分子生物學(xué)

分子生物學(xué)

封面介紹：《科技導(dǎo)報(bào)》2015年第1期17-21頁發(fā)表了朱艷等的“利用多克隆抗體檢測紡錘體蛋白基因INMAP在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)”研究論文，該文通過誘導(dǎo)原核表達(dá)，獲得可溶性的His-INMAP融合蛋白，經(jīng)鎳親和柱分離純化、免疫小鼠，制備了特異性較高的INMAP多克隆抗體.用新制備抗體檢驗(yàn)出INMAP在幾種肝癌細(xì)胞系中具有異常表達(dá)和多態(tài)性.本期封面圖片表現(xiàn)了INMAP 高表達(dá)裸鼠荷瘤模型的構(gòu)建，由朱艷提供，何夢潔協(xié)助圖片編排.

利用多克隆抗體檢測紡錘體蛋白基因INMAP在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)

朱艷，康璟妍，王鈺，等

為探究紡錘體蛋白INMAP的功能及其在細(xì)胞惡性增殖中發(fā)揮的作用，制備INMAP多克隆抗體.利用0.1 mmol/L IPTG于16℃誘導(dǎo)His-INMAP融合蛋白進(jìn)行原核表達(dá)，SDSPAGE及免疫印跡檢測蛋白表達(dá).4.0 mol/L尿素處理包涵體獲得可溶性融合蛋白，鎳親和柱分離純化融合蛋白抗原并檢測蛋白濃度及純度.以所獲抗原免疫4只Balb/c小鼠，收集心臟抗血清.以純化前、后的原核表達(dá)產(chǎn)物作為抗原，檢測INMAP多克隆抗體的特異性.通過免疫印跡分析INMAP在正常肝細(xì)胞系L-02及5個(gè)肝癌細(xì)胞系（PLC、HepG2、SUN449、SMMC-7721和BEL-7402）中的表達(dá)差異.結(jié)果顯示，His-INMAP融合蛋白主要以包涵體形式存在，經(jīng)4.0 mol/L尿素處理可獲得可溶性目的蛋白，且純化后的抗原純度較高（94.1%）.INMAP多克隆抗體能與INMAP抗原特異結(jié)合.INMAP在6種肝細(xì)胞中具有多態(tài)性，除PLC外，在其他肝癌細(xì)胞中其基因表達(dá)水平顯著下調(diào).本研究制備的INMAP多克隆抗體特異性高，為INMAP基因功能的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ).

INMAP；肝癌細(xì)胞；多克隆抗體；包涵體

來源出版物：科技導(dǎo)報(bào)，2015，33（1）: 17-21聯(lián)系郵箱：梁前進(jìn)，Lqj@bnu.edu.cn

熒光雙分子互補(bǔ)分析Ezrin與L-periaxin的互作模式

彭婷婷，王慧，石亞偉

摘要：腓骨肌萎縮癥4F亞型是Periaxin基因的突變所導(dǎo)致一種脫髓鞘型遺傳病.Periaxin蛋白是外周神經(jīng)系統(tǒng)中特異且大量表達(dá)的蛋白，在髓鞘成熟與維護(hù)中發(fā)揮重要作用.而Ezrin是一種膜骨架連接蛋白，在細(xì)胞形態(tài)的維持、運(yùn)動(dòng)、黏附等方面發(fā)揮重要作用.在前期已證實(shí)L-periaxin與Ezrin間存在蛋白互作的基礎(chǔ)上，本文通過分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，結(jié)合免疫熒光定位實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀等技術(shù)，進(jìn)一步分析并揭示了L-periaxin蛋白與Ezrin蛋白之間的互作方式，具體為L-periaxin（1 200 aa）與Ezrin（1296 aa）以及L-periaxin（1060～1461 aa）與Ezrin（475～585 aa）以“頭對頭”與“尾對尾”的方式發(fā)生相互作用.Ezrin可能是一種引導(dǎo) L-periaxin在施萬細(xì)胞膜上堆積的新的分子配體，二者可能通過蛋白分子間更加緊密的方式完成在細(xì)胞膜處的堆積，參與到髓鞘的維護(hù)中.

關(guān)鍵詞：L-periaxin； Ezrin； “頭對頭”與“尾對尾”；蛋白相互作用；熒光雙分子互補(bǔ)

來源出版物：中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2015，31（1）: 38-46

聯(lián)系郵箱：石亞偉，yaweishi@sxu.edu.cn