格列吡嗪口崩片的人體生物等效性試驗

楊潔

【摘 要】格列吡嗪為第二代磺酰脲類抗糖尿病藥，可使空腹及餐后血糖降低。本文對格列吡嗪口崩片的人體生物等效性進行研究。方法：選擇40名健康志愿者，隨機雙交叉單劑量口服10mg，采用高效液相色譜法測得不同時間血液中格列吡嗪的含量。實驗結(jié)果表明格列吡嗪口崩片的達峰時間較普通片劑明顯提前。

【關(guān)鍵詞】格列吡嗪；人體；生物等效性

格列吡嗪為第二代磺酰脲類抗糖尿病藥，可使空腹及餐后血糖降低。格列吡嗪主要作用為刺激胰島B 細(xì)胞分泌胰島素，從而使K+通道關(guān)閉，引起膜電位改變，Ca2+通道開啟，胞液內(nèi)Ca2+升高，促使胰島素分泌[1-2]。格列吡嗪主要用于單用飲食控制治療未能達到良好效果的輕、中度非胰島素依賴型病人，治療有效率約87%。生物等效性是指藥學(xué)等效制劑或可替換藥物在相同試驗條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本文對格列吡嗪口崩片的人體生物等效性進行研究。

1.儀器與試藥

Vertex Sti P5000高效液相色譜儀（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；CO-1000型色譜柱溫箱（上海子期實驗設(shè)備有限公司）；HQ-50高端試劑級超純水機（鄭州華新電氣公司）；SCQ-K001空氣超聲波清洗器（上海聲彥超聲儀器有限公司）；FA1204B電子分析天平（上海精科天美貿(mào)易有限公司）；320XT電子分析天平（上海精科天美貿(mào)易有限公司）；RE-5298旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；TG16-WS臺式高速離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）；Chemvak無油真空泵（北京桑翌實驗儀器研究所）；TU-1810紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。氫氧化鈉（蘇州市元碩精細(xì)化學(xué)品有限公司）、庚烷磺酸鈉（蘇州市元碩精細(xì)化學(xué)品有限公司）、磷酸二氫鈉（蘇州逸祥化工科技有限公司）、三乙胺（上海德諾化工有限公司）、乙腈（濟南福爾化工科技有限公司）、甲醇（河北東光恒達化工有限責(zé)任公司）、甲酸（河北東光恒達化工有限責(zé)任公司）、冰醋酸（濟南福爾化工科技有限公司）、乙醚（常州市云陽化工有限公司）。

2.含量測定

2.1色譜條件

色譜柱為YMCCl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）為流動相；檢測波長為225nm；流速1.0mL·min-1；柱溫40℃。

2.2受試者選擇

本研究根據(jù)受試者入選、排除標(biāo)準(zhǔn)從89名志愿者中篩選出40名受試者參加本研究。所有受試者均完成了本研究的全部過程，無中途退出者。采用開放、隨機分組、二組服用格列吡嗪口崩片和格列吡嗪普通片單劑量10mg片劑的交叉試驗設(shè)計進行本項生物等效性研究。

2.3給藥方法與樣品采集

采用兩制劑雙周期交叉的試驗設(shè)計， 受試者按隨機原則分成 2組，分別給藥。

2.4對照品溶液的制備

取格列吡嗪對照品5mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動相適量振搖使溶解，并稀釋至刻度。搖勻，配制成50μg/ml的內(nèi)標(biāo)貯備液。精密量取5mL內(nèi)標(biāo)溶液，置于50毫升容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，配制成5μg/ml的對照品溶液。

2.5供試品溶液的制備

精確吸取待檢測血漿，加入0.01mol/l鹽酸溶液0.1毫升，渦旋混勻1分鐘，再加入乙醚10ml，高速離心10分鐘，40℃水浴空氣吹干，加入流動相溶解，渦旋1分鐘，使用0.45微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取空白血漿分別配成質(zhì)量濃度相當(dāng)于30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml、150μg/ml、180μg/ml、210μg/ml的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。試驗表明，格列吡嗪對照品在30～210ug·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7回收率試驗

采用加樣回收試驗，取供試品血漿，精密添加一定量的格列吡嗪對照品，加入0.01mol/l鹽酸溶液0.1毫升，渦旋混勻1分鐘，再加入乙醚10ml，高速離心10分鐘，40℃水浴空氣吹干，加入流動相溶解，渦旋1分鐘，使用0.45微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，按測定方法，計算回收率。6次測定的平均回收率為95.3%，RSD為1.62%。

2.8樣品穩(wěn)定性試驗

取供試品血漿，按2.5項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置4℃下放置，分別于第0、2、4、6小時，精密吸取供試品溶液10μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定格列吡嗪的含量，RSD=0.93%。結(jié)果表明供試品6小時內(nèi)穩(wěn)定。

3.結(jié)果

格列吡嗪口崩片的達峰時間較普通片劑明顯提前。生物利用度參數(shù)40名健康志愿者隨機雙交叉單劑量口服10mg格列吡嗪口崩片和格列吡嗪片后，體相對生物利用度為F=（103.2±6.3）%以試驗制劑和參比制劑的AuC24計算。試驗制劑AUC的90%置信區(qū)間落在標(biāo)準(zhǔn)參比制劑的96.66%～108.67%內(nèi)，ρmax在82.56%～116.56%，可判兩制劑生物等效。

4.討論

HPLC方法是常用的血漿格列吡嗪檢測方法[3-11]。在較廣泛的流動分別考察甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2），甲醇-緩沖液（ 磷酸二氫鈉6.0g，加水溶解并稀釋至1000ml，加三乙胺1ml，用濃氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 值至7.0）（30∶70），2%庚烷磺酸鈉溶液-甲醇-乙腈-三乙胺（25：30：30：0.1），乙腈一水一三乙胺（40：65：0.1）用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0不同比例的流動相，結(jié)果以甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-水-甲酸（30：35：35∶0.2）為流動相。 [科]

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