T細(xì)胞亞群及炎性因子對(duì)乙型病毒肝炎的診斷價(jià)值及相關(guān)性分析

馬鵬

[摘 要] 目的：探究T細(xì)胞亞群、炎性因子IL-32、IL-6等對(duì)乙型病毒肝炎的診斷及相關(guān)性。方法：隨機(jī)選取我院收治的乙型肝炎患者138例為觀察組，以同期健康體檢人員32例為對(duì)照組，對(duì)所有受試者進(jìn)行T細(xì)胞亞群比例、IL-32和IL-6水平的檢測(cè)，并對(duì)肝功能相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，探究其相關(guān)性。結(jié)果：乙肝患者的CD4+T細(xì)胞比例降低，CD8+T細(xì)胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，各組與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；乙型肝炎患者的IL-32和IL-6水平高于對(duì)照組，且急性乙肝組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組各組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。而HBV DNA（+）組與HBV DNA（-）組在T細(xì)胞亞群比例和IL-32、IL-6水平方面不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。IL-32和IL-6水平與ALT、TB均呈正相關(guān)，與AlB水平呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論：CD4+/CD8+比值及細(xì)胞因子IL-32和IL-6水平的變化直接影響乙型肝炎的發(fā)病，對(duì)乙型肝炎的診斷有一定指導(dǎo)意義；IL-32和IL-6水平與病毒復(fù)制無(wú)關(guān)，僅與機(jī)體免疫異常有關(guān)且與肝臟功能指標(biāo)呈現(xiàn)一定相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] T細(xì)胞亞群；IL-32；IL-6；乙型病毒肝炎

中圖分類號(hào)：R575.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： B 文章編號(hào)：2095-5200（2015）05-034-04

[Abstract] Objective： To investigate T cell subsets， IL-32， IL-6 for the diagnosis and correlation of hepatitis B. Methods： 138 cases of hepatitis B patients in our hospital and 32 cases of healthy volunteers in the same period were randomly selected for the study， the former of which were regarded as the observation group and the latter were control group. T cell sub-population proportion， IL-32 and IL 6-level of all the subjects were observed， as well as the related indicators of liver function to explore the relevance. Results： For the patients with hepatitis B， the proportion of CD4 +T cells reduced ， CD8 +T cell ratio increased， and CD4 + / CD8 + ratio decreased in all groups compared with the control group， the difference of which statistically significant （P <0.05）； IL -32 and IL-6 levels of hepatitis B patients were higher than the control group， and there was a statistically significant difference （P <0.05） among the groups of patients with acute hepatitis， mild， moderate and severe hepatitis B group. The ratio of T cell subsets， IL-32，and IL-6 levels between the HBV HNA （+） group and HBV DNA （-） group were not statistically different （P> 0.05）. IL-32 and IL-6 levels were positively correlated with the level of ALT， TB，and negatively correlated with Alb level. Conclusions： CD4 + / CD8 + ratio and changes in cytokine IL-32 and IL-6 levels directly affect the incidence of hepatitis B， and are significant to the diagnosis of hepatitis B to some degree . IL-32 and IL-6 levels are independent of viral replication，and maybe be only related with immune abnormalities，which show some correlation with liver function indicators.

[Key words] T cell subsets； IL-32； IL-6； hepatitis B

乙型肝炎病毒（HBV）屬于嗜肝雙鏈DNA病毒，HBV并不會(huì)直接損害肝細(xì)胞，肝細(xì)胞損害及肝功能損害主要是由于細(xì)胞免疫在清除病毒過程中發(fā)揮作用而引起的 [1]。HBV引起的細(xì)胞免疫是體內(nèi)一系列復(fù)雜的免疫應(yīng)答過程，主要由T細(xì)胞介導(dǎo)，包括CD4+T和CD8+T細(xì)胞，正常情況下二者相互協(xié)調(diào)，比例維持正常水平，而CD4+/CD8+T細(xì)胞比值降低則是疾病嚴(yán)重和預(yù)后不良重要指標(biāo)之一[2]。T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子具有廣泛生物學(xué)活性，具有影響細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)T細(xì)胞分化及調(diào)節(jié)其亞型比例功能，IL-32能通過多種途徑激活而促進(jìn)炎性介質(zhì)釋放[3]，IL-6通過信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)HBV活性，從而有助于HBV感染建立和發(fā)展[4]?，F(xiàn)以本院收治138例乙型肝炎患者為研究對(duì)象，對(duì)T細(xì)胞亞群、IL-32、IL-6對(duì)乙型病毒肝炎診斷價(jià)值及相關(guān)性分析如下。

1 資料

1.1 一般資料

隨機(jī)選取我院2012年8月至2014年2月收治乙型肝炎患者138例為觀察組，男92例，女46例，年齡19～60歲，平均年齡（42.5±4.7）歲，均為漢族。其中急性乙型肝炎28例，慢性乙型肝炎110例，其中輕度40例，中度36例，重度34例。另外選取同期健康體檢人員32例為對(duì)照組，其中男21例，女11例，年齡20～54歲，平均年齡（37.4±4.2）歲，均為漢族，排除HBV感染和肝功能異常者。急性乙型肝炎患者組和輕度、中度和重度慢性乙型肝炎觀察組患者及對(duì)照組在性別、年齡等方面不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

另根據(jù)乙型肝炎患者外周血HBV病毒DNA是否為陽(yáng)性，將138例乙型肝炎患者分為HBV DNA（+）組和HBV DNA（-）組，HBV DNA（+）組患者共91例，男61例，女30例，HBV DNA（-）組患者共47例，男31例，女16例，兩組患者與對(duì)照組患者在性別、年齡方面不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

1.2 病例標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者診斷均符合《病毒性肝炎防治方案》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）患者未接收過抗病毒和免疫調(diào)節(jié)治療；（3）患者在6個(gè)月內(nèi)未接受保肝治療；（4）同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）排除HAV、HCV、HDV和HEV感染；（2）排除脂肪肝、酒精性肝炎和自身免疫性肝炎等其他類型肝炎；（3）排除惡性腫瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病和其他感染性疾病。

2 方法

2.1 研究方法

以EDTA管抽取觀察組和對(duì)照組受試者空腹外周靜脈血10mL，檢測(cè)項(xiàng)目包括常規(guī)肝功能指標(biāo)：HBV血清標(biāo)志物，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TB）、白蛋白（ALB），HBV DNA和細(xì)胞因子IL-32、IL-6等。

2.2 檢測(cè)方法

采用流式細(xì)胞儀（購(gòu)自美國(guó)BD公司）測(cè)定外周T淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物，采用ELASA法檢測(cè)ALT、TB、ALB和IL-32、IL-6（試劑盒購(gòu)自Groundwork Biotechnology），以酶標(biāo)儀（購(gòu)自BioTek Instruments，Inc）讀取吸光度值，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)采集到數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析，以P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 乙型肝炎組與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

138例乙肝患者CD4+T細(xì)胞比例降低，CD8+T細(xì)胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，乙肝各組與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。急性乙肝組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組患者CD4+T細(xì)胞比例，CD8+T細(xì)胞比例和CD4+/CD8+比值差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。乙型肝炎患者IL-32和IL-6水平高于對(duì)照組，且急性肝炎組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組各組之間IL-32和IL-6水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。具體如表1。

3.2 HBV HNA（+）組與HBV DNA（-）組檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

HBV HNA（+）組與HBV DNA（-）組T細(xì)胞亞群測(cè)定結(jié)果與細(xì)胞因子IL-32、IL-6檢測(cè)結(jié)果如表2。HBV HNA（+）組和HBV DNA（-）組患者CD4+T細(xì)胞比例降低，CD8+T細(xì)胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，且IL-32、IL-6水平均升高，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而HBV HNA（+）組與HBV DNA（-）組在T細(xì)胞亞群比例和IL-32、IL-6水平方面不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

對(duì)血清IL-32和IL-6水平與肝功能各指標(biāo)進(jìn)行直線相關(guān)性分析表明，乙肝患者血清IL-32水平與ALT、TB水平正相關(guān)（r=0.56、r=0.72），與AlB負(fù)相關(guān)（r=-0.43）；血清IL-6水平與ALT、TB水平正相關(guān)（r=.66，r=0.44），與Alb負(fù)相關(guān)（r=-0.41）。

4 討論

人體感染HBV后病情和轉(zhuǎn)歸情況受到宿主和病毒兩方面影響，其中發(fā)揮重要作用是宿主免疫功能[6]。人體免疫功能主要由細(xì)胞免疫和體液免疫來(lái)實(shí)現(xiàn)，細(xì)胞免疫是以T細(xì)胞為主而發(fā)揮功能，因此研究外周血T細(xì)胞亞群及其比例變化能很好反映機(jī)體免疫功能變化[7]。細(xì)胞免疫除了T細(xì)胞亞群比例有關(guān)之外，T細(xì)胞是否能充分活化與細(xì)胞因子參與有關(guān)，因此細(xì)胞因子在免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)中也發(fā)揮重要作用。

外周T細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞，主要為Th細(xì)胞，CD4+T減少不僅使殺傷細(xì)胞激活，同時(shí)導(dǎo)致Th1/Th2細(xì)胞比例失衡，細(xì)胞因子紊亂而使病毒長(zhǎng)期存在[8]。CD8+T細(xì)胞主要包括殺傷性T細(xì)胞（Tc細(xì)胞）和抑制性T細(xì)胞（Ts細(xì)胞），Tc細(xì)胞在HBV清除過程起主要作用，這也是HBV感染后引起肝細(xì)胞損傷主要原因；Ts細(xì)胞靶細(xì)胞為CD4+T細(xì)胞，可起到抑制免疫應(yīng)答作用，因此CD8+T功能障礙將導(dǎo)致機(jī)體持續(xù)被病毒感染[9]。正常情況下，CD4+T和CD8+細(xì)胞保持一定比例，維持機(jī)體免疫功能。感染HBV時(shí)，肝臟發(fā)生炎癥，從而導(dǎo)致單核巨嗜細(xì)胞產(chǎn)生IL-6，IL-6水平增高誘導(dǎo)毒性T細(xì)胞增殖分化，產(chǎn)生肝臟炎癥[10]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-32具有調(diào)節(jié)NK細(xì)胞功能，促進(jìn)炎性介質(zhì)釋放等功能，同時(shí)IL-6可由IL-32誘導(dǎo)產(chǎn)生[11]。

該研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙型肝炎患者CD4+T細(xì)胞比例降低，CD8+T細(xì)胞比例升高，CD4+/CD8+比值降低，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），這可能與外周血Ts細(xì)胞增多有關(guān)，導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞增多，同時(shí)抑制CD4+Th細(xì)胞免疫應(yīng)答，因此乙肝患者不能有效清除HBV。不同程度乙型肝炎患者，HBV DNA（+）與HBV DNA（-）患者之間CD4+/CD8+比值之間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。說明HBV DNA復(fù)制不影響T細(xì)胞亞群比例，對(duì)乙肝患者細(xì)胞免疫功能影響較小，這與滿昌軍等[12]研究結(jié)果一致。

數(shù)據(jù)顯示，乙型肝炎患者IL-32和IL-6水平高于對(duì)照組，且急性肝炎組患者與輕度、中度和重度乙型肝炎組各組之間在IL-32和IL-6水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。由于不同程度乙肝患者免疫功能不同，分泌IL-32和IL-6能力也不同，這正是造成不同程度乙肝患者外周血內(nèi)IL-32和IL-6水平差異較大原因所在。重度乙型肝炎患者免疫功能紊亂，導(dǎo)致IL-32不能正常調(diào)節(jié)NK細(xì)胞功能，也不能誘導(dǎo)單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化，同時(shí)IL-32促進(jìn)其他炎性介質(zhì)釋放[13]；而乙型肝炎患者存在大量單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，引起肝臟炎癥，誘發(fā)單核巨嗜細(xì)胞長(zhǎng)生大量IL-6[14-15]，故IL-32和IL-6水平均升高較多。HBV DNA（+）與HBV DNA（-）患者之間IL-32、IL-6水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明IL-32和IL-6水平與HBV病毒復(fù)制無(wú)關(guān)，也說明HBV并不直接引起感染細(xì)胞病變。

由于HBV對(duì)肝細(xì)胞及肝功能造成損傷，血清中細(xì)胞因子水平與肝功能各項(xiàng)目呈現(xiàn)一定相關(guān)性。IL-32對(duì)IL-6、TNF-ɑ釋放有促進(jìn)作用，介導(dǎo)免疫損傷，因此會(huì)加重肝臟炎癥反應(yīng)，IL-32和IL-6水平與ALT、TB均呈正相關(guān)，與Alb水平呈負(fù)相關(guān)。HBV感染人體后對(duì)肝臟功能造成損傷主要與T細(xì)胞亞群及其細(xì)胞因子引起免疫應(yīng)答有關(guān)。T細(xì)胞亞群CD4+T細(xì)胞比例，CD4+/CD8+比值及細(xì)胞因子IL-32和IL-6水平變化直接影響乙型肝炎發(fā)病，甚至IL-32和IL-6水平影響乙型肝炎發(fā)病程度，對(duì)乙型肝炎診斷有一定指導(dǎo)意義。值得注意是IL-32和IL-6水平與病毒復(fù)制無(wú)關(guān)，僅與機(jī)體免疫異常有關(guān)；且與肝臟功能有關(guān)指標(biāo)呈現(xiàn)一定相關(guān)性。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 王煜，閆躍武，王海燕，等.乙肝病毒大蛋白在慢性乙型肝炎中檢測(cè)臨床意義[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012， 34（10）：1005.

[2] Raziorrouh B，Schraut W，Gerlach T，et al.The immunoregulatory role of CD244 in chronic hepatitis B infection and its inhibitory potential on virus specific CD8+ T-cell function[J].Hepatology，2010，52（6）：1934.

[3] Abu-Mouch S，F(xiàn)ireman Z，Jarchovsky J，et al. Vitamin D supplementation improves sustained virologic response in chronic hepatitis C（genotype 1）-na ve patients[J]. World J Gastroenterol，2011（25）：17-19.

[4] Harada K，Shimoda S，Sato Y，et al. Periductal interleukin- 17 production In association with biliary innate immunity contributes to thepathogenesis of cholangiopathy in primary biliary cirrhosis[J]. Clin Exp Immuno1，2009，157（2）： 261-270.

[5] Kang KY，Kim HO，Kwtk SK，et al. Impact of interleukin-21 in the pathogenesis of primary Sjogren's syndrome： increased serum levels of interleukin-21 and its expression in the labial salivary glands[J]. Arthritis Res Ther，2011，13（5） ： 179.

[6] 謝琳琳，李文玉. 拉米夫定和阿德福韋酯聯(lián)用與恩替卡韋單藥初治慢性乙型肝炎療效對(duì)比 [J].現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2014，20（5）：91-92.

[7] Kitagishi Y，Kobayashi M，Yamshina Y， et al.Elucidating the regulation of T cell subsets（review）[J].Int j Mol Med，2012，30（6）：1255.

[8] Bemark M， Holmqvist J， Abrahamsson J， et al. Translational Mini-Review Series on B cell subsets in disease. Reconstitution after haematopoietic cell transplantation-revelation of B cell developmental pathways and linege phenotypes [J].Clin Exp Immunol， 2012， 167（1）： 15-16.

[9] 朱禮堯，周建，朱農(nóng)，等. HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA病毒載量與ALT水平相關(guān)性探討 [J]. 現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2013，19（2）：45-47.

[10] Rasool ST， Tang H， Wu J， et al. Increased level of IL-32 during human immunodeficiency virus infection suppresses HIV replication[J]. Immunol lett， 2008， 117（2）：161-167.

[11] 王曉輝，楊堯，雷學(xué)忠，等.慢性乙型肝炎患者病情分度與外周血T淋巴細(xì)胞亞群關(guān)系[J].四川醫(yī)藥，2005，26：1087-1088.

[12] 滿昌軍，董香玉.外周血T細(xì)胞亞群、IL-32、IL-6水平在乙型肝炎患者表達(dá)及相關(guān)性分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2014，18（1）：62-64.

[13] 左維澤，許春梅，沈蘭超.乙型肝炎患者血清白細(xì)胞介素-32、白細(xì)胞介素-6水平變化及臨床意義[J].臨床肝膽病雜志，2011，27（4）：408-410.

[14] Xiang WQ， Feng WF， Ke W， et al. Hepatis B virus protein stimulates IL-6 expression in hepatocytes via MyD88-dependent pathway[J].J Hepatol， 2011， 54（1）： 26-27.

[15] EI Husseiny NM，F(xiàn)ahmy HM，Mohamed WA，et al. Relationship between vitamin D and IL-23，IL-17 and macrophage chemoattractant protein-1 as markers of fibrosis in hepatitis C virus Egyptian[J]. World J Hepatol，2012，4（8）：242-247.