肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)對(duì)原發(fā)性肝癌患者T淋巴細(xì)胞亞群的影響

王立靜，苗同國(guó)，寧更獻(xiàn)，張建集，蔡麗芬

肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)對(duì)原發(fā)性肝癌患者T淋巴細(xì)胞亞群的影響

王立靜，苗同國(guó)，寧更獻(xiàn)，張建集，蔡麗芬

目的探討肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)（TACE）前后原發(fā)性肝癌（PHC）患者T細(xì)胞亞群的變化。方法采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)PHC患者TACE術(shù)前1 d與術(shù)后1、2、3和4周外周血CD3、CD4、CD8 T細(xì)胞及CD4/CD8、CD4CD25/CD4的比值變化。結(jié)果PHC患者術(shù)前外周血T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD4/ CD8比值顯著低于健康對(duì)照組，CD8則明顯高于健康對(duì)照組（P＜0.05）；治療1周后外周血T細(xì)胞亞群指標(biāo)較治療前明顯下降（P＜0.05），而4周后外周血T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8及CD4/CD8比值較治療前顯著增高（P＜0.05）。PLC患者外周血中CD4CD25/CD4 T細(xì)胞的比例顯著高于健康對(duì)照組，與術(shù)前比較，術(shù)后1、2周外周血CD4CD25/CD4 T細(xì)胞的比例明顯升高，術(shù)后4周外周血CD4CD25/CD4 T細(xì)胞的比例顯著下降。結(jié)論TACE可以改善PHC患者的免疫狀況。

原發(fā)性肝癌；肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)；T細(xì)胞亞群；細(xì)胞免疫功能

【Abstract】ObjectiveTo investigate the changes of T lymphocyte subsets in patients with primary hepatocellular carcinoma（HCC）after transcatheter arterial chemoembolization（TACE）.MethodsA total of 40 patients with pathologically-proved HCC（study group）were enrolled in this study.Other 40 healthy volunteers were randomly collected and used as control group.Peripheral blood CD3，CD4 and CD8 T cells as well as CD4/CD8，CD4CD25/CD4 ratio were determined one day before TACE and one，2，3 and 4 weeks after TACE were determined in all patients by using flow cytometry assay.The results were statistically analyzed.ResultsThe preoperative peripheral T lymphocyte subsets CD3，CD4 T cells and CD4/CD8 ratio in the study group were significantly lower than those in the control group，while CD8 T cells in the study group were significantly higher than that in the control group（P＜0.05）.One week after treatment，the indexes of peripheral T lymphocyte subsets in the study group were obviously decreased when compared with the preoperative data（P＜0.05），and 4 weeks after the treatment the peripheral T lymphocyte subsets，including CD3，CD4 and CD8 T cells as well as CD4/CD8 ratio，were significantly increased when compared with the preoperative data（P＜0.05）.The peripheral CD4CD25/CD4 ratio in the study group was much higher than that in the control group.In the study group，the peripheral CD4CD25/CD4 ratio determined at one and 2 weeks after the treatment was strikingly increased when compared with preoperative data；and four weeks after the treatment，the peripheral CD4CD25/CD4 ratio was dramatically decreased（P＜0.05）.Conclusion TACE can improve the immune status of HCC patients.（J Intervent Radiol，2015，24：165-168）

【Keywords】primaryhepatocellularcarcinoma；transcatheterarterialchemoembolization；T lymphocyte subsets；cellular immune function

原發(fā)性肝癌（primary hepatic carcinomas，PHC）是原發(fā)于肝臟的惡性上皮細(xì)胞腫瘤，主要包括肝細(xì)胞癌、肝內(nèi)膽管癌以及肝細(xì)胞和肝內(nèi)膽管混合癌，是臨床常見(jiàn)惡性腫瘤，病死率高，占我國(guó)惡性腫瘤死亡率第2位。PHC起病隱匿、發(fā)展快，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)多為中晚期，失去手術(shù)機(jī)會(huì)。肝動(dòng)脈栓塞化療（TACE）適應(yīng)證較廣，與傳統(tǒng)的手術(shù)切除相比具有創(chuàng)傷小，費(fèi)用低的優(yōu)勢(shì)，已成為中晚期肝癌的主要治療手段。其基本的治療原理是栓塞腫瘤供血?jiǎng)用}致腫瘤壞死。研究證實(shí)，肝癌的發(fā)生進(jìn)展及預(yù)后與腫瘤局部微環(huán)境和全身免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)，肝癌組織壞死后釋放的腫瘤抗原可誘導(dǎo)抗腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)［1-2］。

作為一種微創(chuàng)治療手段，TACE在臨床上的治療效果為醫(yī)患所接受。本研究通過(guò)檢測(cè)肝癌患者在TACE后不同治療時(shí)段外周血CD3、CD4、CD8、CD4/ CD8的變化及調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞CD4CD25在CD4 T細(xì)胞中的百分比，來(lái)觀察TACE對(duì)患者機(jī)體免疫功能的影響。

1　材料與方法

1.1一般資料

選取我院2011年1月—2013年1月經(jīng)臨床或肝穿刺病理證實(shí)為肝癌的患者40例。其中男32例，女8例，平均年齡（52.8±15.2）歲。所有患者均有乙型肝炎病史，肝功能Child-Pugh分級(jí)A級(jí)8例，B級(jí)30例，C級(jí)2例，治療前均在接受核苷類(lèi)藥物抗病毒治療。以年齡性別為匹配條件，隨機(jī)選擇40例正常體檢志愿者作為對(duì)照組。兩組研究對(duì)象久居當(dāng)?shù)?，在飲食、嗜好、民族、氣候環(huán)境等方面基線一致。所有研究對(duì)象均無(wú)糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕、甲狀腺功能亢進(jìn)等自身免疫性疾病史，入組前后均未進(jìn)行過(guò)免疫治療。

1.2方法

1.2.1治療方法全部患者均符合TACE治療適應(yīng)證，并行TACE治療，采用Seldinger技術(shù)，經(jīng)皮股動(dòng)脈穿刺，導(dǎo)管選擇至腫瘤供血?jiǎng)用}行DSA造影。根據(jù)腫瘤血供情況進(jìn)行栓塞。治療方案為5-氟尿嘧啶750～1 000 mg，順鉑40～80 mg，絲裂霉素20 mg，聯(lián)合超液化碘油5～15 ml進(jìn)行栓塞。

1.2.2流式細(xì)胞計(jì)（FCM）檢測(cè)CD3、CD4、CD8、CD4CD25以及CD4/CD8、CD4CD25/CD4比值抽取健康志愿者和PLC患者術(shù)前1 d血樣進(jìn)行檢測(cè)，作為比較基線；并分別于術(shù)后1、2、3和4周抽取PLC患者血樣。用淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法分離外周血中有核細(xì)胞，外周血中有核細(xì)胞染色標(biāo)記30 min，溶血10 min，300 g離心5 min，棄上清液，PBS洗2次，隨后上機(jī)檢測(cè)，并采用Cellquest軟件進(jìn)行樣品測(cè)定分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1肝癌患者與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群水平對(duì)比

肝癌患者外周血中CD3、CD4、CD8、CD4/CD8的表達(dá)分別為50.16±6.31、27.12±3.36、27.36± 5.64、1.16±0.27，與健康對(duì)照組相比，均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。其中，肝癌患者CD4 T細(xì)胞較健康對(duì)照組明顯下降，而CD8 T細(xì)胞則呈明顯升高，CD4/CD8較健康對(duì)照組也呈明顯下降。見(jiàn)表1。

表1　肝癌患者與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群水平對(duì)比（±s）

表1　肝癌患者與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群水平對(duì)比（±s）

注：a表示與對(duì)照組比較，P＜0.05；b表示與對(duì)照組比較，P＞0.05

組別CD3CD4CD8CD4/CD8CD4CD25/CD4肝癌組50.16±6.31a27.12±3.36a27.36±5.64a1.16±0.27a9.15±3.63b健康對(duì)照組61.35±3.0732.54±5.5621.87±2.751.85±0.156.20±2.25

2.2TACE治療前后肝癌患者外周血T細(xì)胞亞群的變化

TACE治療1周后外周血T細(xì)胞亞群CD3、CD4及CD4/CD8較治療前明顯下降（P＜0.05），治療4周后外周血T細(xì)胞亞群CD3、CD4及CD4/CD8較治療1周后有明顯改善（P＜0.01），較治療前也有顯著改善（P＜0.05）。治療后2周CD3、CD4及CD4/CD8水平略低于治療前，治療3周后CD3、CD4及CD4/CD8稍高于治療前，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2　TACE治療原發(fā)性肝癌前后外周血T細(xì)胞亞群及CD4CD25調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化（±s）

表2　TACE治療原發(fā)性肝癌前后外周血T細(xì)胞亞群及CD4CD25調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化（±s）

注：a表示與術(shù)前比較，P＜0.05；b表示治療后4周與治療后1周比較，P＜0.01

組別CD3CD4CD8CD4/CD8CD4CD25/CD4術(shù)前50.16±6.3127.12±3.3627.36±5.641.16±0.279.15±3.63術(shù)后1周46.55±3.94a22.65±2.35a28.48±6.210.85±0.16a11.65±5.12術(shù)后2周49.13±2.4325.43±3.1626.37±5.450.98±0.3210.26±6.64術(shù)后3周52.36±4.6426.46±2.5326.69±5.131.20±0.158.60±5.73術(shù)后4周54.35±3.43b30.50±4.12b25.83±3.901.36±0.22b7.21±3.42b

2.3TACE治療前后肝癌患者外周血CD4CD25調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例變化

肝癌患者TACE術(shù)前外周血中CD4CD25/CD4為（9.15±3.63），相對(duì)高于健康對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；術(shù)后1、2周明顯升高，分別為（11.65±5.12）、（10.26±6.64），與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；術(shù)后3周基本接近治療前水平，為（8.60±5.73），與術(shù)前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后4周CD4CD25 T細(xì)胞占CD4 T細(xì)胞的比例為（7.21±3.42），較治療前明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表1、2。

3　討論

PHC是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率和病死率。針對(duì)PHC的基礎(chǔ)和臨床研究一直是腫瘤學(xué)科研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。加強(qiáng)對(duì)機(jī)體免疫狀態(tài)的監(jiān)測(cè)，對(duì)于肝癌患者病情評(píng)估、臨床診療方案的制定、完善肝癌治療模式和提高療效具有重要作用［3］。機(jī)體免疫功能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切，其中T細(xì)胞在機(jī)體抗腫瘤的免疫調(diào)節(jié)中起著舉足輕重的作用［4］。

CD3細(xì)胞代表成熟的T淋巴細(xì)胞，是細(xì)胞免疫中主要的活性細(xì)胞，可分為CD4和CD8 T細(xì)胞2個(gè)亞群。臨床上通過(guò)檢測(cè)CD4、CD8等T細(xì)胞數(shù)值以及CD4/CD8細(xì)胞比值來(lái)判斷機(jī)體免疫平衡的狀態(tài)。在正常情況下，淋巴細(xì)胞亞群中CD4細(xì)胞和CD8細(xì)胞處于一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定平衡狀態(tài)，維持機(jī)體免疫功能。但在癌癥患者，機(jī)體免疫力常遭到不同程度的破壞，呈現(xiàn)出CD4/CD8細(xì)胞比值下降［5］，抗腫瘤作用減弱，有利于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究顯示與健康對(duì)照組相比肝癌患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂，表現(xiàn)為外周血CD3、CD4、CD4/CD8水平明顯降低，CD8比例明顯升高，提示肝癌患者的細(xì)胞免疫功能處于明顯抑制狀態(tài)。TACE治療1周后CD3、CD4、CD4/CD8比值較術(shù)前降低，CD8高于術(shù)前，說(shuō)明TACE治療在短時(shí)間內(nèi)加重了患者原有的免疫抑制狀態(tài)?？赡芤?yàn)榇蟛糠指伟┗颊咭训搅酥型砥?，腫瘤體積較大，介入栓塞范圍較大，對(duì)肝組織產(chǎn)生了的一定損害，且短期內(nèi)應(yīng)用大劑量化療藥物進(jìn)一步加重了原有的免疫抑制狀態(tài)。TACE治療2、3、4周后，在未給予免疫增強(qiáng)劑情況下，患者免疫功能恢復(fù)明顯好于治療1周后，較治療前也有明顯改善。這可能是由于TACE直接殺傷腫瘤細(xì)胞，減輕甚至清除腫瘤負(fù)荷，致使腫瘤細(xì)胞分泌的免疫抑制因子減少，使得腫瘤導(dǎo)致的免疫抑制得到緩解，促進(jìn)了機(jī)體免疫功能的恢復(fù)。并為是否可再次行TACE治療提供了的證據(jù)。

CD4CD25Treg細(xì)胞是近年發(fā)現(xiàn)的非常最重要的免疫負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞［6］。該類(lèi)細(xì)胞高水平表達(dá)CD25分子，在免疫應(yīng)答的負(fù)調(diào)節(jié)及維持自身免疫耐受中發(fā)揮著重要作用，可通過(guò)抑制CD4CD25、CD8CD25T細(xì)胞、NK細(xì)胞的增殖及IL-2的分泌功能，抑制CD8記憶性T細(xì)胞的反應(yīng)力，降低抗原提呈效率［7-8］。另有研究提示，肝癌患者CD4+CD25+T細(xì)胞比例明顯高于正常人群，而淋巴細(xì)胞總數(shù)偏低，同樣提示肝癌患者存在不同程度的免疫抑制［9-10］。本組40例肝癌患者外周血中CD4CD25/CD4相對(duì)高于健康組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，未能取得與其他研究相似的結(jié)果，樣本數(shù)量偏少也許是造成這一差別的原因。術(shù)后1、2周CD4CD25/CD4較前升高，呈現(xiàn)出明顯的免疫抑制狀態(tài)，術(shù)后4周免疫功能逐漸恢復(fù)，較治療前顯著降低。可見(jiàn)TACE治療對(duì)機(jī)體免疫功能呈現(xiàn)先抑后揚(yáng)的態(tài)勢(shì)，提醒我們?cè)跒楦伟┗颊咝蠺ACE治療期間，動(dòng)態(tài)檢測(cè)細(xì)胞免疫功能很有必要，有利于我們抓住最好的治療時(shí)機(jī)和TACE治療次數(shù)，最大的保持機(jī)體最佳的免疫狀態(tài)，增加機(jī)體耐受性，提高療效。

［1］Mizukoshi E，Nakamoto Y，Arai K，et al.Comparative analysis of various tumor-associated antigen-specific t-cell responses in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Hepatology，2011，53: 1206-1216.

［2］Fu JL，Xu DP，Liu ZW，et al.Increased regulatory T cells correlate with CD8 T-cell impairment and poor survival in hepatocellular carcinoma patients［J］.Gastroenterology，2007，132: 2328-2339.

［3］O'Beirne JP，Harrison PM.The role of the immune system in the control of hepatocellularcarcinoma［J］.Eur J Gastroenterol Hepatol.2004，16:1257-1260.

［4］王志利，張躍偉，徐丹鳳.射頻消融治療肝癌后機(jī)體免疫功能變化的研究進(jìn)展［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18：24-25.

［5］Cho Y，Miyamoto M，Kato K，et al.CD4+and CD8+T cells cooperate to improve prognosis of patients with esophageal squamous cell carcinoma［J］.Cancer Res，2003，63:1555-1559.

［6］Chen X，Du Y，Huang ZM.CD4+CD25+Treg derived from hepatocellularcarcinomamiceinhibitstumorimmunity［J］. Immunol Lett，2012，148:83-89.

［7］Almeida AR，Ciernik IF，Sallusto F，et al.CD4+CD25+Treg regulate the contribution of CD8+T-cell subsets in repopulation of the lymphopenic environment［J］.Eur J Immunol，2010，40: 3478-3488.

［8］Mcnally A，Hill GR，Sparwasser T，et al.CD4+CD25+regulatory T cells control CD8+T-cell effector differentiation by modulating IL-2 homeostasis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108:7529-7534.

［9］陳中，倪家連，劉魯岳，等.肝癌微環(huán)境中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與T細(xì)胞免疫的關(guān)系［J］.臨床肝膽病雜志，2008：38-40.

［10］Zhao F，Korangy F，Greten TF.Cellular immune suppressor mechanisms in patients with hepatocellular carcinoma［J］.Dig Dis，2012，30:477-482.

The influence of TACE on T lymphocyte subsets in patients with primary liver cancer

WANG Li-jing，MIAO Tong-guo，NING Geng-xian，ZHANG Jian-ji，CAI Li-fen.Intensive Care Unit，F(xiàn)ifth Hospital of Shijiazhuang，Shijiazhuang，Hebei Province 050000，China

MIAO Tong-guo，E-mail：oncology@139.com

R735.7

B

1008-794X（2015）-02-0165-04

2014-08-12）

（本文編輯：俞瑞綱）

10.3969/j.issn.1008-794X.2015.02.019

050000河北石家莊市第五醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科（王立靜、張建集、蔡麗芬），介入科（苗同國(guó)），肝病科（寧更獻(xiàn)）

苗同國(guó)E-mail：oncology@139.com