ELISA法和膠體金免疫層析法檢測(cè)乙肝表面抗原結(jié)果分析

李小云

【摘要】目的：分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），對(duì)比結(jié)果，探討兩種方法檢測(cè)乙肝表面抗原的應(yīng)用價(jià)值。方法：分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法檢測(cè)768份18～65歲人群血清標(biāo)本，對(duì)比乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：膠體金免疫層析法檢測(cè)出HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本42份，陽(yáng)性率5.47%。ELISA法檢測(cè)出HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本46份，陽(yáng)性率為5.98%，兩種方法陽(yáng)性檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。兩種方法檢測(cè)的符合率為97.39%。膠體金免疫層析法的靈敏度為69.57%，特異度為98.61%。結(jié)論：膠體金免疫層析法操作簡(jiǎn)便、快速，檢測(cè)的特異度較高，但其靈敏度有限，有待提高。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法；膠體金免疫層析法；乙肝表面抗原

【中圖分類號(hào)】R722.12 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2015）03-0225-01

乙型病毒性肝炎，簡(jiǎn)稱乙肝，是一種由乙型肝炎病毒（HBV）感染機(jī)體后所引起的疾病，是當(dāng)前嚴(yán)重危害人類身體健康的傳染病。乙型病毒肝炎表面抗原（HBsAg）陽(yáng)性是感染乙肝病毒的重要指標(biāo)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法是目前我國(guó)檢測(cè)乙肝HBsAg最為普及的方法，應(yīng)用時(shí)間較早，而膠體金免疫層析法是近年來(lái)采用的免疫學(xué)檢測(cè)方法。本組研究資料采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法和膠體金免疫層析（GICA）法對(duì)768份18～65歲人群血清進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，并對(duì)比檢測(cè)結(jié)果。現(xiàn)報(bào)告如下：

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源

抽取18～65歲人群血清768份，采集無(wú)溶血、無(wú)脂濁的靜脈血標(biāo)本3～5ml，室溫靜置30min后，4000r∕min離心5min，充分分離血清待檢。

1.2儀器與試劑

乙肝五項(xiàng)膠體金快速檢測(cè)板由上海科華生物科技有限公司提供，HBsAg試紙條由藍(lán)十字生物藥業(yè)有限公司提供；ELISA檢測(cè)試劑由珠海麗珠生物科技有限公司公司提供；TDL-42A低速離心機(jī)；Unto-FLiudo全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)；Unto-2010酶標(biāo)儀。

1.3方法

1.3.1膠體金免疫層析法 將GICA試紙條浸入待測(cè)標(biāo)本，標(biāo)本不可浸沒標(biāo)志線，浸入時(shí)間約為10分鐘，根據(jù)對(duì)照線位置出現(xiàn)的紅線條數(shù)判定結(jié)果。如對(duì)照線與檢測(cè)線間位置出現(xiàn)1條紅線為陰性，對(duì)照線與檢測(cè)線間位置出現(xiàn)2條紅線為陽(yáng)性。

1.3.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法 于相應(yīng)孔中用加樣器分別加入質(zhì)控品、待檢標(biāo)本及陽(yáng)性、陰性對(duì)照血清，并做好標(biāo)記，然后往每個(gè)孔中加入酶標(biāo)抗體，混勻，置于37°C條件下1h，嚴(yán)格按照說明書經(jīng)洗版、添加底物，并在37°C條件下避光15min，加終止液停止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值，并計(jì)算S∕CO值。若S∕CO≥1.0則表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，若S∕CO<1.0則表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，行χ2 檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

兩組方法檢測(cè)HBsAg的陽(yáng)性率比較：共檢測(cè)768份血清標(biāo)本， 兩種方法檢測(cè)HBsAg均陰性的712份，均陽(yáng)性的32份，兩種方法檢測(cè)的符合率為97.39%。膠體金免疫層析法檢測(cè)出HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本42份，HBsAg陽(yáng)性率5.47%（42∕768）。ELISA 法檢測(cè)出HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本46份，HBsAg陽(yáng)性率為5.98%（46∕768），兩種方法陽(yáng)性檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。根據(jù)特異度、靈敏度計(jì)算公式，靈敏度= A / （ A + C ）×100%；特異度= D/ （ B + D）×100%。A-真陽(yáng)性數(shù)，B-假陽(yáng)性數(shù)，C-假陰性數(shù)，D-真陰性數(shù)。得出：膠體金免疫層析法的靈敏度為69.57%，特異度為98.61%。

ELISA法和膠體金免疫層析法檢測(cè)結(jié)果

膠體金免疫層析法 ELISA法 合計(jì) 陽(yáng)性+ 陰性﹣ 陽(yáng)性+ 32 10 42陰性﹣ 14 712 726合計(jì) 46 722 7683討論

乙肝病毒性肝炎是嚴(yán)重危害人體健康的一種病毒性肝炎，由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起，血液、性接觸、日常生活接觸和母-嬰垂直傳播是HBV傳播的主要方式。1965年Biumberg等首次發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒（HBV）的表面抗原（HBsAg），其現(xiàn)已成為HBV感染的重要標(biāo)志，可作為乙肝病毒性肝炎的重要診斷依據(jù)。目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)乙肝HBsAg的方法有很多，如化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法（FQ-PCR）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、膠體金免疫層析（GICA）法等。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法是目前我國(guó)檢測(cè)乙肝HBsAg最為普及的方法，其主要是在液相中經(jīng)擴(kuò)散作用，逐漸與固相表面的抗體結(jié)合，同時(shí)標(biāo)記抗體也需要此過程形成抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物，此外還需要洗滌過程和顯色反應(yīng)[1]。其靈敏性和特異性較高，結(jié)果可靠，但其操作程序較繁瑣復(fù)雜，檢測(cè)所需要的時(shí)間較長(zhǎng)。膠體金免疫層析法是近年來(lái)出現(xiàn)的一種免疫學(xué)標(biāo)記物檢測(cè)新技術(shù)，這種檢測(cè)技術(shù)不需要儀器，高濃度的抗體集中固定在纖維素的微孔中，待測(cè)抗原流經(jīng)微孔與固定的抗原接觸很快完成反應(yīng)，檢測(cè)所需要的時(shí)間較短，操作簡(jiǎn)單便捷，有較高的特異度，尤其適用于基層醫(yī)療衛(wèi)生單位。但由于反應(yīng)時(shí)間短，會(huì)造成弱陽(yáng)性的漏檢。本組研究資料分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法和膠體金免疫層析法檢測(cè)乙肝表面抗原，兩種方法檢測(cè)出的HBsAg陽(yáng)性率分別為5.98%、5.47%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。膠體金免疫層析法的靈敏度和特異度分別為69.57%、98.61%。綜上所述，膠體金免疫層析法檢測(cè)乙肝表面抗原操作簡(jiǎn)便快捷，檢測(cè)的特異度高，但其靈敏度還有待提高。

參考文獻(xiàn)

[1]高麗，付鴻，李慧，等.膠體金試紙法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原的比較[J].中國(guó)計(jì)劃免疫.2007，13（1）：51-53