旋光法與改進(jìn)苯酚硫酸法測定蘆薈多糖含量比較

苗曉燕，何富強(qiáng)，陳萍

（保定學(xué)院生化系，河北保定071000）

旋光法與改進(jìn)苯酚硫酸法測定蘆薈多糖含量比較

苗曉燕，何富強(qiáng)，陳萍*

（保定學(xué)院生化系，河北保定071000）

分別采用旋光法和苯酚硫酸法測定了蘆薈粗多糖中多糖的含量。結(jié)果表明：旋光法測定的多糖含量與改進(jìn)苯酚硫酸法的測定值基本一致，即0.099 3 mg/mL和0.106 5 mg/mL。說明兩種方法測定多糖均準(zhǔn)確、穩(wěn)定可行。因此旋光法可作為一種更為簡便、操作性更強(qiáng)的測定多糖含量的方法，應(yīng)用于多糖產(chǎn)品的質(zhì)量檢測與監(jiān)控。

蘆薈多糖；硫酸-苯酚法；旋光法

蘆薈屬百合科多年生草本植物，原產(chǎn)于非洲、地中海，熱帶、亞熱帶地區(qū)也有大量分布［1］。鑒于其富含蘆薈多糖［2］、蘆薈素以及多種人體必需的氨基酸、維生素、礦物質(zhì)，已被聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）譽(yù)為“21世紀(jì)最佳保健品”。蘆薈多糖作為無毒、無害、無刺激的中草藥成分，具有殺菌消炎［3］、抗腫瘤［4］、抗艾滋?。?］、降血糖［6］、調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫水平［7］、清除皮膚色素抗氧化性［8］、改善由于輻射引起的白細(xì)胞減少癥［9］、抑制細(xì)胞凋亡［10］等作用，被廣泛用于醫(yī)療、美容、保健、食用、觀賞，甚至是材料研發(fā)。因此蘆薈多糖的提取和開發(fā)具有非常重要的意義。

多糖含量的測定方法有很多，如DNS法［11］、苯酚硫酸法［12］、蒽酮硫酸法［13］、色譜法、毛細(xì)管電泳法［14］等。但采用旋光法測定多糖的研究還尚未見報(bào)道。而且由于不同品種的蘆薈，甚至同一品種但種植條件不同都會(huì)對(duì)蘆薈多糖含量造成影響。本文擬采用改進(jìn)苯酚硫酸法和旋光法分別測定考察蘆薈粗多糖中多糖含量。苯酚硫酸法測定糖是在高溫條件下，硫酸使糖水解并縮合生成糠醛，再與苯酚形成穩(wěn)定的顯色反應(yīng)來測定多糖含量；而旋光法則是首先用鹽酸水解多糖后，再測定葡萄糖和甘露糖的旋光度，以確定多糖濃度的方法，一般來說溶液的濃度越大，其旋光度越大，該方法所用試劑少，操作簡便，因此通過本實(shí)驗(yàn)旨在建立一種操作性更強(qiáng)、更為簡便的測定多糖含量的方法，同時(shí)為便于控制和檢測蘆薈原料種植和加工企業(yè)，確保蘆薈原料和制品的質(zhì)量提供一定的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與試劑

鮮蘆薈：庫拉索蘆薈；無水乙醇：天津市富裕精細(xì)化工有限公司；葡萄糖：天津市化學(xué)試劑三廠；硫酸、苯酚：分析純，成都科龍化工廠。

1.2儀器與設(shè)備

WZZ-2SS型數(shù)字式自動(dòng)旋光儀：上海精密科學(xué)儀器有限公司；TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(jì)：天津普析通用儀器設(shè)備有限公司；離心機(jī)：北京京立離心機(jī)有限公司；烘箱：上海申賢恒溫儀設(shè)備器廠；FW80型高速萬能粉碎機(jī)：天津市泰斯特儀器有限公司；B3200ST型超聲波清洗器：杭州旭東升科技有限公司；722型可見分光光度計(jì)。

1.3方法

1.3.1超聲醇沉法蘆薈多糖提?。?5］

取一棵鮮蘆薈，洗凈，剪碎，40℃恒溫干燥36 h，高速粉碎打成粉末狀，稱重：13.463 g，加入適量蒸餾水（約1∶20），超聲1 h，抽濾，濾液用6 mol/L HCl，調(diào)pH 3～3.5，加入4倍體積無水乙醇，超聲30 min，靜置2 h，4000 r/min離心10 min，棄上清液，沉淀為蘆薈粗多糖。

1.3.2改進(jìn)苯酚-硫酸法測定多糖含量［16］

顯色液配制：將50 mL濃硫酸緩緩加入10 mL水中冷卻至室溫，再加入0.6 g苯酚晶體攪拌、溶解配成顯色液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：精密稱取干燥至質(zhì)量恒定的葡萄糖50 mg加蒸餾水至50 mL，得標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液0、1、2、3、4、5、6 mL，再用25 mL容量瓶定容。按糖液∶顯色液=1∶5比例加入試管，震蕩混勻，置于沸水浴中保溫30 min，取出冷卻至室溫。490 nm波長下測定吸光度（Abs）。

樣品測定：準(zhǔn)確稱取0.35g干燥樣品定容至100mL容量瓶中，按上述方法測定多糖含量。

1.3.3旋光法測定多糖含量

將一定量蘆薈多糖溶解于50mL的水中，充分溶解后，向溶液中加入50mL6mol/LHCl，70℃加熱10min。等冷卻至室溫，離心，轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心10min，離心兩次，取上清液。準(zhǔn)確量取以上操作得到的上清液5、10、15、20、25 mL，蘑菇多糖溶液于1～5號(hào)25 mL的容量瓶中，加蒸餾水定容、混勻后，用2 dm的旋光管測定，記錄旋光度。

2結(jié)果與分析

2.1苯酚-硫酸法測定多糖含量

利用上述方法制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

通過進(jìn)行線性回歸分析，得到多糖測定過程中，糖濃度與吸光度的線性回歸方程：y=3.443 6x+0.094 94，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 67，表明方程擬合度較好。

由表1分析可知，不同濃度粗多糖溶液測定的多糖含量相差無幾，說明此改進(jìn)苯酚-硫酸法穩(wěn)定、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

圖1　苯酚-硫酸法標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1Standard curve by phenol sulfuric acid method

表1　苯酚-硫酸法測定不同濃度蘆薈粗多糖中多糖的含量Table 1Content of polysaccharide by phenol sulfuric acid method

2.2旋光法測定多糖含量

利用上述方法制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。

圖2　旋光法測定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2Standard curve by Rotation method

表2　旋光法測定不同濃度粗多糖溶液中多糖的含量Table 2Content of polysaccharide by Rotation method

通過進(jìn)行線性回歸分析，得到多糖測定過程中，糖濃度與吸光度的回歸方程：y=0.078 14x+0.019 1，相關(guān)系數(shù)R=0.997 48，表明方程擬合度較好。

由表2分析可知，不同濃度粗多糖溶液測定的多糖含量相差不大，說明旋光法測定多糖準(zhǔn)確、重復(fù)性好，而且操作步驟簡便，只需要加入一定的鹽酸水解后即可快速測定。

3結(jié)論

采用旋光法和改進(jìn)硫酸苯酚法測定蘆薈多糖均不需要精密儀器，操作簡便，穩(wěn)定可靠。多糖含量的測定結(jié)果基本一致，分別為0.0993mg/mL和0.1065mg/mL。但旋光法只需采用一種試劑——鹽酸處理后即可直接測定，因而此方法可作為一種穩(wěn)定、可靠、快速的分析方法，用于監(jiān)控檢測蘆薈多糖生產(chǎn)中原料及多糖制品的質(zhì)量。

［1］周媛，陳冬梅.蘆薈的毒理研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2006（6）：118-119

［2］李天東，羅英，李俊剛.蘆薈多糖生物活性研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（5）：2033-2035

［3］于芳，胡云，彭常安，等.蘆薈汁的抑菌作用［J］.食品科學(xué)，2004，25（10）：77-80

［4］Saini M，Goyal PK，Chaudhary G.Anti-tumor activity of Aloe Vera against DMBA/croton oil-induced skin papillomagenesis in Swiss albinomice［J］.JEnvironPatholToxicolOncol，2010，29（2）：127-135

［5］鄭敏霞，豐素娟.蘆薈的藥用研究進(jìn)展［J］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，30（3）：313-315

［6］崔晏.苦瓜多糖和蘆薈多糖的降血糖作用及其機(jī)理的研究［D］.濟(jì)南，山東師范大學(xué)，2003

［7］張素蘭.蘆薈多糖免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（32）：15837-15839

［8］于潔，李威.含蘆薈多糖與維生素E乳狀化妝品的制備及其性能［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2007（4）：281-282

［9］楊繼遠(yuǎn)，袁仲.蘆薈化學(xué)成分的保健功效與產(chǎn)品開發(fā)［J］.農(nóng)牧產(chǎn)品開發(fā)，2001（4）：6-8

［10］Lu ZQ，Deng YJ，Lu JX.Effect of aloe polysaccharide on caspase-3 expression following cerebral ischemia and reperfusion injury in rats［J］.Mol Med Report.2012 May 24.doi：10.3892/mmr.2012.927

［11］王麗娜，陳永鈁，張兵.3，5-二硝基水楊酸法測定多糖含量的研究進(jìn)展［J］.吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，30（4）：232-234

［12］王俊玲，張麗芳，倪中海.蘆薈多糖的提取及總糖含量測定［J］.海峽藥學(xué)，2002，14（5）：67-69

［13］李紹平，黃趙剛，張平，等.蒽酮—硫酸法測定亮茵糖漿中多糖的含量［J］.中草藥，2002，33（3）：233-234

［14］徐曉飛，陳健.多糖含量測定的研究進(jìn)展［J］.食品科學(xué)，2009，30（21）：443-448

［15］劉曉鵬，姜寧，向東山.庫拉索蘆薈多糖超聲輔助提取工藝的研究［J］.食品科學(xué)，2008，29（10）：286-289

［16］徐光域，顏軍，郭曉強(qiáng).硫酸－苯酚定糖法的改進(jìn)與初步應(yīng)用［J］.食品科學(xué)，2005，26（8）：342-346

Comparison of Methods in Determination of Polysaccharide in Aloe

MIAO Xiao-yan，HE Fu-qiang，CHEN Ping*
（Department of Biochemistry，Baoding University，Baoding 071000，Hebei，China）

Respectively by the method of polarimetry and phenol sulfuric acid method for the determination of Aloe coarse polysaccharide content of polysaccharide in.The results showed that optical method for the determination of the polysaccharide content and improved phenol sulfuric acid method for determination value were basically the same that was 0.099 3 mg/mL and 0.106 5 mg/mL；two methods for the determination ofpolysaccharide were accurate，stable and feasible.Therefore the polarimetry could be used as a simpler，more practical for the determination of polysaccharides content method，applied to the polysaccharide product quality testing and monitoring.

aloe polysaccharide；phenol-sulfuric acid；rotation

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.10.003

2013-12-07

苗曉燕（1980—），女（漢），講師，碩士，主要研究方向：植物次生代謝及調(diào)控。*通信作者：陳萍（1959—），女，教授，主要研究方向：生物科學(xué)。