6—BA與NAA對(duì)黑玫瑰石竹離體培養(yǎng)的影響

陳小強(qiáng)等

摘要：以黑玫瑰石竹（Dianthus linn）莖段為外植體，MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，研究了6-BA與NAA對(duì)黑玫瑰石竹試管苗不定芽分化的影響。結(jié)果表明，采用MS+1.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA培養(yǎng)基對(duì)芽分化及生長(zhǎng)效果較好。

關(guān)鍵詞：黑玫瑰石竹（Dianthus linn）；組織培養(yǎng)；6-BA；NAA

中圖分類號(hào)：S681.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）16-4063-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.060

Effects of 6-BA and NAA on Dianthus linn in vitro Culture

CHEN Xiao-qiang， YU Ze-tao， SUN Ning， XIN Nan， DENG Lin-xia

（College of Agronomy & Resources and Environment， Tianjin Agricultural University， Tianjin 300384， China）

Abstract： The stem section of Dianthus linn were used as explants， MS was basic medium， the effects of 6-BA and NAA on Dianthus linn bud differentiation were discussed.The results showed that the medium with MS +20 g/L sucrose+1.0 mg/L 6-BA and 0.2 mg/L NAA was better for bud differentiation and bud growth.

Key words： Dianthus linn； plant tissue culture； hormones；6-BA；NAA

黑玫瑰石竹（Dianthus linn）系多年生宿根草本植物，地生、莖直立，花朵為紫色，聚傘花絮且花期長(zhǎng)，能夠雅俗共賞，市場(chǎng)需求量很大[1]。常規(guī)的扦插繁殖成活率低，無(wú)法滿足市場(chǎng)的需求，而且長(zhǎng)期的營(yíng)養(yǎng)生殖使病蟲(chóng)害加重，直接影響其商品價(jià)值。通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)繁育黑玫瑰石竹，有快速、復(fù)壯、脫毒的效果，可大大地提高其產(chǎn)量和質(zhì)量，同時(shí)也可以培育優(yōu)良的新品種[2]。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)黑玫瑰石竹組織培養(yǎng)方面的研究較少，主要集中在玻璃化問(wèn)題的解決，而關(guān)于激素對(duì)黑玫瑰石竹組織培養(yǎng)的影響報(bào)道更少[3]。因此，本試驗(yàn)研究了不同外源激素對(duì)黑玫瑰石竹組織培養(yǎng)的影響，旨在為黑玫瑰石竹乃至石竹類植物快速繁殖及大規(guī)模生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為黑玫瑰石竹，取自天津農(nóng)學(xué)院農(nóng)學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院植物細(xì)胞工程研究中心，選用的是無(wú)病害、花型好、花色純正、品種優(yōu)良、生長(zhǎng)健壯的植株。

1.2 培養(yǎng)條件

日光燈為光源，光照時(shí)間14～16 h、光照度1 500～2 000 lx，溫度25±2 ℃，相對(duì)濕度70%～80%。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 外植體的采集與消毒 選取品種優(yōu)良、花色純正、花型好、無(wú)病蟲(chóng)害、生長(zhǎng)健壯的植株基部采取側(cè)芽，逐層剝?nèi)ト~片，留頂部未展開(kāi)的2～3對(duì)葉，切取2 cm帶芽莖段，用含堿性洗滌劑的清水清洗干凈。

1.3.2 培養(yǎng)基的配制與滅菌 基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，加瓊脂6.3 g/L，激素為6-BA（6-芐基氨基嘌呤）、NAA（萘乙酸）。將配制好的MS培養(yǎng)基（pH調(diào)至5.9左右）分裝在90個(gè)培養(yǎng)瓶中（每瓶50 mL接種3個(gè)莖段，每個(gè)處理有10瓶重復(fù)）。分裝好的培養(yǎng)基120 ℃高溫高壓蒸汽滅菌20 min。

1.3.3 正交試驗(yàn) 采用L9（34）正交試驗(yàn)對(duì)6-BA（A）、NAA（B）、蔗糖（C）進(jìn)行設(shè)計(jì)，正交試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與分析

正交試驗(yàn)結(jié)果與極差分析如表2所示。由表2可知，影響黑玫瑰石竹不定莖分化的影響因素大小順序?yàn)锽、A、C，最佳組合為A2B2C1（C3），即6-BA 0.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L、蔗糖 20（40） mg/L。

黑玫瑰石竹莖段接種在5號(hào)（6-BA 1.0 mg/L， NAA 0.2 mg/L，40 g蔗糖）的MS培養(yǎng)基上芽的分化率最高。通過(guò)觀察可以發(fā)現(xiàn)，5號(hào)培養(yǎng)基上的試管苗長(zhǎng)勢(shì)最好（圖1A）。由于正交設(shè)計(jì)的試驗(yàn)中不包括A2B2C1組合，又進(jìn)行了A2B2C1組合試驗(yàn)研究，結(jié)果見(jiàn)圖1B，試管苗在此培養(yǎng)基組合中長(zhǎng)勢(shì)確實(shí)也很好。

綜上所述，由于蔗糖的濃度變化對(duì)黑玫瑰石竹出芽生長(zhǎng)影響不大，選擇最適宜黑玫瑰石竹出芽的培養(yǎng)基為MS+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+20 g/L 蔗糖。

3 小結(jié)與討論

外源激素對(duì)于黑玫瑰石竹試管苗芽的增殖分化有著顯著的影響，6-BA是細(xì)胞分裂類激素，對(duì)于細(xì)胞的分化及出芽有著必要的作用[4]。NAA是生長(zhǎng)素類激素，對(duì)于外植體的生根有重要作用[5]。當(dāng)選擇1.0 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基時(shí)不定芽的增殖效果較好。MS培養(yǎng)基具有高濃度的無(wú)機(jī)鹽，高含量的氮、鉀，尤其硝酸鹽的用量很大，同時(shí)含有一定數(shù)量的銨鹽，而且營(yíng)養(yǎng)豐富，能加速愈傷組織和培養(yǎng)物生長(zhǎng)的作用，因此是目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。王家福[6]的研究結(jié)果表明，當(dāng)植物生長(zhǎng)類激素/細(xì)胞分裂類激素>1時(shí)不利于芽的分化；當(dāng)植物生長(zhǎng)類激素/細(xì)胞分裂類激素=10或者5時(shí)更利于形成根；當(dāng)植物生長(zhǎng)類激素/細(xì)胞分裂類激素<1.0（=0.5時(shí)最適宜）有利于芽的增值。本試驗(yàn)得出的結(jié)論0.2 mg/L NAA與1.0 mg/L 6-BA的比為0.2，符合芽的分化激素配比規(guī)律。因此，MS基本培養(yǎng)基中加入蔗糖20 g，選擇1.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA作為黑玫瑰石竹出芽的外源激素是最合適的。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉慧民，胡 冰.花卉類植物組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展概述[J].北方園藝，2000（1）：62.

[2] 李 軍，徐 虹，王曉敏.不同因素對(duì)香石竹初代培養(yǎng)的影響[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2008，14（19）：41-42.

[3] 劉開(kāi)輝.不同濃度的外源激素對(duì)香石竹組織培養(yǎng)的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（19）：5735-5736.

[4] 周瑞金，楊 靜，孔曉萍.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)香石竹離體培養(yǎng)的影響[J].現(xiàn)代園藝，2013（12）：5-6.

[5] 李 軍，徐 虹，王曉敏.不同因素對(duì)香石竹初代培養(yǎng)的影響[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2008，14（19）：41-42.

[6] 王家福.花卉組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)[M].北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2006.166-167.endprint