新型免疫分子TIPE2對(duì)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移與侵襲的影響探析

蔣玲玲

【摘要】目的：對(duì)新型免疫分子TIPE2在肝癌患者癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲中的影響情況進(jìn)行調(diào)查。方法：選取我院2012年9月-2014年9月間31例肝癌患者，同時(shí)選擇同期來院體檢的35例健康人員，采用實(shí)時(shí)熒光定量發(fā)對(duì)兩組人員外周血細(xì)胞中TIPE2表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并將結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：正常人群的外周單核細(xì)胞水平明顯高于肝癌患者，兩組比較有明顯差異，P<0.05。肝癌患者平均細(xì)胞距離為（795±21.6）μm；健康人群平均細(xì)胞距離為（474±32.4）μm，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。肝癌患者的細(xì)胞遷移數(shù)目平均為（493±11.2）個(gè)；健康人群的細(xì)胞遷移數(shù)目平均為（1492±46.3）個(gè)，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。結(jié)論：TIPE2可能參與到肝癌疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中，對(duì)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲造成影響。

【關(guān)鍵詞】新型免疫分子TIPE2；肝癌；細(xì)胞轉(zhuǎn)移

【中圖分類號(hào)】R735.7 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2015）02-0626-01

近年來，我國肝癌的發(fā)病率越來越高，嚴(yán)重影響著人們的生活和健康。有研究表示TIPE2是一種新型免疫分子，其在肝癌標(biāo)本中的表達(dá)水平非常低，進(jìn)而認(rèn)為其有可能參與了肝癌的發(fā)病過程。為進(jìn)一步了解TIPE2與肝癌細(xì)胞的關(guān)系，我院在2012年9月-2014年9月間對(duì)新型免疫分子TIPE2在肝癌患者癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲中的影響情況進(jìn)行調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1.資料與方法

1.1一般資料

選取我院2012年9月-2014年9月間31例肝癌患者，患者平均年齡為（52.1±5.6）歲，男性14例，女性17例；同時(shí)選擇同期來院體檢的35例健康人員，所有人員平均年齡為（50.6±6.2）歲，男性15例，女性16例。

1.2一般方法

1.2.1標(biāo)本采集：出去患者靜脈血，所有血液均進(jìn)行抗凝處理。將血液加入生理鹽水中稀釋，而后緩緩滴入淋巴細(xì)胞分離液上層，在3000r/min條件下離心振蕩，時(shí)間為15min，提取白膜層，收集標(biāo)本中的外周單核細(xì)胞。

1.2.2實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)驗(yàn)：提取外周單核細(xì)胞后采用TRIzol 法提取標(biāo)本總RNA，根據(jù)試劑盒說明將其轉(zhuǎn)錄成CDNA待用。

1.2.3基因轉(zhuǎn)染、陽性細(xì)胞克隆篩選：采用Lipo2000脂質(zhì)體對(duì)pcDNA3.1-TIPE2表達(dá)載體和空白載體細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，所有操作流程均按照試劑盒說明進(jìn)行。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞放置48h，而后進(jìn)行培養(yǎng)基抗性篩選實(shí)驗(yàn)。

1.2.4劃痕試驗(yàn)：BEL7402-TIPE2 細(xì)胞和BEL7402-pcDNA3.1 對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)過夜，每組3復(fù)孔，待所有細(xì)胞貼壁后將口徑為10μl的槍頭放置在孔板中間，至上而下做劃痕，劃痕寬度為10μl，而后采用PBS清洗漂浮細(xì)胞，共清洗三次。清洗后更換無血清的培養(yǎng)基，而后進(jìn)行觀察。測(cè)量劃痕前后距離并分析細(xì)胞遷移距離。

1.2.5 Tran swell實(shí)驗(yàn)：將BEL7402-TIPE2和對(duì)照組細(xì)胞分別接種于24孔板上，孔板的孔徑為8μm，每組3復(fù)孔，孔板下層放置含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)時(shí)間為24h。培養(yǎng)后用棉簽擦除未遷移細(xì)胞，采用甲醇固定10min后清洗，而后采用1%結(jié)晶紫染色，時(shí)間為20min，干燥后放置顯微鏡下觀察。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

文中數(shù)據(jù)采用spss18.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用%表示，資料采用卡方檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用 X±s表示，資料采用t值檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1兩組人員外周血單核細(xì)胞水平：圖a為正常人群外周單核細(xì)胞水平，圖b為肝癌患者外周單核細(xì)胞水平，正常人群的外周單核細(xì)胞水平明顯高于肝癌患者，兩組比較有明顯差異，P<0.05（詳見下圖）。

2.2劃痕試驗(yàn)：肝癌患者平均細(xì)胞距離為（795±21.6）μm；健康人群平均細(xì)胞距離為（474±32.4）μm，兩組比較存在明顯差異，P<0.05（詳見下表1）。

3.討論

TIPE2 與 TNFAIP8L （TIPE）、TNFAIP8L1（TIPE1）和 TNFAIP8L3（TIPE3）均是TNFAIP8家族成員。現(xiàn)階段TIPE2蛋白的研究主要在小鼠中，很少在人體標(biāo)本中進(jìn)行研究。TIPE2蛋白主要在免疫器官和免疫細(xì)胞中表達(dá)，研究表示，TIPE2在Toll樣受體和T細(xì)胞受體信號(hào)活化中呈高反應(yīng)性表達(dá)。在脂多糖異常導(dǎo)致的膿毒血癥小鼠中，TIPE2 敲基因小鼠組存在明顯的休克反應(yīng)，在研究中發(fā)現(xiàn)TIPE2 敲基因水平降低會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞活化，進(jìn)而導(dǎo)致TNF-α、IL-6、IL-12 和 IFN-γ分泌水平提升。在研究中發(fā)現(xiàn)TIPE2 敲基因能夠?qū)逃忻庖呒?xì)胞起到負(fù)向調(diào)控的作用，其不僅能夠激活cacpase-8細(xì)胞，同時(shí)能夠?qū)罨鞍?AP-1、核因子 NF-κB進(jìn)行抑制，加速細(xì)胞凋亡。在小鼠實(shí)驗(yàn)中，TIPE2 敲基因能夠使小鼠的梗塞面積增加。上述種種結(jié)果均表明TIPE2 敲基因能夠?qū)Φ鞍灼鸬截?fù)調(diào)控的作用。而人體的TIPE2 基因主要位于染色體中，其是一種由氨基酸構(gòu)成的物質(zhì)，結(jié)構(gòu)與死亡受體非常相似。有研究表示TIPE2 在很多慢性炎癥中發(fā)揮著非常重要的作用，且在一定程度上推進(jìn)了疾病的發(fā)展進(jìn)程。

近年來，人們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)TIPE1在腫瘤患者中的表達(dá)率存在異常，進(jìn)而認(rèn)為其可能參與了腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展。TIPE已被證實(shí)為一種新的癌基因，在乳腺癌和肺癌疾病的發(fā)展中有著非常重要的作用。雖然TIPE1與TIPE2在結(jié)構(gòu)上非常相似，但作用卻存在不盡相同，TIPE2有可能具有抑制腫瘤發(fā)展的作用，在研究中發(fā)現(xiàn)TIPE2的水平明顯異常，因此考慮其可能參與了肝癌的疾病進(jìn)程。TIPE2能夠與Ras進(jìn)行結(jié)合，進(jìn)而對(duì)癌細(xì)胞進(jìn)行抑制。在我院的調(diào)查結(jié)果中顯示：肝癌患者平均細(xì)胞距離為（795±21.6）μm；健康人群平均細(xì)胞距離為（474±32.4）μm，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。肝癌患者的細(xì)胞遷移數(shù)目平均為（493±11.2）個(gè)；健康人群的細(xì)胞遷移數(shù)目平均為（1492±46.3）個(gè)，兩組比較存在明顯差異，P<0.05。對(duì)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)后可以認(rèn)為，肝癌患者細(xì)胞遷移能力明顯下降，侵襲能力明顯下降，因此可以認(rèn)為TIPE2參與了肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲過程。

總的來說，TIPE2可能參與了肝癌疾病的發(fā)生和發(fā)展，因此還需要進(jìn)行更為深入的研究，了解 TIPE2 與肝細(xì)胞肝癌發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制。

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