• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    明膠、阿拉伯膠復(fù)合凹土制備乳酸菌微膠囊研究

    2015-10-19 06:01:32馮云琪
    中國(guó)飼料 2015年23期
    關(guān)鍵詞:阿拉伯膠壁材膠體

    馮云琪

    (淮陰工學(xué)院生命科學(xué)與食品工程學(xué)院,江蘇淮安 223001)

    明膠和阿拉伯膠均為具有良好生物親和性的天然高分子材料,明膠是一種蛋白質(zhì),阿拉伯膠是一種多聚糖,均可作為微膠囊制備的理想壁材。在pH=4左右,明膠帶正電荷較多,阿拉伯膠帶負(fù)電荷較多,可中和形成復(fù)合物,再加入固化劑,形成交聯(lián)狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而成囊 (孫燕婷等,2013)。凹土是一種天然非金屬粘土礦物質(zhì),具有特殊纖維晶體形態(tài)結(jié)構(gòu),具有較好的生物親和性,其本身可作為益生菌載體,當(dāng)在微膠囊壁材中添加該物質(zhì)時(shí),又可較好地提高微囊的機(jī)械強(qiáng)度和通透性(趙玉萍等,2013、2012)。本試驗(yàn)以載菌凹土為芯材,以明膠、阿拉伯膠復(fù)合凹土作為壁材制備微囊膠,研究該壁材對(duì)益生菌在胃腸環(huán)境中的保護(hù)作用,旨在為飼料用益生菌制劑的制備提供一定的參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器 乳酸桿菌由江蘇省生物質(zhì)轉(zhuǎn)化與過(guò)程集成工程實(shí)驗(yàn)室篩選保藏;凹土由江蘇省凹土資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供;牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、胃蛋白酶、胰蛋白酶購(gòu)自日本Sigma公司;其他試劑購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

    722N型可見(jiàn)光分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);JJ-1型精密增力電動(dòng)攪拌器(金壇市榮華儀器制造有限公司);TGL-16G-A型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) (上海安亭科學(xué)儀器廠);BSD-YX3200型立式雙層智能精密搖床 (上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);BL-50A型立式壓力蒸汽滅菌鍋 (上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);90-3型恒溫雙向磁力攪拌器(上海振榮科學(xué)儀器有限公司)。

    1.2 培養(yǎng)基及人工胃腸液的配制 乳酸桿菌的培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基:牛肉膏10 g,蛋白胨10 g,酵母浸膏 5 g,K2HPO42 g,檸檬酸二銨 2 g,乙酸鈉 2 g,葡萄糖 20 g,MnSO4·4H2O 0.25 g,MgSO4·7H2O 0.58 g,吐溫-801 mL,水 1000 mL,pH 6.2 ~6.4(趙玉萍和方芳,2013)。

    人工胃液:胃蛋白酶10g,NaCl 2 g,加水定容至 1000 mL,pH 2.5(趙玉萍等,2013)。

    人工腸液:胰蛋白酶 10 g,KH2PO46.8 g,加水定容至 1000 mL,pH 6.8(李寧,2007)。

    人工胃腸液均用0.2 μm濾膜過(guò)濾備用。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 凹土的純化 將未經(jīng)處理的凹土研磨,過(guò)200目篩,以10%的量加入去離子水,磁力攪拌器攪拌24 h后,靜置4 h,取中間層凹土懸液,以10%的量加入去離子水,重復(fù)3次(趙玉萍等,2012)。

    1.3.2 復(fù)凝聚法制備乳酸菌微膠囊

    1.3.2.1 復(fù)凝聚法制備乳酸菌微膠囊方法 乳酸菌在MRS培養(yǎng)基中于37℃靜置培養(yǎng),2000 r/mim離心 10 min,取沉淀備用(趙玉萍等,2013)。

    載菌凹土的制備:適量菌懸液和凹土在pH 6.5,35℃吸附40 min,冷凍干燥備用(趙玉萍等,2015;Rong 等,2008)。

    微囊的制備:將適量明膠、凹土、載菌凹土和Tween-80于40℃混合,攪拌均勻,恒溫加入阿拉伯膠溶液,繼續(xù)攪拌均勻,用稀鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至3.6~4.0。

    微囊的固化:上述混合液自然冷卻至25℃左右,再以冰浴冷卻至10℃以下,加入一定量戊二醛固化劑,攪拌15 min后,用10%NaOH溶液調(diào)pH至8~9,繼續(xù)攪拌至膠囊析出(于樂(lè)軍,2009)。

    微膠囊的收集:離心收集并洗滌固化后的微膠囊產(chǎn)品。

    1.3.2.2 明膠-阿拉伯膠復(fù)合凹土微囊制備的適宜條件的確定 適宜菌膠比例的確定:明膠-阿拉伯膠膠體質(zhì)量總濃度為4%(質(zhì)量比為1∶1),凹土0.2%,pH 4.0,于25℃反應(yīng) 20 min,菌膠質(zhì)量比例分別為 1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9(菌體的量為載菌凹土的質(zhì)量),考察其對(duì)乳酸菌微膠囊包埋率以及模擬胃腸環(huán)境的釋放率的影響。

    在單因素試驗(yàn)中,明膠-阿拉伯膠復(fù)合膠體用量分別為2%、3%、4%、5%、6%,其質(zhì)量比分別為1.5∶1、1.2∶1、1∶1、1∶1.2、1∶1.5, 凹 土 用 量 分 別 為0.1%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%, 反應(yīng)溫度分別為15、20、25、30、35 ℃,凝聚 pH 分別為 3.6、3.7、3.8、3.9、4.0,反應(yīng)時(shí)間分別為 10、20、30、40、50 min。

    1.3.2.3 微膠囊質(zhì)量初步評(píng)價(jià) 包埋率按以下公式計(jì)算:

    活菌數(shù)測(cè)定采用菌落總數(shù)計(jì)數(shù)法。

    包埋前活菌數(shù)計(jì)數(shù):取包埋前的菌液,稀釋到適當(dāng)倍數(shù)后取0.2 mL涂布,37℃培養(yǎng)48 h,計(jì)數(shù)。

    未包埋活菌數(shù)計(jì)數(shù):取微膠囊離心上清液,用無(wú)菌水洗滌數(shù)次,收集上清和洗滌液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)后取0.2 mL涂布,37℃培養(yǎng)24~48 h,計(jì)數(shù)。

    1.3.2.4 耐胃腸環(huán)境試驗(yàn) 將1 g微膠囊置于100mL人工胃液中,于37℃水浴恒溫振蕩150r/min,分別于0、l、2、3 h進(jìn)行活菌計(jì)數(shù),然后將微膠囊于2000 r/min離心10 min并經(jīng)生理鹽水洗滌后,轉(zhuǎn)至100 mL人工腸液中,于37℃水浴恒溫振蕩150 r/min, 分別于 0、2、4、6、8、10、12 h 進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。同時(shí)與未經(jīng)包埋的菌體與載菌凹土作對(duì)照(尹尉翰等,2011)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 菌膠比的確定 菌膠比對(duì)微囊包埋率影響較大,若菌膠比過(guò)高,菌體過(guò)量,壁材不能將菌體完全包裹;若菌膠比例過(guò)低,壁材過(guò)量,雖然包埋率高,但因包埋過(guò)于致密不利于菌體釋放。菌膠比對(duì)乳酸菌微膠囊包埋率的影響結(jié)果如圖1所示。

    圖1 菌膠比對(duì)包埋率的影響

    由圖1可以看出,隨著菌膠比的不斷減小,微膠囊的包埋率不斷增大。當(dāng)菌膠比為1∶5時(shí)包埋率最低,為70.1%;菌膠比為1∶9時(shí)包埋率最高,為79.5%。當(dāng)菌膠比從1∶5降低到1∶8時(shí),微膠囊粒徑有所減小,包埋率明顯提高,達(dá)79.3%,但隨著菌膠比的降低,微膠囊包埋菌體量亦逐漸降低,綜合包埋率和包埋量?jī)蓚€(gè)因素,確定菌膠比為 1∶8。

    2.2 明膠-阿拉伯膠復(fù)合膠體用量的確定 壁材濃度過(guò)低或過(guò)高均會(huì)影響微膠囊產(chǎn)品的外觀均勻度和圓整性。若明膠-阿拉伯膠復(fù)合膠體用量過(guò)少,形成的微膠囊量少,包埋率亦隨之下降,若用量過(guò)多,加入戊二醛后會(huì)形成凝膠狀而非微膠囊。復(fù)合膠體用量對(duì)包埋率影響結(jié)果如圖2所示。

    圖2 復(fù)合膠體用量對(duì)微膠囊包埋率的影響

    由圖2可以看出,隨著復(fù)合膠體用量的不斷增大,微膠囊的包埋率先增大后減小,當(dāng)復(fù)合膠體用量為4%時(shí),包埋率最大為79.9%??赡苁钱?dāng)復(fù)合膠體濃度較低時(shí),膠體電離電荷較少,能夠形成的微膠囊數(shù)量少,包埋率亦較低;隨著復(fù)合膠體濃度的增大,兩者電離電荷增加,因此能夠形成的膠囊數(shù)量增加,包埋率增大;當(dāng)明膠-阿拉伯膠復(fù)合膠體的濃度大于5%時(shí),由于復(fù)合膠體濃度過(guò)高、黏度較大,形成的微膠囊相互粘連,導(dǎo)致包埋率也隨之下降。

    2.3 適宜明膠-阿拉伯膠質(zhì)量比的確定 由圖3可知,隨著明膠-阿拉伯膠質(zhì)量比的增加,微膠囊的包埋率先增加后減小,當(dāng)明膠∶阿拉伯膠為1∶1時(shí),包埋率最大為90.4%,可能是因?yàn)槊髂z所帶正電荷和阿拉伯膠所帶負(fù)電荷恰好完全中和。

    圖3 明膠-阿拉伯膠質(zhì)量比對(duì)微膠囊包埋率的影響

    2.4 適宜凹土用量的確定 載菌凹土減少了復(fù)凝聚過(guò)程中菌體的損失,在壁材中添加凹土?xí)黾游⒛z囊的機(jī)械強(qiáng)度(趙玉萍等,2012)。凹土用量對(duì)包埋率的影響結(jié)果如圖4所示。

    圖4 凹土添加量對(duì)微膠囊包埋率的影響

    由圖4可知,隨著凹土用量的不斷增加,微膠囊的包埋率先增大后減小。當(dāng)凹土用量為0.4%時(shí),包埋率最高為91.1%,再增加凹土用量包埋率反而下降,原因可能是隨著凹土用量的增加,降低了成囊性。

    2.5 適宜復(fù)凝聚反應(yīng)時(shí)間的確定 足夠的反應(yīng)時(shí)間會(huì)使明膠-阿拉伯膠凹土復(fù)合體系反應(yīng)充分,可將菌體盡可能地充分包埋,保證了形成的微膠囊數(shù)量,結(jié)果如圖5所示。

    圖5 反應(yīng)時(shí)間對(duì)微膠囊包埋率的影響

    由圖5可以看出,隨著復(fù)凝聚反應(yīng)時(shí)間的增加,微膠囊包埋率逐漸增加后趨于穩(wěn)定,當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為10 min時(shí),包埋率已達(dá)到92.4%。

    2.6 適宜凝聚pH的確定 在不同的pH條件下,明膠和阿拉伯膠帶電性質(zhì)不同,交聯(lián)反應(yīng)程度不同,試驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。

    圖6 凝聚pH對(duì)微膠囊包埋率的影響

    由圖6可以看出,當(dāng)pH在3.9時(shí),微膠囊的包埋率最高,為93.6%??赡苁且?yàn)閜H為3.9時(shí),明膠所帶的正電荷最多,而阿拉伯膠此時(shí)帶負(fù)電荷,因此形成的微膠囊量也最多(于樂(lè)軍,2009)。

    2.7 適宜反應(yīng)溫度的確定 低溫時(shí)復(fù)凝聚反應(yīng)不易發(fā)生,因?yàn)槊髂z溶液呈凍凝狀,阿拉伯膠溶液黏度較大;高溫時(shí),分子熱運(yùn)動(dòng)速率較快,且不易凝聚在載菌凹土周?chē)?,因此?huì)影響微膠囊的形成,所以適宜的反應(yīng)溫度會(huì)對(duì)微膠囊的包埋率產(chǎn)生影響,結(jié)果如圖7所示。

    圖7 反應(yīng)溫度對(duì)微膠囊包埋率的影響

    由圖7可以看出,隨著溫度的升高,微膠囊的包埋率先升高后下降,溫度為25℃時(shí),包埋率最高,為93.3%。

    2.8 微膠囊在模擬胃腸環(huán)境中的釋放率 按上述方法和步驟制得乳酸菌微膠囊,經(jīng)冷凍干燥后獲得活菌制劑。將未經(jīng)任何保護(hù)的乳酸桿菌、負(fù)載在凹土上的乳酸桿菌和微膠囊制劑在模擬人工胃腸環(huán)境下進(jìn)行試驗(yàn),0~3 h為模擬胃環(huán)境,3~15 h為模擬腸環(huán)境。由圖8可知,在胃環(huán)境中載菌凹土和微膠囊釋放比率接近,但在腸環(huán)境中,微膠囊能較長(zhǎng)時(shí)間地保持活菌比率,證明明膠-阿拉伯膠-凹土復(fù)合壁材對(duì)于乳酸菌具有較好的保護(hù)作用。

    圖8 人工腸胃環(huán)境下活菌釋放率與時(shí)間的關(guān)系

    3 結(jié)論

    本試驗(yàn)以明膠、阿拉伯膠復(fù)合凹土作為壁材,以載菌凹土作為芯材,制備乳酸桿菌微膠囊制品,經(jīng)人工模擬胃腸環(huán)境作用發(fā)現(xiàn),載菌凹土與微膠囊在胃環(huán)境中的乳酸桿菌的釋放率接近,但在腸環(huán)境中,微膠囊中的乳酸桿菌卻能在很長(zhǎng)時(shí)間保持活性,說(shuō)明本試驗(yàn)中所用的壁材對(duì)乳酸桿菌具有較好的保護(hù)作用。在微膠囊的制備過(guò)程中,與僅以明膠、阿拉伯膠作為壁材的微膠囊相比,本試驗(yàn)所用的膠體總量、交聯(lián)pH、固化時(shí)間和溫度等參數(shù)均發(fā)生了變化,尤其是膠體用量從15%降為4%,但仍可保持較高的包埋率,節(jié)約了成本??赡苁且?yàn)榘纪恋奶砑?,其表面的電荷影響了明膠、阿拉伯膠的表面電荷,從而使固化條件均發(fā)生了變化,關(guān)于這方面的機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究。

    [1]李寧.雙歧桿菌微膠囊制備工藝及功能特性的研究:[碩士學(xué)位論文][D].保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.

    [2]孫燕婷,黃國(guó)清,肖軍霞,等.阿拉伯膠/殼聚糖復(fù)凝聚相的制備及表征[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2013,13(2):43.

    [3]尹尉翰,雷涵,徐宇虹.海藻酸鈣微囊對(duì)乳酸乳球菌在胃腸道環(huán)境中的保護(hù)作用[J].微生物學(xué)通報(bào),2011,38(8):1228 ~ 1234.

    [4]于樂(lè)軍.明膠/阿拉伯膠復(fù)凝聚微膠囊技術(shù)用于乳酸菌保護(hù)的研究:[碩士學(xué)位論文][D].青島:中國(guó)海洋大學(xué),2009.

    [5]趙玉萍,方芳.應(yīng)用微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].南京:東南大學(xué)出版社,2013.11.

    [6]趙玉萍,黃穎娟,吳潔,等.以凹土為載體的新型益生菌制劑的制備[J].食品工業(yè)科技,2013,34(19):141 ~ 144.

    [7]趙玉萍,唐梓鑫,楊莉,等.凹土對(duì)乳酸球菌的吸附條件優(yōu)化[J].食品與機(jī)械,2015,1:46 ~ 49.

    [8]趙玉萍,徐巖,王棟.固定化耶氏酵母提高產(chǎn)γ-癸內(nèi)酯能力[J].食品工業(yè)科技,2012,33(6):230 ~ 233.

    [9]Rong X M,Huang Q Y,He X M,et al.Interaction of pseudomonas putida with kaolinite and montmorillonite:a combination study by equilibrium adsorption,ITC,SEM and FTIR [J].Colloids and surfaces B:Biointerfaces,2008,64:49 ~ 55.■

    猜你喜歡
    阿拉伯膠壁材膠體
    阿拉伯膠,食品添加劑里的“魔術(shù)師”
    微納橡膠瀝青的膠體結(jié)構(gòu)分析
    石油瀝青(2022年2期)2022-05-23 13:02:36
    基于沸石在室內(nèi)健康型壁材中的應(yīng)用及發(fā)展趨勢(shì)分析
    天津化工(2021年1期)2021-01-05 16:42:05
    益生菌微膠囊在非乳制品中的應(yīng)用現(xiàn)狀
    黃河水是膠體嗎
    高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定爆珠壁材中8種水溶性著色劑
    維吾爾藥阿拉伯膠和乳香藥材摻偽的鑒別研究
    不同壁材微膠囊飼料對(duì)黃姑魚(yú)稚魚(yú)生長(zhǎng)和消化酶活力的影響
    康惠爾水膠體敷料固定靜脈留置針對(duì)靜脈炎的預(yù)防效果
    康惠爾水膠體敷料聯(lián)合泡沫敷料預(yù)防褥瘡的療效觀察
    亚洲精品美女久久av网站| av国产精品久久久久影院| 欧美性长视频在线观看| 精品亚洲成国产av| 国产av精品麻豆| 视频区图区小说| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久久网色| 久久狼人影院| 亚洲七黄色美女视频| 少妇人妻久久综合中文| 青青草视频在线视频观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 美女中出高潮动态图| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 久久久精品区二区三区| 成年动漫av网址| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 99九九在线精品视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品一国产av| 亚洲 欧美一区二区三区| 性色av一级| 蜜桃在线观看..| 亚洲av欧美aⅴ国产| 色综合欧美亚洲国产小说| 一本久久精品| 无遮挡黄片免费观看| 久久国产精品大桥未久av| 在线观看免费午夜福利视频| 国产99久久九九免费精品| 韩国高清视频一区二区三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 麻豆国产av国片精品| 久久国产精品人妻蜜桃| 中文字幕制服av| 捣出白浆h1v1| 亚洲国产av影院在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲图色成人| 亚洲成色77777| 黄色片一级片一级黄色片| 国产99久久九九免费精品| 免费在线观看影片大全网站 | 午夜免费成人在线视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 成人三级做爰电影| 久热爱精品视频在线9| 日韩视频在线欧美| 久久精品国产亚洲av高清一级| 成年女人毛片免费观看观看9 | 九草在线视频观看| 性少妇av在线| 国产精品熟女久久久久浪| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 天天添夜夜摸| 91麻豆av在线| 97精品久久久久久久久久精品| 国产免费又黄又爽又色| 麻豆av在线久日| 夫妻午夜视频| 亚洲精品国产区一区二| 久久久久精品人妻al黑| 一区二区av电影网| 亚洲av片天天在线观看| 国产免费又黄又爽又色| a级毛片在线看网站| 国产精品 欧美亚洲| 狂野欧美激情性bbbbbb| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲五月婷婷丁香| 久久 成人 亚洲| 国产爽快片一区二区三区| 国产免费现黄频在线看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 无限看片的www在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品 国内视频| 欧美另类一区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成人免费观看视频高清| 亚洲成国产人片在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 少妇精品久久久久久久| 男女边摸边吃奶| 久久久久精品国产欧美久久久 | 99久久人妻综合| 大香蕉久久网| 国产欧美日韩一区二区三 | 校园人妻丝袜中文字幕| 高清不卡的av网站| av国产久精品久网站免费入址| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产成人一区二区在线| 捣出白浆h1v1| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 午夜老司机福利片| 免费日韩欧美在线观看| 宅男免费午夜| 国产一区二区在线观看av| 欧美乱码精品一区二区三区| 成人午夜精彩视频在线观看| 香蕉国产在线看| 亚洲,一卡二卡三卡| 韩国精品一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 国产视频首页在线观看| 中文字幕制服av| 国产高清不卡午夜福利| 男女边吃奶边做爰视频| 中文字幕制服av| 成人亚洲精品一区在线观看| 日韩av免费高清视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 在线观看免费视频网站a站| 十八禁人妻一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产免费福利视频在线观看| 91老司机精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 交换朋友夫妻互换小说| av一本久久久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产欧美亚洲国产| 日韩大片免费观看网站| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲精品美女久久av网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 高清欧美精品videossex| 久热这里只有精品99| 久久99精品国语久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 天天影视国产精品| 国产精品一国产av| www日本在线高清视频| 久久久精品免费免费高清| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产免费视频播放在线视频| av欧美777| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 男人操女人黄网站| 精品第一国产精品| 久久精品久久久久久久性| 尾随美女入室| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产精品一国产av| 搡老乐熟女国产| www日本在线高清视频| 99国产精品一区二区三区| 亚洲国产精品国产精品| 免费少妇av软件| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲美女黄色视频免费看| 久久ye,这里只有精品| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美成人精品欧美一级黄| 少妇精品久久久久久久| 欧美激情高清一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| 黄片播放在线免费| 日韩免费高清中文字幕av| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲欧美色中文字幕在线| 18在线观看网站| 欧美黄色淫秽网站| 欧美日韩av久久| 十八禁网站网址无遮挡| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产日韩欧美视频二区| 免费高清在线观看日韩| 9色porny在线观看| 日韩电影二区| 精品久久久久久电影网| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 99热全是精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久久久久免费高清国产稀缺| 大陆偷拍与自拍| av又黄又爽大尺度在线免费看| 韩国高清视频一区二区三区| 久久99一区二区三区| 成人影院久久| 99久久人妻综合| a级毛片在线看网站| 久久 成人 亚洲| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一级毛片电影观看| 国产在线一区二区三区精| 美女大奶头黄色视频| 丁香六月欧美| 国产欧美日韩一区二区三 | 久久久国产一区二区| 国产成人欧美| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 母亲3免费完整高清在线观看| 久久久久久久精品精品| 国产精品久久久人人做人人爽| 成人黄色视频免费在线看| 一本大道久久a久久精品| 亚洲成人国产一区在线观看 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 女人精品久久久久毛片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 1024视频免费在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美黄色片欧美黄色片| av网站在线播放免费| 少妇粗大呻吟视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日本午夜av视频| 亚洲精品日本国产第一区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久精品国产欧美久久久 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 两性夫妻黄色片| 日本欧美国产在线视频| 亚洲av电影在线进入| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 大香蕉久久成人网| 国产片特级美女逼逼视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 自线自在国产av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 男人爽女人下面视频在线观看| www.av在线官网国产| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲av在线观看美女高潮| 日韩大码丰满熟妇| 老司机在亚洲福利影院| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 欧美激情高清一区二区三区| 91精品伊人久久大香线蕉| 午夜福利一区二区在线看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲精品第二区| 黑丝袜美女国产一区| 天堂8中文在线网| 欧美在线黄色| 成人国产av品久久久| 在线观看免费高清a一片| 午夜福利一区二区在线看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲av综合色区一区| 久久99一区二区三区| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲成人国产一区在线观看 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产在线免费精品| 国产一区二区 视频在线| 国产精品久久久av美女十八| e午夜精品久久久久久久| 性色av一级| 永久免费av网站大全| 99国产精品99久久久久| 在线天堂中文资源库| 伦理电影免费视频| 久热这里只有精品99| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 超碰97精品在线观看| 国产成人精品无人区| 91精品国产国语对白视频| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 成年动漫av网址| 桃花免费在线播放| 嫩草影视91久久| 久久九九热精品免费| 精品福利观看| 交换朋友夫妻互换小说| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产精品一区二区在线观看99| 我的亚洲天堂| 深夜精品福利| 欧美少妇被猛烈插入视频| 91成人精品电影| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲av综合色区一区| 中国美女看黄片| 亚洲精品日本国产第一区| 国产av精品麻豆| 中文字幕av电影在线播放| 午夜免费男女啪啪视频观看| 一边亲一边摸免费视频| 青春草视频在线免费观看| 一级毛片 在线播放| 久久久久久久国产电影| 免费高清在线观看视频在线观看| 久热爱精品视频在线9| 男女免费视频国产| 99国产精品一区二区三区| 老司机影院毛片| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品一二三| 国产精品三级大全| 午夜免费观看性视频| 首页视频小说图片口味搜索 | 亚洲国产欧美在线一区| 搡老岳熟女国产| av片东京热男人的天堂| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 精品国产一区二区久久| 成年av动漫网址| 成人黄色视频免费在线看| 欧美成人午夜精品| 久久99精品国语久久久| 韩国高清视频一区二区三区| 久久九九热精品免费| 国产亚洲av高清不卡| 人成视频在线观看免费观看| 在线 av 中文字幕| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 曰老女人黄片| 黑丝袜美女国产一区| 高清不卡的av网站| 女人久久www免费人成看片| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 国产av国产精品国产| 99re6热这里在线精品视频| 成人国产av品久久久| 男女之事视频高清在线观看 | 激情视频va一区二区三区| 国产精品.久久久| 在线av久久热| 天堂俺去俺来也www色官网| 夫妻性生交免费视频一级片| xxx大片免费视频| 激情视频va一区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 看免费av毛片| tube8黄色片| 18在线观看网站| 老司机深夜福利视频在线观看 | 欧美日本中文国产一区发布| 成人国语在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 美女大奶头黄色视频| xxxhd国产人妻xxx| 国产精品久久久av美女十八| 欧美日韩视频精品一区| 99国产精品一区二区三区| 在线精品无人区一区二区三| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲精品在线美女| 黄频高清免费视频| av在线播放精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 成人黄色视频免费在线看| 午夜激情av网站| 老司机影院毛片| 91老司机精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日本午夜av视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产视频首页在线观看| 搡老岳熟女国产| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 悠悠久久av| 国产精品 国内视频| 亚洲国产欧美网| 热99久久久久精品小说推荐| 七月丁香在线播放| 另类精品久久| 大话2 男鬼变身卡| 中文字幕av电影在线播放| 国产精品国产av在线观看| 成人国语在线视频| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲av欧美aⅴ国产| 99九九在线精品视频| 国产成人一区二区在线| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲国产av新网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产激情久久老熟女| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久天堂一区二区三区四区| 久久99热这里只频精品6学生| 捣出白浆h1v1| 丰满少妇做爰视频| 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲精品一区蜜桃| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美黑人精品巨大| 制服人妻中文乱码| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲国产欧美网| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲国产精品成人久久小说| 十八禁人妻一区二区| 超碰97精品在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲伊人色综图| 女人精品久久久久毛片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一二三四社区在线视频社区8| 免费在线观看日本一区| 五月开心婷婷网| 精品国产国语对白av| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 少妇粗大呻吟视频| 最新在线观看一区二区三区 | 亚洲免费av在线视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品二区激情视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 99热全是精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品亚洲成国产av| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲男人天堂网一区| 在线观看免费高清a一片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲国产av新网站| 亚洲中文字幕日韩| 视频在线观看一区二区三区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 在线观看免费视频网站a站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产免费又黄又爽又色| 欧美黄色淫秽网站| 精品亚洲成国产av| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 悠悠久久av| 波多野结衣一区麻豆| 午夜激情av网站| 亚洲av日韩在线播放| 中文字幕高清在线视频| 国产在线视频一区二区| 中国国产av一级| 波多野结衣av一区二区av| 一区二区av电影网| 老汉色∧v一级毛片| 视频在线观看一区二区三区| 久久人人爽人人片av| 国产成人精品久久久久久| 精品少妇内射三级| 国产亚洲欧美在线一区二区| 看免费av毛片| 亚洲第一青青草原| 国产男人的电影天堂91| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久免费观看电影| 我要看黄色一级片免费的| 女性生殖器流出的白浆| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| av欧美777| 国产97色在线日韩免费| 成人国产一区最新在线观看 | 国产精品国产三级国产专区5o| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 日本欧美视频一区| 久久久久久久久免费视频了| 人体艺术视频欧美日本| 一级黄色大片毛片| 少妇人妻 视频| 99热国产这里只有精品6| 日本91视频免费播放| 国产视频首页在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 蜜桃在线观看..| 久久ye,这里只有精品| 赤兔流量卡办理| av天堂久久9| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产91精品成人一区二区三区 | 黄色视频不卡| 亚洲成人手机| 成人亚洲欧美一区二区av| 99九九在线精品视频| 国产男女超爽视频在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| kizo精华| 一级毛片电影观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 免费黄频网站在线观看国产| 国产成人免费观看mmmm| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 少妇人妻 视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 一个人免费看片子| 日本vs欧美在线观看视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 99热网站在线观看| 欧美97在线视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 成在线人永久免费视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 少妇人妻 视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品卡一卡二卡四卡免费| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 999久久久国产精品视频| 国产男女内射视频| 国产三级黄色录像| 国产精品一区二区精品视频观看| 视频区图区小说| 午夜福利一区二区在线看| 美女福利国产在线| 视频在线观看一区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 国产高清videossex| 天天添夜夜摸| 丰满饥渴人妻一区二区三| 各种免费的搞黄视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 午夜福利影视在线免费观看| 日本av免费视频播放| 亚洲第一av免费看| 国精品久久久久久国模美| 亚洲一码二码三码区别大吗| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲av电影在线进入| 一边摸一边做爽爽视频免费| 午夜老司机福利片| 午夜福利一区二区在线看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 欧美中文综合在线视频| 亚洲中文av在线| 久热爱精品视频在线9| 国产成人91sexporn| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美性长视频在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 人妻人人澡人人爽人人| 男人操女人黄网站| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲激情五月婷婷啪啪| videos熟女内射| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产男女超爽视频在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 美女高潮到喷水免费观看| 一二三四在线观看免费中文在| 国产一区二区在线观看av| 久久av网站| 99国产精品一区二区三区| 操出白浆在线播放| 欧美变态另类bdsm刘玥| 无限看片的www在线观看| 麻豆国产av国片精品| 美女午夜性视频免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 丁香六月欧美| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 大片电影免费在线观看免费| 90打野战视频偷拍视频| 久久久精品区二区三区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 免费高清在线观看日韩| 欧美日韩黄片免| 男女边吃奶边做爰视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 成人免费观看视频高清| 国产亚洲一区二区精品| 久久久国产一区二区| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美中文综合在线视频| 香蕉丝袜av| 久久久久久久大尺度免费视频| 免费av中文字幕在线| 亚洲九九香蕉| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 夫妻午夜视频|