益生菌對潰瘍性結腸炎小鼠TNF—α表達的影響

耶緒龍　宦欣　于慶功

【摘要】 目的 探討益生菌對潰瘍性結腸炎（UC）小鼠結腸黏膜腫瘤壞死因子-α表達的影響及可能作用機制。方法 隨機將20只雄性BALB/C小鼠分為實驗組與對照組各10只。兩組小鼠均給予100mg/Kg的三硝基苯磺酸乙醇（TNBS）溶液灌腸誘導潰瘍性結腸炎。隨后分別給予空灌胃針，對照組行生理鹽水灌胃0.3ml/次，2 次/日。實驗組行益生菌菌液0.6×106CFU/ml灌胃，觀察兩組小鼠的體重、糞便性狀及隱血。1周后行結腸組織病理學評分；ELISA方法檢測TNF-α表達。結果 TNBS灌腸后2組小鼠均不同程度出現(xiàn)腹瀉、粘液便、血便等癥狀。實驗組疾病活動指數(shù)為（3.02±0.72）；組織學損傷評分為（2.87±2.01）；結腸組織TNF-α的表達情況為（18.57±3.63）pg/ml；低于對照組（4.35±0.36）；（4.03±1.28）；（22.25±2.06）pg/ml（P<0.05）。結論 益生菌對急性UC有治療作用，其機制可能與益生菌能抑制TNF-α的表達有關。

【關鍵詞】潰瘍性結腸炎；益生菌；腫瘤壞死因子-α

【中圖分類號】R574.62 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）02-0090-02

潰瘍性結腸炎（Ulcerative Colitis，UC）是一種慢性非特異性炎癥，病變呈彌漫性，其主要在黏膜和黏膜下層累計。近年UC的發(fā)病率逐年上升。有統(tǒng)計其發(fā)病率在西方國家可高達10～15/10萬，患病率已超過200/10萬[1]。有研究表明腸道內菌群的改變在UC發(fā)病中起重要作用。益生菌可能在調節(jié)腸道黏膜免疫和恢復腸上皮屏障功能上起到重要作用。

1、材料與方法

1.1一般材料： 健康20只雄性BALB/C小鼠，6-8 周齡，體重18.0±2.0g。飼養(yǎng)小鼠1周左右后，隨機分為實驗組與對照組各5只。

1.2方法：2組小鼠按照100mg/Kg體重的TNBS灌腸誘導結腸炎造模方法[2]：灌腸后分別給予空灌胃針。對照組小鼠進行生理鹽水灌胃0.3ml/次，2 次/日。實驗組給予益生菌菌液0.6×106CFU/ml灌胃。觀察2組小鼠體質量改變和糞便性狀，采用糞便隱血試劑盒檢測糞便隱血，評估小鼠疾病活動指數(shù)=（體質量下降分數(shù)+糞便性狀分數(shù)+便血分數(shù)）/3[3]。灌腸1周后處死小鼠，采用HE染色后按黏膜潰瘍程度、上皮細胞增生程度、炎性細胞浸潤程度、隱窩萎縮和壞死程度每項（0-2分）進行組織學損傷評分。距肛門4cm處取0.5cm長結腸組織2塊，低溫PBS溶液沖洗，組織勻漿并離心，取上清液用ELISA法檢測結腸組織TNF-α表達。

1.3 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)結果以均數(shù)±標準差表示，計量資料進行方差齊性檢驗后，各組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2、結果

2.1 2組小鼠TNBS灌腸后均出現(xiàn)體質量降低、排黏液稀便數(shù)量增多，糞便隱血陽性等。實驗組疾病活動指數(shù)（3.02±0.72）低于對照組疾病活動指數(shù)（4.35±0.36）（P<0.05）。

2.2 結腸組織病理學結果顯示2組小鼠結腸上皮有不同程度損傷，細胞壞死，腺體破壞，黏膜下均可見炎性細胞浸潤。實驗組組織學評分：（2.87±2.01）明顯低于對照組（4.03±1.28）（P<0.05）。

2.3 通過ELISA方法檢測小鼠結腸組織中TNF-α的濃度。結果顯示實驗組為（18.57±3.63）pg/ml明顯低于對照組（22.25±2.06）pg/ml（P<0.05）。

3、討論

益生菌在腸道內黏膜的能量代謝、組織再生修復和腸道內免疫平衡過程中起重要作用， 腸道內腸黏膜所需能量的約60%以上來源于益生菌的氧化與吸收。有研究表明， 益生菌能通過改善UC腸黏膜的通透性使其恢復正常，同時抑制NF-κB的表達。Lührs等[4]證實， 用一種叫酪酸鹽的益生菌灌腸治療UC患者， 其臨床癥狀可改善， 腸黏膜中NF-κB的表達也下調。有實驗證實：腸道內益生菌可能是直接阻斷TNF-α的過度表達， 進而消除腸道內炎癥，并且可以促進腸上皮組織的再生和修復，可對潰瘍性結腸炎達到治療效果。

本實驗結果顯示：用益生菌治療TNBS誘導的UC小鼠時，實驗組結腸黏膜中TNF-α的表達低于對照組?？梢娨嫔芡ㄟ^某種機制有效地抑制TNF-α的表達，進而減輕腸道的炎癥反應，緩解UC的臨床癥狀，起到治療UC的作用。

參考文獻

[1] Jiang XL， CUi HF. An analysis of 10218 ulcerative colitis cases in China.World J Gastroenterol. 2002， 8（1）：158-161.

[2]Mane J， Loren V， Pedrosa E， et al. Lactobacillus fermentum CECT 5716 prevents and reverts intestinal damage on TNBS-induced colitis in mice.Inflamm Bowel Dis， 2009，15： 1155-1163.

[3]Peran L， Camuesco D， Comalada M， et al. Preventative effects of a probiotic， Lactobacillus salivarius ssp. salivarius， in the TNBS model of rat colitis.World J Gastroenterol， 2005，11：5185-5192.

[4] Lührs H，Gerke T，Müller JG，et al.Butyrate inhibits NF-kappaB activation in lamina propriamacrophages of patients with ulcerative colitis. Scand J Gastroenterol， 2002，37：458-466.