皿治林和雷公藤對慢性斑塊型銀屑病患者體外抗白細胞趨化活性的觀察

王麗梅 苗國英 王保梅

【摘要】目的體外定量研究咪唑斯汀、雷公藤治療慢性斑塊型銀屑病抗白細胞趨化活性。方法采用瓊脂糖平板法觀察藥物對甲酰三肽（fMLP）誘引的WBC移動距離的影響。結(jié)果咪唑斯汀、雷公藤、二者聯(lián)合應用對斑塊型銀屑病患者WBC趨化性有不同程度的抑制作用，抑制WBC趨化活性的IC50值分別為6.2×10-4、0.58、0.24。結(jié)論：皿治林和雷公藤可作為臨床上治療銀屑病的輔助藥物。

【關鍵詞】白細胞趨化；皿治林；雷公藤；銀屑病

【中圖分類號】R751.05【文獻標識碼】B【文章編號】1005-0019（2015）01-0052-01

白細胞在炎癥介質(zhì)（趨化因子）引誘下向病灶部位趨化是許多炎癥性皮膚病共同的臨床病理表現(xiàn)，因此藥物的抗趨化活性是其抗炎作用中的一個重要環(huán)節(jié)。臨床上咪唑斯汀對Ⅰ型及Ⅳ型變態(tài)反應作用及作用機理進行了大量的研究，而且對變態(tài)反應性疾病進行了科學的臨床觀察，咪唑斯汀具有獨特的抗組胺和抗過敏反應炎癥介質(zhì)的雙重作用。體內(nèi)和體外藥理學試驗均表明咪唑斯汀是一種強效的、高選擇性的組胺H1受體拮抗劑。在利用過敏反應動物模型進行的試驗中，咪唑斯汀還可抑制活化的肥大細胞釋放組胺以及抑制嗜中性粒細胞等炎性細胞的趨化作用，本研究選擇皿治林、雷公藤及兩藥合用在體外定量研究它們是否具有直接的抗白細胞趨化活性，從而應用于臨床銀屑病等炎癥性皮膚病的輔助治療。

1材料和方法

1.1細胞人外周血白細胞（WBC）取自臨床醫(yī)學院皮膚科門診就診患者，并且經(jīng)臨床和組織病理確診為慢性斑塊型銀屑病患者的周圍血，由本實驗室用6%聚蔗糖分離制備成6×107/ml懸液，備用。

1.2培養(yǎng)基及試劑RPMI1640培養(yǎng)基（GIBCO/BRL）；特級新生牛血清（杭州四季青生物工程研究）；聚蔗糖（分子量29.8萬，SIGMA）；DMSO（SIG2MA）；甲酰三肽（fMLP，SIGMA）；瓊脂糖（PROMEGA）。藥物皿治林由西安楊森制藥有限公司提供雷公藤（天津制藥廠）和皿治林+雷公藤分別按2：1由本實驗室在試驗時臨時配制。以上各受試藥用培養(yǎng)液分別配制成系列濃度，備用。

1.3方法采用瓊脂糖平板法[1]，即以0.8%瓊脂糖2RPMI1640培養(yǎng)基混合液鋪板、固化、打孔，按設定孔位加入相同濃度的受試藥液、WBC和fMLP（終濃度為10nmol/L）。試驗設趨化劑對照、無藥對照和空白對照。37℃5%CO2中培養(yǎng)5h，4℃干燥，甲醇固定，Giemsa染色，顯微鏡下用測微器測量WBC移動距離。上述實驗平行重復6個樣本。

1.4統(tǒng)計學處理以給藥組與無藥對照組實際趨化距離平均值之比求出趨化百分率，以趨化百分率對藥物濃度求直線回歸方程、相關系數(shù)作統(tǒng)計學檢驗并計算IC50值。

2結(jié)果

受試藥中，皿治林、雷公藤以及皿治林+雷公藤對fMLP誘引的人WBC趨化性均有不同程度的抑制作用，且量-效關系顯著（如下表）。

3討論

前列腺素是花生四烯酸（AA）經(jīng)環(huán)氧合酶的作用而變?yōu)轭惣に匚镔|(zhì)，在活動處釋放，它可以刺激表皮DNA合成，擴張皮膚血管，參與炎癥反應[2]。AA和他的產(chǎn)物12-羥化廿碳四烯酸，在銀屑病的皮損區(qū)比非皮損區(qū)增加50倍，而前列腺素E2、前列腺素F2僅僅適度的增加，這表明在銀屑病斑塊中，經(jīng)有AA合成的前列腺素，其內(nèi)源性抑制劑是存在的，這些增加的AA可能接著轉(zhuǎn)向脂氧化酶途徑，從而產(chǎn)生白三烯（LTB4），在表淺的銀屑病鱗屑的提取物中，LTB4是已知的最具有活力的趨化因子，AA及其代謝產(chǎn)物、LTB4作為多形核白細胞的趨化因子以延長炎癥反應，可能在銀屑病發(fā)病中起重要作用[3]，皿治林對白細胞的這種抑制趨化作用推測可用于對銀屑病的臨床輔助治療，減少炎癥性皮損的形成，結(jié)果顯示，雷公藤抗趨化作用的IC50值為0.58，表明雷公藤抗白細胞趨化的活性可能是其強抗炎活性的機制之一。進一步從理論上證明皿治林和雷公藤可作為臨床上治療銀屑病的輔助藥物。本研究采用的是體外試驗，所得結(jié)果能否完全反映藥物在患者體內(nèi)的抗白細胞趨化作用還有待于進一步研究及臨床觀察。

參考文獻

[1]孫衛(wèi)民.細胞因子研究方法學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社.1999.132～134.

[2]SudoKetal：Inhibitoryeffectsofmizolastineon5-lipoxygenase.JpnpharamacolTher26（Suppl）s711-713，1998

[3]ElewskiBE.Infiximabforthetreatmentofseverepustulearpsoriasis.JAmAcadDermatol，2002，47：796～