹽酸羥胺0.1ml，7.5mmol/L黃嘌呤0.1ml，0.023u/ml黃嘌呤氧化酶0.1ml，雙蒸水0.5ml加入到試管內(nèi)混勻，37℃恒溫水浴30min，再加入3.3g/L對(duì)氨基磺酸2.0ml，10g/L甲萘胺2.0ml，混勻，常溫放置15min，倒入1cm光徑比色杯，以蒸餾水調(diào)零，530nm處比色測(cè)定OD值，同時(shí)進(jìn)行空白對(duì)照測(cè)定。

SOD活力的計(jì)算：按以下公式計(jì)算SOD百分抑制率：

SOD百分抑制率=（對(duì)照管OD－測(cè)定管OD）/對(duì)照管OD×100%

按每ml反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)單位，按以下公式計(jì)算SOD的活力：SOD活力（u/ml）=SOD百分抑制率/50%×樣品稀釋倍數(shù)

1.2.3統(tǒng)計(jì)處理：采用方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)處理2結(jié)果

2.1原花青素對(duì)小鼠全血中過(guò)氧化脂質(zhì)降解物丙二醛（MDA）含量的影響

表1顯示，經(jīng)口給予老齡小鼠原花青素45d，高劑量組與老齡對(duì)照組比較，全血MDA含量明顯降低（P＜0.05），低劑量組和中劑量與老齡對(duì)照組比較，全血MDA含量差異無(wú)顯著性。

2.2原花青素對(duì)老齡小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力的影響表2顯示實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)口給予老齡小鼠原花青素45d，高劑量組與老齡對(duì)照組比較，血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力明顯增高（P＜0.05），低劑量組和中劑量與老齡對(duì)照組比較，血清中SOD活力差異無(wú)顯著性。

3　結(jié)語(yǔ)

經(jīng)口給予小鼠原花青素45天，高劑量組與老齡對(duì)照組比較，MDA含量明顯降低，血清SOD活力明顯升高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，原花青素有降低脂質(zhì)過(guò)氧化作用。

原花青素之所以能夠延長(zhǎng)壽命，可能與其擁有強(qiáng)有力的抗氧化能力有關(guān)［3］。研究表明，原花青素在體內(nèi)其抗氧化、清除自由基能力是維生素E的50倍、維生素C的20倍［4］。原花青素制品在歐美等西方國(guó)家市場(chǎng)非常走俏，一瓶60粒膠囊（每粒含原花青素50毫克）售價(jià)為23.95美元，而每粒含100毫克的原花青素一瓶售價(jià)為39.95美元，原花青素在保健品中市場(chǎng)零售價(jià)高達(dá)4.48萬(wàn)元/千克。我國(guó)目前未有以原花青素為主要有效成份的藥品、保健品的開發(fā)才剛剛開始，目前的用量很少。但由于其明顯的生物活性效應(yīng)和使用效果，必將在食品添加劑，保健品，化妝品，藥品等方面得到廣泛的應(yīng)用，需求逐漸增加，具有相當(dāng)強(qiáng)勁的市場(chǎng)前景和經(jīng)濟(jì)效益。

［1］專利：WO［9739632］.

［2］Toshiaki Ariga Agric Biol chem.，1990，54（10）：2499-2540.

［3］王傳現(xiàn)，鐘進(jìn)義.葡多酚對(duì)活性氧自由基的清除作用研究.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2001，23（2）：170-173.

［4］中國(guó)制藥信息.1998，4.

國(guó)家高新技術(shù)發(fā)展計(jì)劃（863）資助項(xiàng)目（2001AA620502）。

張愛(ài)軍（1975—），男，工程師，主要從事天然產(chǎn)物的研究與開發(fā)工作。